【摘要】：梔子為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí),是江西省的道地藥材,性味苦寒,具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒的功效,是臨床上治療熱病心煩、黃疽尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒腫瘍、扭挫傷痛等證的常用藥材;在工業(yè)中,隨著人工合成色素不良影響的連續(xù)報(bào)道,梔子色素作為天然色素越來越受人們的青睞,具有廣闊的市場(chǎng)前景。梔子在全國(guó)大多數(shù)省份均有種植,褐斑病是梔子種植中常見的葉部病害,在我國(guó)發(fā)生嚴(yán)重,導(dǎo)致梔子果實(shí)產(chǎn)量下降,品質(zhì)降低,對(duì)梔子的生長(zhǎng)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅,造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,阻礙中醫(yī)藥事業(yè)的快速發(fā)展。因此,對(duì)梔子褐斑病的研究顯得尤為重要。本研究以梔子褐斑病原為研究對(duì)象,采用常規(guī)組織分離法對(duì)褐斑病原進(jìn)行分離、鑒定,并對(duì)褐斑病菌侵染梔子葉片過程中生理生化指標(biāo)的變化進(jìn)行研究,弄清梔子在病害脅迫下理化指標(biāo)的變化趨勢(shì),接著對(duì)梔子褐斑病菌的生防細(xì)菌展開研究。本研究旨在明確梔子褐斑病致病菌,研究植物病害狀態(tài)下理化指標(biāo)的變化趨勢(shì),篩選對(duì)梔子褐斑病病原具有防治作用的細(xì)菌,以期為褐斑病的生物防治提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。以典型梔子褐斑病葉片為研究對(duì)象,采用分離病原菌常用的組織分離法對(duì)褐斑病菌進(jìn)行分離、純化,按照柯赫氏法驗(yàn)證,確定梔子褐斑病的致病菌株,觀察致病菌株顯微形態(tài)特征、真菌rDNA-ITS序列結(jié)果對(duì)比分析,對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定,結(jié)果表明,從收集到的典型梔子褐斑病葉片中分離純化得到的致病菌株在平板培養(yǎng)皿中培養(yǎng)觀察,初期有白色的氣生絨毛狀菌絲,菌落白色,隨后逐漸加深呈淺褐色、深褐色,顯微鏡下觀察菌絲白色、有分支、有隔,rDNA-ITS序列分析結(jié)果Genbank中對(duì)比分析,確定該病害病原為黑孢霉菌(Nigrospora oryzae)。將分離得到的褐斑病菌侵染健康梔子葉片,測(cè)定病原侵菌染后的0-72 h小時(shí)不同時(shí)間段內(nèi)CAT、POD、SOD、PPO、PAL活性,研究梔子褐斑病侵染過程中生理生化指標(biāo)的變化,其中CAT在0-6 h活性持續(xù)升高,在6 h達(dá)到活性高峰之后緩慢減低;POD在0-12 h活性持續(xù)升高,在3 h和12 h活性高峰,隨后活性呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì);SOD在0-3 h活性先降低,而后的3 h-12 h活性持續(xù)增高,在12 h達(dá)到活性高峰,隨后緩慢降低;PPO在0-12 h活性不斷升高,在12 h活性達(dá)到高峰之后便緩慢降低;PAL在0-12 h內(nèi)活性不斷升高,在12 h活性達(dá)到高峰,隨后12-24 h活性迅速降低,隨后小幅下降。結(jié)果表明不同酶在抵抗病原侵入時(shí)或在同一時(shí)期或不同時(shí)期發(fā)生作用,產(chǎn)生抗性。選用梔子根際土壤,采用土壤系列稀釋法分離篩選細(xì)菌,對(duì)得到的細(xì)菌采用平板對(duì)峙法初步篩選對(duì)梔子褐斑病菌抑制作用的細(xì)菌,選有抑制作用的細(xì)菌制備發(fā)酵液,與PDA混勻后接種褐斑病菌,再次測(cè)定抑制率,最后取發(fā)酵液進(jìn)行葉片防治率試驗(yàn)。結(jié)果表明,菌株YN-1具有較高的防治率,其防治效率高達(dá)62.50%。對(duì)其進(jìn)行分子學(xué)鑒定,16S rDNA序列結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫對(duì)比,確定該菌株為惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)。
【圖文】：

圖 2-1 接種后病葉再分離之后的褐斑病菌落Figure 2-1 Brown spot colony after re-isolation of diseased leaves afterinoculation圖 2-2 褐斑病菌絲形態(tài)觀察（×40）Figure 2-2 MorpH ologicalobservation of brown spot（×40）3.2.2 致病性檢測(cè)健康梔子葉片在接種菌塊 48 h 內(nèi)出現(xiàn)近圓形的褐色病斑，，顏色為黃褐色至淡褐色，直徑 2mm 左右，隨后病斑慢慢變大，病斑顏色逐漸加深至深褐色，對(duì)侵染病原菌的致病梔子葉片進(jìn)行病原菌再分離，可得到相同菌落特征的病原菌。3.3 擴(kuò)增及測(cè)序提取的褐斑病病原菌 DNA 和真菌通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物電泳后在成像系統(tǒng)中觀察在 500 bp 附近質(zhì)檢有一明亮條帶，見圖 2-3。

圖 2-1 接種后病葉再分離之后的褐斑病菌落Figure 2-1 Brown spot colony after re-isolation of diseased leaves afterinoculation圖 2-2 褐斑病菌絲形態(tài)觀察（×40）Figure 2-2 MorpH ologicalobservation of brown spot（×40）3.2.2 致病性檢測(cè)健康梔子葉片在接種菌塊 48 h 內(nèi)出現(xiàn)近圓形的褐色病斑，顏色為黃褐色至淡褐色，直徑 2mm 左右，隨后病斑慢慢變大，病斑顏色逐漸加深至深褐色，對(duì)侵染病原菌的致病梔子葉片進(jìn)行病原菌再分離，可得到相同菌落特征的病原菌。3.3 擴(kuò)增及測(cè)序提取的褐斑病病原菌 DNA 和真菌通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物電泳后在成像系統(tǒng)中觀察在 500 bp 附近質(zhì)檢有一明亮條帶，見圖 2-3。
【學(xué)位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S435.671

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本文編號(hào)：2639140