發(fā)布時間：2020-05-17 03:17

【摘要】：本研究以陜西佛坪國家級自然保護區(qū)巴山木竹(Bashania fargesii)葉為研究對象,鑒定巴山木竹葉提取物的化學成份,找出大熊貓(Ailuropoda melanoleuca)采食區(qū)與非采食區(qū)竹葉不同竹齡的巴山木竹葉提取物之間的化學成份差異,比較研究大熊貓主食竹體外抗氧化活性和抑菌活性的時空變化規(guī)律,結(jié)合竹葉提取物生物學活性變化規(guī)律從化學成份的角度探討影響大熊貓食物選擇的可能因素,為圈養(yǎng)大熊貓的飼養(yǎng)管理和野化大熊貓的放歸地選擇提供參考。內(nèi)容1大熊貓主食竹葉提取物(Bamboo leaf extract,BLE)制備方法學的建立通過正交試驗,確定了以乙酸乙酯為溶劑制備竹葉提取物的方法,最佳提取條件試驗條件為浸泡8 h,在90℃索氏提取18 h,提取率最高可達7.54%,平均提取率為4.04%。內(nèi)容2大熊貓主食竹葉提取物的化學成份分析與鑒定利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(Ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)結(jié)合圖譜數(shù)據(jù)庫MassBank、MoNA、Respect、GNPS對比鑒定得到大熊貓采食區(qū)不同竹齡的巴山木竹葉提取物(Extraction of bamboo leaves in feeding area,FABLE)和非采食區(qū)不同竹齡的巴山木竹葉提取物(Extraction of bamboo leaves in non-feeding area,NFABLE)中的化學成份,結(jié)果共鑒定得到12超類的化學成份。FABLE化學成份化合物數(shù)高于NFABLE,采食區(qū)一年生BLE(FABLE-1)和兩年生BLE(FABLE-2)超類總含量高于非采食區(qū)相應竹齡,多年生BLE(FABLE-3)的超類含量差異不大。在FABLE保守化合物中共有9超類84種化合物在NFABLE中未鑒定得到,其中苯丙酸類和聚酮化合物(Phenylpropanoids and polyketides,PPs)的差異較大。對竹葉提取物次生代謝產(chǎn)物(Plant secondary metabolites,PSMs)進行鑒定,在FABLE中鑒定到9種保守生物堿,其中Hydrocinchonine和Tazettine是僅在FABLE中存在的生物堿;FABLE-1、FABLE-2和FABLE-3中分別發(fā)現(xiàn)9種、7種和6種獨有生物堿,分屬于羽扇豆生物堿(Lupin alkaloids),莨菪烷生物堿(Tropane alkaloids)和麥角生物堿及衍生物(Ergoline and derivatives)等14類。在FABLE中鑒定得到124種保守PPs,分屬于四環(huán)素(Tetracyclines),芪類(Stilbenes)和苯丙酸(Phenylpropanoic acids)等15類;FABLE-1、FABLE-2和FABLE-3獨有PPs分別為34種、42種和38種。內(nèi)容3大熊貓食葉季巴山木竹葉提取物生物學活性研究采用紙片擴散法測定食葉期不同季節(jié)嫩葉BLE(≤2年)和老葉BLE(2年)對6種大熊貓腸道致病菌的抑制效果,并與20種抗生素進行對比,結(jié)果發(fā)現(xiàn)BLE與其中11種抗生素對相應菌株的抑菌圈直徑無顯著差異(P0.05);季節(jié)和海拔共同影響B(tài)LE對大腸桿菌(Escherichia coli),沙門氏菌亞利桑那亞種(Salmonella enterica sub sp.arizonae),肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的抑制效果;過渡季和冬季BLE的抑菌效果優(yōu)于春季;過渡季的嫩葉BLE在1500-1700 m表現(xiàn)出較高的抗肺炎克雷伯菌活性;1700 m以上的過渡季老葉BLE抗沙門氏菌亞利桑那亞種的活性顯著高于1500 m以下;季節(jié)顯著影響B(tài)LE對銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、腸炎沙門氏菌(Salmonella enteritidis)、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)的抑制活性(P0.05),且不同海拔BLE的康腸炎沙門氏菌活性呈現(xiàn)波浪式變化。研究結(jié)果暗示大熊貓的食物選擇可能與其食物的化學成份有關(guān),大熊貓活動的垂直遷移可能與主食竹葉的生物活性有關(guān),采食區(qū)竹葉提取物的獨有保守化合物可能是大熊貓的食物選擇影響因子之一。
【圖文】：

似乎在新陳代謝中沒有重要作用，且在植物之間的分布也各不謝產(chǎn)物與初級代謝產(chǎn)物相比，通常豐度較低或存在與特化細胞或植物次生代謝產(chǎn)物的分類生物合成途徑，PSMs 通�？煞譃槿箢悾悍宇惢衔铮祁惢衔颷2]（表 1-1）。 酚類化合物化合物廣泛存在于植物中，包括 16 種亞類（表 1-1）。根據(jù)化學要屬于苯丙酸類和聚酮化合物（Phenylpropanoids and polyketide、單寧、木質(zhì)素等，其中黃酮類分布最廣泛，占 8000 多種天然以上。黃酮類是一類低分子量化合物，母核呈 C6-C3-C6構(gòu)型排列（丙二酸酯途徑生成或莽草酸途徑生成[3]。另一大類為酚酸，該類物。一個亞類是羥基苯甲酸，包括沒食子酸、對羥基苯甲酸、原丁香酸等，它們共同具有 C6-C1結(jié)構(gòu)（圖 1-1B）。另一個亞類為有 C6-C3結(jié)構(gòu)的芳香化合物（圖 1-1C），其中咖啡因、阿魏酸、酸最為常見[4]。

的時空變化規(guī)律，結(jié)合竹葉提取物生物學活性變化規(guī)律從化學成份的角度探討影響大熊貓食物選擇的可能因素，為圈養(yǎng)大熊貓的飼養(yǎng)管理和野化大熊貓的放歸地選擇提供參考。1.4 研究內(nèi)容及技術(shù)路線1.4.1 研究內(nèi)容本研究內(nèi)容擬優(yōu)化乙酸乙酯索氏提取條件，確定最佳提取方法，制備秦嶺大熊貓食葉期巴山木竹葉提取物，并通過超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（Ultra-highperformance liquid chromatography-mass spectrometry，UPLC-MS）結(jié)合圖譜數(shù)據(jù)庫MassBank、MoNA、Respect、GNPS 對比鑒定分析竹葉提取物的化學成份，，得到大熊貓采食區(qū)和非采食區(qū)的不同竹齡竹葉提取物成份差異。然后通過 DPPH 自由基清除法分析不同海拔和不同月份的不同竹齡的巴山木竹葉提取物的抗氧化活性，利用紙片擴散法測定不同海拔和不同月份的不同竹齡的巴山木竹葉提取物對潛在腸道致病菌的生長抑制效果，并與 20 種抗生素效用比較，得到不同竹齡的大熊貓主食竹葉提取物的抗氧化活性和抗菌活性的時空變化。1.4.2 技術(shù)路線
【學位授予單位】：西華師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：O657.63;S865.3

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本文編號：2667838