【摘要】：斜紋夜蛾(Spodoptera litura,S.litura)因其高遷移率和產(chǎn)卵能力,對(duì)不同的生態(tài)環(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力,已成為亟待防治的主要農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)之一。S.litura能被雙斑側(cè)溝繭蜂(Microplitis bicoloratus,M.bicoloratus)寄生,當(dāng)M.bicoloratus寄生S.litura幼蟲(chóng)時(shí),將MbBV連同一個(gè)或幾個(gè)卵一起注射進(jìn)斜紋夜蛾幼蟲(chóng)體內(nèi),MbBV感染并誘導(dǎo)血細(xì)胞凋亡,以抑制S.litura免疫反應(yīng)。親環(huán)素D(Cyclophilin,CypD)屬于親免素蛋白家族成員,最早發(fā)現(xiàn)的親免素蛋白是親免素A,其在胞質(zhì)中含量最豐富,而CypD是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一類(lèi)定位于線粒體中的親免蛋白,由核基因ppif編碼,有研究顯示CypD是線粒體膜透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)的組分和重要調(diào)節(jié)因子,通過(guò)參與調(diào)控mPTP孔道的開(kāi)放來(lái)調(diào)控細(xì)胞凋亡和非凋亡性死亡。本室前期通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn),寄生后CypD在寄主血細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào),提示CypD可能參與了M.bicoloratus寄生引起的寄主免疫抑制。為進(jìn)一步探討CypD可能參與寄主免疫反應(yīng)的分子機(jī)制,本文首先通過(guò)Western blot檢測(cè)了寄生前后寄主血細(xì)胞中CypD的表達(dá)水平和乙�；�,發(fā)現(xiàn)寄生后CypD的表達(dá)水平也顯著升高,乙�；险{(diào),血細(xì)胞凋亡也增加;其次,通過(guò)提取繭蜂中的MbBV感染Spli221細(xì)胞,出現(xiàn)了繭蜂寄生斜紋夜蛾后類(lèi)似的結(jié)果,Spli221細(xì)胞中的CypD表達(dá)水平和乙�；蕉忌�,細(xì)胞凋亡增加;第三,為確定CypD是通過(guò)發(fā)生乙�；瘏⑴c調(diào)控細(xì)胞凋亡,本研究通過(guò)比對(duì)發(fā)現(xiàn)斜紋夜蛾CypD的乙�；稽c(diǎn)為K125,以pIZT-CypD質(zhì)粒為模板通過(guò)定點(diǎn)突變構(gòu)建pIZT-CypDK125R質(zhì)粒,乙�；贵w檢測(cè)顯示,pIZTCypDK125R表達(dá)蛋白不能發(fā)生乙�；�。當(dāng)把兩種質(zhì)粒(pIZT-CypD和pIZT-CypDK125R)轉(zhuǎn)染到MbBV感染的粉紋夜蛾Hi5細(xì)胞中,發(fā)現(xiàn)pIZT-CypDK125R能顯著下調(diào)pIZTCypD引起Hi5細(xì)胞凋亡水平,這與用CypD的乙酰化抑制劑處理MbBV感染的Spl i221細(xì)胞結(jié)果類(lèi)似。最后,研究中還發(fā)現(xiàn),與pIZT-CypD表達(dá)蛋白比較,pIZT-CypDK125R表達(dá)蛋白與腺苷酸轉(zhuǎn)移酶1(Adenine nucleotide translocase 1,ANT1)的結(jié)合能力下降,寄生后寄主血細(xì)胞以及MbBV感染Spli221細(xì)胞都導(dǎo)致線粒體中的Cyt C濃度下降。這些結(jié)果提示在繭蜂寄生斜紋夜蛾的過(guò)程中,其攜帶的MbBV抑制寄主免疫反應(yīng)的途徑之一可能是通過(guò)促進(jìn)寄主血細(xì)胞CypD的表達(dá)和乙�；�,活化的CypD與線粒體膜上的ANT1結(jié)合,調(diào)控線粒體開(kāi)放,釋放Cyt C,從而導(dǎo)致血細(xì)胞的凋亡。這些研究結(jié)果為深入探討昆蟲(chóng)免疫抑制反應(yīng)的分子機(jī)理奠定了一定的基礎(chǔ)。
【圖文】：

CypDK125定點(diǎn)突變?cè)?br>

bicoloratus寄生上調(diào)S.litura中CypD表達(dá)水平和乙�；�，，誘導(dǎo)S.litura幼蟲(chóng)血淋巴凋亡水平上升
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S433.4;S476.3

【參考文獻(xiàn)】

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1 張利萍;楊長(zhǎng)瑛;王瑩萍;崔芳;張翼;;白藜蘆醇甙對(duì)大鼠心臟缺血 / 再灌注損傷的保護(hù)作用(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2008年02期

本文編號(hào)：2676257