本文關(guān)鍵詞：多重熒光定量PCR檢測艱難梭菌感染的方法探索

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【摘要】：目的:近年來,隨著艱難梭菌流行菌株027等的出現(xiàn),艱難梭菌的發(fā)病率及致死率越來越高,快速、準確檢測艱難梭菌對臨床決策非常重要。本研究旨在建立一種可以同時檢測艱難梭菌主要毒素基因tcdA、tcdB的多重定量PCR方法。方法:收集2014.10-2015.03月期間臨床送檢的大便標本,進行分離培養(yǎng),可疑菌落經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸飛行時間質(zhì)譜技術(shù)及擴增16sRNA鑒定,獲得的菌株分別采用普通PCR及Taqman探針法多重定量PCR檢測艱難梭菌毒素基因tcdA、tcdB及管家基因TPI。結(jié)果:在收集到的107株符合要求的大便標本中,經(jīng)鑒定共分離出20株艱難梭菌。普通PCR檢測結(jié)果為:tcdA-tcdB-的菌株為4株,tcdA+tcdB+的菌株為16株,未發(fā)現(xiàn)tcdA-tcdB+的菌株,陽性率為18.7%。應用本研究設計的引物及探針對標準菌株進行檢測發(fā)現(xiàn)tcdA擴增效率可達91%,最低檢測限為101,TPI擴增效率僅為79%,最低檢測限為102,未能成功檢測到tcdB。Taqman探針法多重定量PCR由于TPI及tcdB探針設計不成功未能如期完成。結(jié)論:我院分離的艱難梭菌毒素基因陽性的比例較高,需引起重視;本實驗設計的引物及探針有待進一步改善。
【關(guān)鍵詞】：艱難梭菌 多重 定量 聚合酶鏈反應
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R440
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 第一部分 艱難梭菌的培養(yǎng)、鑒定及保存12-17
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 3 結(jié)果15
• 4 討論15-17
• 第二部分 普通PCR檢測艱難梭菌毒素基因tcd A、tcd B、管家基因TPI及 16s RNA17-21
• 1 材料17
• 2 方法17-19
• 3 結(jié)果19
• 4 討論19-21
• 第三部分 探索Taqman探針多重定量PCR法檢測艱難梭菌毒素基因tcd A、tcd B及管家基因TPI21-28
• 1 材料21-22
• 2 方法22-25
• 3 結(jié)果25-26
• 4 討論26-28
• 全文小結(jié)28-29
• 參考文獻29-31
• 文獻綜述31-42
• 參考文獻38-42
• 致謝42-43
• 碩士期間發(fā)表的論文43

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本文編號：951762