發(fā)布時(shí)間：2020-05-19 06:05

【摘要】：霉菌毒素是霉菌在生長過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物,對人和動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性。目前,谷物和飼料中的霉菌毒素的殘留檢測方法和污染狀況已經(jīng)有了較為詳盡的報(bào)道,但有關(guān)蜂蜜中霉菌毒素的研究較為匱乏。蜂蜜中含有多種人體所需的維生素、氨基酸和微量元素等營養(yǎng)物質(zhì),因此深受人們喜愛。鑒于霉菌毒素對人體具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性、免疫毒性,甚至具有“三致”作用,亟需開發(fā)蜂蜜中霉菌毒素的準(zhǔn)確定量方法并評估其污染狀況。本研究分為兩個(gè)部分。第一部分采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UHPLC-MS/MS)建立了蜂蜜中24種主要霉菌毒素(黃曲霉毒素(AFB_1,AFB_2,AFG_1,AFG_2)、單端孢霉烯A和B族毒素(T-2,HT-2,NEO,DAS,DON,NIV,3-AcDON,15-AcDON,FuX)、玉米赤霉烯酮類(ZEN,α-ZEL,β-ZEL)、伏馬毒素(FB_1,FB_2)、交鏈孢類毒素(AOH,TeA,TEN,ALT)、桔毒素(CIT)以及展青霉素(PAT))的檢測方法。蜂蜜樣品采用乙腈/水/乙酸(19:80:1,v/v/v)稀釋提取,低溫高速離心后取上清液等步驟,以0.1%乙酸-水(含有5 mM氨水)和0.1%乙酸-乙腈為流動(dòng)相對24種霉菌毒素進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證,該方法在一定的線性范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)R~20.99,檢測限為0.01μg/kg~50μg/kg,定量限為0.05μg/kg~100μg/kg,在高(5 LOQ)、中(2 LOQ)、低(1 LOQ)三個(gè)濃度添加水平下,回收率為69.64%~101.41%,日內(nèi)變異系數(shù)為5.03%~11.83%,日間變異系數(shù)為6.04%~14.39%。本研究開發(fā)的方法具有快速高效,靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),能夠有效的對蜂蜜中的霉菌毒素進(jìn)行定性定量分析。此外,開發(fā)的方法成功應(yīng)用于我國蜂蜜中霉菌毒素污染狀況的調(diào)查,結(jié)果表明,24種霉菌毒素中只有PAT、DON和ZEN在我國蜂蜜中被檢出,但是三者在蜂蜜中檢出含量低,其危害程度仍需進(jìn)一步研究。第二部分主要研究了超高效液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜(UHPLC-Q Orbitrap)中三種掃描模式檢測蜂蜜中的24種霉菌毒素,系統(tǒng)考察了24種霉菌毒素在高分辨質(zhì)譜的三種掃描模式(Full MS/dd-MS~2,Target SIM/ddMS~2,Parallel Reaction Monitor)下的靈敏度和穩(wěn)定性。結(jié)果表明,Target SIM/ddMS~2模式下的靈敏度最佳,其中SIM模式采集的數(shù)據(jù)用于霉菌毒素的定量分析,MS~2數(shù)據(jù)用于準(zhǔn)確的定性分析。基于Target SIM/ddMS~2掃描模式建立了24種霉菌毒素的檢測方法,并對其進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明,24種霉菌毒素在其各自的線性范圍內(nèi),相關(guān)系數(shù)R~20.99,LOQ為0.1μg/kg~20μg/kg,在高(5 LOQ)、中(2 LOQ)、低(1 LOQ)三種不同濃度的添加水平下,回收率68.12%~108.65%,日內(nèi)和日間變異系數(shù)均小于13.70%。
【圖文】：

1 緒論題以及摻假摻雜等問題。高分辨質(zhì)譜的分辨率可以大于 ，質(zhì)量準(zhǔn)確度可以小于ppm，可以準(zhǔn)確的對已知物和未知物進(jìn)行篩查；對篩選出的未知化合物可以進(jìn)行二級掃描，根據(jù)碎片離子與化合物的數(shù)據(jù)庫比對確證未知化合物的信息；由于高分辨質(zhì)譜具有分辨率較高的突出優(yōu)點(diǎn)，因此對樣品前處理的要求較低，避免復(fù)雜繁瑣的前處理操作。本研究中所用到的是高分辨質(zhì)譜中的電場軌道阱質(zhì)譜( hermo,isher+xactive plus)和低分辨質(zhì)譜中的四級桿質(zhì)譜('gilent )。hermo,isher +xactive plus 是一個(gè)四級桿-靜電場軌道阱混合質(zhì)譜儀，由大氣壓離子源(' /)、離子透鏡系統(tǒng)(離子傳輸毛細(xì)管、 - ens、注入四級桿、彎曲四級桿、透鏡、傳輸八極桿)、質(zhì)量分析器(四級桿、軌道阱( rbitrap))、碰撞池(.)*)及檢測器(軌道阱( rbitrap))所組成。結(jié)構(gòu)示意圖如 - 所示。

注：(a)乙酸乙酯 水 乙酸(ethyl acetate water formic acid, , v v v)；(b)甲醇 水 乙酸(methanol water acetic acid, , v v v)；(c)乙腈 水 乙酸('cetonitrile water acetic acid, v v v)圖 - 三種提取溶液的回收率比較,ig - )omparison of recovery of three extracting solution進(jìn)一步研究超聲提取時(shí)間對目標(biāo)化合物提取率的影響，結(jié)果如圖 - 所示。研究結(jié)果表明，大部分目標(biāo)化合物的回收率隨著超聲提取時(shí)間的增加而逐漸增大，當(dāng)超聲提取時(shí)間達(dá)到 min 時(shí)添加回收率達(dá)到最高，之后隨著超聲提取時(shí)間繼續(xù)增加時(shí)回收率趨于平穩(wěn)狀態(tài)，少部分化合物的回收率隨著超聲提取時(shí)間的增加而逐漸降低原因在于隨著超聲時(shí)間的增加, 當(dāng)水分子進(jìn)入到空化氣泡后通過分解反應(yīng)能夠產(chǎn)生高氧化的活性物質(zhì), 促進(jìn)有機(jī)物的分解]。綜合考慮 種霉菌毒素，將超聲提取時(shí)間設(shè)定為 min 最佳。
【學(xué)位授予單位】：煙臺大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S896.1;O657.63

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本文編號：2670459