【摘要】：辣椒根腐病是由疫霉菌和鐮刀菌引起的,其中鐮刀菌有腐皮鐮孢霉(Fusarium solani)、蝕脈鐮孢(Fusarium vasinfectum Atk.)等。由于多年連續(xù)種植,且長(zhǎng)期攜帶并傳播病毒的休眠孢子具有很強(qiáng)的抗逆性致使辣椒根腐病病害的發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重。解淀粉芽孢桿菌穩(wěn)定性強(qiáng)可在土壤中生存20~25年,無(wú)法通過(guò)栽培措施和殺菌劑清除。利用微生物防治辣椒根腐病,能夠減輕化學(xué)藥劑對(duì)生態(tài)環(huán)境的危害,是防治植物病害的一種環(huán)保、安全、高效、可持續(xù)的手段。本研究前期從實(shí)驗(yàn)室保藏的由秦嶺深山原始森林不同海拔高度落葉層密集的地區(qū)土壤中采集并進(jìn)行分離與篩選后得到的具有廣譜殺菌活性的10株菌株LXY-1~LXY-10。以水稻稻瘟病菌Magnaporthe oryzae、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea Pers、辣椒根腐病菌Fusarium vasinfectum等作為病原指示菌篩選出具有良好廣譜抗性的菌株LXY-6。通過(guò)形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)對(duì)菌株LXY-6進(jìn)行鑒定,通過(guò)菌落形態(tài)、電鏡觀察及參考《伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)》(BuchananGibbons,1984)和《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》(東秀珠和,2001)進(jìn)行檢索,確定菌株LXY-6為芽孢桿菌。再進(jìn)行16S rDNA鑒定和ITS序列鑒定構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)確定菌株LXY-6為解淀粉芽孢桿菌。對(duì)篩選鑒定得到的解淀粉芽孢桿菌LXY-6通過(guò)紫外、硫酸二乙酯(DES)、亞硝酸(HNO2)三種方法誘變得到4株弱溶血性菌株LXY-6-1~LXY-6-4。通過(guò)血瓊脂平板培養(yǎng)基篩選弱溶血性的突變菌株,以辣椒根腐病等病原菌測(cè)定突變?nèi)跞苎跃甑囊志钚�。其中紫外燈功�?0W,距離為20 cm誘變5min,得到的弱溶血性解淀粉芽孢桿菌LXY-6-2溶血性與抑菌活性最好,其抑菌圈直徑為24.0±1.76mm,溶血環(huán)直徑為5.0±1.31mm。并對(duì)LXY-6-2世代進(jìn)行溶血性與抗性檢測(cè),證明LXY-6-2具有穩(wěn)定的弱溶血性及抑菌活性。對(duì)LXY-6-2采用單因素變量分析法以活菌數(shù)與抑菌直徑為判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化。確定培養(yǎng)進(jìn)行到20~23 h為菌株LXY-6-2最適接種種齡、蔗糖最佳碳源、酵母浸粉為最佳氮源、PH=7、28°C-32°C為最適PH與溫度、最佳接菌量為孢懸液與液體培養(yǎng)基的體積百分比8%-10%、最佳搖床轉(zhuǎn)速為220r/min。以優(yōu)化后的培養(yǎng)條件培養(yǎng)LXY-6-2,48h后測(cè)得活菌數(shù)為(8.9±1.13)×10~8孢子/mL,抑菌圈直徑為(29.53±1.32)mm。較基礎(chǔ)培養(yǎng)基的活菌數(shù)與抑菌直徑均有提高,優(yōu)化效果明顯。本研究將LXY-6-2發(fā)酵液與50%多菌靈可濕性粉劑、50%苯菌靈可濕性粉劑、甲基硫菌靈懸浮劑進(jìn)行辣椒根腐病的防效對(duì)比。得到結(jié)論LXY-6-2發(fā)酵液的防治效果較好,末次施藥15d后達(dá)到68.40%。且LXY-6-2發(fā)酵液灌根48h后接種辣椒根腐病病原菌孢懸液處理在接菌后7d、14d、21d后的防治效果最高。證明用LXY-6-2防治辣椒根腐病時(shí)應(yīng)將LXY-6-2提前施用,對(duì)辣椒根腐病具有預(yù)防效果。LXY-6-2發(fā)酵液對(duì)辣椒根腐病具有較好防治效果,且安全環(huán)保,具有較高的經(jīng)濟(jì)效益和研究應(yīng)用價(jià)值。
【圖文】：

圖 2-1 部分拮抗菌篩選結(jié)果Fig.2-1Re-screening results of FungusA. LXY-6 與稻梨孢霉( Magnaporthe oryzae)對(duì)峙圖B. LXY-6 與灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.)對(duì)峙圖C. LXY-6 與禾谷鐮孢(Fusarium graminearum Schw.)對(duì)峙圖上拮抗效果較好的菌株 LXY-2、LXY-5、LXY-6、LXY-7、LXY-1稻瘟病菌、小麥根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、小麥赤菌進(jìn)行拮抗活性測(cè)定，對(duì)病原菌的抑制率見(jiàn)表 1�？芍� LXY-6、LXY較高，其中 LXY-6 對(duì)六種病原菌的抑制率最高，在 78%-94%。其率達(dá)到 94.98%。12

ddH2O 17.25μL。條件 95 ℃5 min，（95 ℃ 30 s，，55℃ 1 min，72℃）30 個(gè)循環(huán)，72 ℃ 5 min PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1%瓊脂糖凝膠（0.2 g 瓊脂糖+20 mL1%液+2 μL 核酸染料）電泳檢測(cè)，PCR 產(chǎn)物送測(cè)序公司測(cè)序。（上海生工生物工司）2.3 數(shù)據(jù)處理將測(cè)得的序列在 GenBank 中進(jìn)行 BLAST 核酸序列比對(duì)，通過(guò) MEGA6.1 等進(jìn)分析，并使用軟件中 Construct Neighbor -joining Tree 法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)進(jìn)行分 結(jié)果與分析1 形態(tài)學(xué)鑒定LXY-6 菌株利用梯度稀釋法得到SX孢菌落，在 LB 平板上生長(zhǎng)時(shí)菌落呈乳白色干燥粗糙有褶皺，菌落扁平，邊緣呈現(xiàn)鋸齒狀，革蘭氏陽(yáng)性菌。（見(jiàn)圖 3.1）光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡對(duì)菌種進(jìn)行觀察，菌株呈桿狀單生，周生鞭毛。（見(jiàn)圖 LXY-6 的生理生化特性試驗(yàn)（見(jiàn)表 3.1）并結(jié)合該菌株的形態(tài)特征，初步鑒定 L為芽孢桿菌屬。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S476;S436.418

【參考文獻(xiàn)】

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1 陳彥;劉長(zhǎng)遠(yuǎn);王曉紅;孫柏欣;紀(jì)明山;趙奎華;苗則彥;梁春浩;;辣椒根腐病化學(xué)防治田間試驗(yàn)[J];植物保護(hù);2008年06期

2 陳斌;李正躍;徐發(fā)華;桂富榮;和淑琪;白華楠;;新蚜蟲(chóng)癘霉對(duì)不同地區(qū)兩種體色生物型桃蚜的毒力測(cè)定[J];西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年08期

3 王奕文;胡文兵;許玲;;甜瓜果實(shí)表面生防芽孢桿菌的類群與鑒別[J];植物病理學(xué)報(bào);2008年03期

本文編號(hào)：2664894