【摘要】：苦瓜白粉病是危害苦瓜生產(chǎn)的重要病害,其防治的最有效措施就是抗病品種的選育和利用,但苦瓜白粉病生理小種鑒定和分子標(biāo)記輔助育種等基礎(chǔ)研究還存在著許多不足。本試驗(yàn)對(duì)供試苦瓜白粉病病菌分別采用國(guó)際通用的13個(gè)甜瓜鑒別寄主和6個(gè)苦瓜專用型鑒別寄主,兩套體系進(jìn)行鑒定,并對(duì)白粉病菌接種及菌株保存方法進(jìn)行了研究。單核苷酸多態(tài)性(SNP)被認(rèn)為是最有發(fā)展?jié)摿Φ牡谌肿訕?biāo)記,本研究利用SLAF-seq(Specific-Locus Amplified Fragment Sequencing)技術(shù),以高抗白粉病自交系MC18和高感白粉病自交系MC105及其通過(guò)抗感鑒定的雜交F:代葉片DNA為材料,對(duì)苦瓜遺傳分離群體(2個(gè)親本和30+30的混池)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,篩選到29個(gè)與目標(biāo)性狀相關(guān)聯(lián)的候選位點(diǎn)。而后利用測(cè)序得到的序列,采用四引物擴(kuò)增受阻突變體系PCR(Tetra-primer ARMS PCR)特異性擴(kuò)增的方法和酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列(CAPS)酶切的方法,開(kāi)發(fā)實(shí)用的SNP標(biāo)記,并對(duì)其反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化與驗(yàn)證。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.通過(guò)兩套鑒別體系進(jìn)行比對(duì)鑒定,初步確定廣西地區(qū)苦瓜白粉病的優(yōu)勢(shì)生理小種為S.fuliginea的生理小種1和生理小種M-4。分別用白粉孢子接種法、貼病葉法和懸浮孢子噴液法將該白粉病病原接種于寄主葉片上,觀察不同接種方法對(duì)白粉病發(fā)病的影響,結(jié)果顯示:白粉孢子接種法發(fā)病早且重;貼病葉法其次,病斑集中產(chǎn)生于貼葉處;懸液法雖發(fā)病稍晚,但發(fā)病均勻且易于鑒定。2.利用 SLAF-seq(Specific-Locus Amplified Fragment Sequencing)技術(shù)對(duì)苦瓜遺傳分離群體(2個(gè)親本和30+30的混池)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,共獲得多態(tài)性SLAF標(biāo)簽5502個(gè),多態(tài)性標(biāo)簽的比例為5.99%。對(duì)多態(tài)性SLAF標(biāo)簽進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析,篩選到29個(gè)與目標(biāo)性狀相關(guān)聯(lián)的Marker。3.利用篩選得到的29個(gè)與目標(biāo)性狀相關(guān)聯(lián)的Marker,用在線引物設(shè)計(jì)軟件http://primerl.soton.ac.uk/primrl.html進(jìn)行引物設(shè)計(jì),共設(shè)計(jì)了 46組引物。經(jīng)過(guò)對(duì)擴(kuò)增條件和擴(kuò)增體系的優(yōu)化,得出最優(yōu)Tetra-primer AMRS PCR的反應(yīng)條件為。利用優(yōu)化好的體系來(lái)對(duì)Tetra-primer AMRS PCR引物組進(jìn)行篩選,篩選獲得3組在父母本及F2代檢測(cè)到多態(tài)性的Tetra-primer AMRS PCR分子標(biāo)記引物,分型結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性好。4.利用測(cè)序得到的序列,使用在線酶切位點(diǎn)識(shí)別軟件http://helix.wustl.edu/dcaps/dcaps.html在含有關(guān)聯(lián) Marker 的候選SNP序列中篩選存在CAPS突變的位點(diǎn),挑選出合適的內(nèi)切酶,然后利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer5.0設(shè)計(jì)CAPS引物。利用優(yōu)化好的體系最后篩選出Marker8515具有酶切擴(kuò)增多態(tài)性,且分型結(jié)果穩(wěn)定,可作為CAPS標(biāo)記。
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廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文邐廣西苦瓜白粉病菌生理小種鑒定與抗白粉�。樱危蟹肿訕�(biāo)記的開(kāi)發(fā)逡逑具體操作為：取病葉上的分生孢子，用解剖針挑到于載玻片上，用３％的ＫＯＨ作逡逑延展劑，蓋上蓋玻片，在１０Ｘ４０倍的光學(xué)顯微鏡下觀察分生孢子上是否有纖維狀體，逡逑有纖維狀體的是邐（邋Ｖａｋａｌｏｕｎａｋｉｓ邋ｅｔ邋ａｌ，邋１９９４）邋0逡逑表１－２兩種主要瓜類白粉菌的形態(tài)特征逡逑Ｔａｂｌｅ邋１－２邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ｔｗｏ邋ｍａｉｎ邋ｔｙｐｅｓ邋ｏｆ邋Ｅｒｙｓｉｐｈｅ逡逑白粉菌種類邐子囊殼（ｕｍ）邐子囊和子囊孢子邐分生孢子類型邐分生孢子的萌發(fā)逡逑邐個(gè)數(shù)（個(gè)）邐方式逡逑Ｅ．ｃｉｃｌｗｒａｃｅａｒｕｍ邐生于灰黃色至邐一般子囊數(shù)邐細(xì)長(zhǎng)的圓柱形，萌發(fā)管指狀，從逡逑銹褐色菌絲層邐１０￣１５邐分生孢子上沒(méi)有分生孢子的頂端逡逑直徑８０？１４０邐子囊孢子數(shù)２邐纖維狀體邐或底部長(zhǎng)出逡逑Ｓ．ｆｕｌｉｇｉｎｅａ邐生于白色至淡邐子囊數(shù)１邐橢圓形，分生孢萌發(fā)管叉狀或頂逡逑黃色菌絲表面邐子囊孢子數(shù)８邐子上有發(fā)達(dá)的纖端膨脹，從分生逡逑邐直徑６５￣９８邐維狀體邐孢子的側(cè)面長(zhǎng)出逡逑ａｂ逡逑

序列的接頭后，對(duì)測(cè)序質(zhì)量和數(shù)據(jù)量進(jìn)行評(píng)估�？梢酝ㄟ^(guò)Ｃｏｎｔｒｏｌ數(shù)據(jù)評(píng)估酶切效率，逡逑以此判斷實(shí)驗(yàn)過(guò)程的準(zhǔn)確性和有效性。通過(guò)序列間聚類的方法，，在親本和混池中開(kāi)發(fā)逡逑ＳＬＡＦ標(biāo)簽，尋找在親本中存在多態(tài)性的ＳＬＡＦ標(biāo)簽。具體測(cè)序分析流程如圖３－２；逡逑．…＇邋．邋．逡逑ｍｍ－ｒｍ邋Ｌ——ｉｌＭＨＨ邐Ｊ邋Ｈａａ？邋Ｉ逡逑灄音？＿邐ＬＪ邋ｍｔｍｍ逡逑＇逡逑恀：）：~T饕逡逑R莼義賢跡常膊廡蚍治雋鞒體義希玻村義

本文編號(hào)：2624979