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兒童EB病毒感染不同臨床疾病類型免疫功能研究

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Chinese Journal of Practical Pediatrics Jun. 2013 Vol. 28 No. 6

短篇論著
文章編號(hào): 1005 - 2224 (2013) 06 - 0464 - 03

兒童 EB 病毒感染不同臨床疾病類型免疫功能研究
張 慧 a, 李

雙杰 a, 袁遠(yuǎn)宏 b, 康
摘要: 目的

楨 a, 唐

蓮 a, 譚艷芳 a
收集 2010 年 10 月至

2012 年 4 月湖南省兒童醫(yī)院內(nèi)科收治的 111 例 EBV 感染患兒, 按臨床疾病類型分為4組: 普通傳染性單核細(xì)胞增

了解 EB 病毒 (EBV) 感染患兒不同臨床疾病類型與其免疫功能的關(guān)系。方法

(EBV-HLH) 組 19 例。同時(shí)選擇正常兒童 32 例作為對(duì)照組。采用散射比濁法檢測(cè)血清免疫球蛋白和補(bǔ)體, 采用 CAEBV 組 IgE 水平高于其余 4 組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01) ; EBV-HLH 組 IgA、 IgG 水平顯著低于其余 4 組, 差 組 CD4+/CD8+較其余 3 組 EBV 感染患兒升高, 與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, B 細(xì)胞較普通 IM 組及重癥 IM 組、 對(duì)照 組降低 (P<0.05) 。結(jié)論 傷與機(jī)體免疫失衡有關(guān), 可能尤其與 CD4+及 B 細(xì)胞降低顯著相關(guān)。體液免疫降低的程度可能會(huì)提示疾病預(yù)后。 關(guān)鍵詞: EB 病毒; 細(xì)胞免疫; 體液免疫; 兒童 中圖分類號(hào): R72 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A Keywords: Epstein-Barr virus; cellular immunity; humoral immunity; children EB 病毒 (Epstain-Barr Virus, EBV) 感染的臨床表現(xiàn)及

多癥 (IM) 組 47 例; 重癥 IM 組 35 例; 慢性活動(dòng)性 EBV 感染 (CAEBV) 組 10 例; EBV 相關(guān)噬血淋巴組織細(xì)胞增多癥

流式細(xì)胞儀檢測(cè)法檢測(cè)外周血外周血淋巴細(xì)胞分化抗原 CD4、 CD8、 CD4/CD8、 CD16+56 (NK) 表達(dá)率。結(jié)果 (1) 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01) 。 (2) 普通 IM 組及重癥 IM 組 CD8+比值較其他 3 組顯著升高 (P<0.01) ; EBV-HLH 組的 兒童 EBV 感染不同疾病類型與機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)相關(guān), EBV 引起的嚴(yán)重器官功能損

CAEBV 組、 EBV-HLH 組的 C3、 C4 水平明顯低于其余3組, 且后者與其余3組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01) ; 總 T 細(xì)胞、 CD4+、 CD8+、 CD4+/CD8+、 NK 及 B 細(xì)胞均顯著下降, 差異與其余 4 組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01) ; CAEBV

轉(zhuǎn)歸與 EBV-DNA 病毒量及機(jī)體免疫功能有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào) 道, 血漿或血清中的游離 EBV-DNA 與器官損害程度、 疾病 種類、 疾病嚴(yán)重度及病死率呈正相關(guān)
[3-4]

據(jù), 根據(jù)臨床表現(xiàn)、 外周血象和血清學(xué)檢查確診[5]。伴多臟 一標(biāo)準(zhǔn), 有研究認(rèn)為伴有至少 2 個(gè)系統(tǒng)受累即可診斷為重

器功能損害的 IM 病例為重癥 IM。目前對(duì)重癥 IM 診斷無統(tǒng) 癥 IM[6]。本文對(duì)患兒有以下臨床特征時(shí)高度重視: (1) 持 著下降, 但未達(dá)到 EBV-HLH 標(biāo)準(zhǔn); (3) 轉(zhuǎn)氨酶顯著異常, 尤 其是乳酸脫氫酶 (LDH) 顯著增高; (4) 呼吸和吞咽困難, 并 發(fā)胸腔積液、 肺炎等; (5) 心電圖異常, 心肌炎。 續(xù)或反復(fù)發(fā)作的 IM 表現(xiàn), 即發(fā)熱、 持續(xù)性肝功能損害、 多發(fā) 性淋巴結(jié)病、 肝脾腫大、 全血細(xì)胞減少、 視網(wǎng)膜炎、 間質(zhì)性 肺炎、 牛痘樣水皰及蚊蟲過敏等癥狀持續(xù) 3 個(gè)月以上。 (2) EBV 感染及引起組織病理損害的證據(jù)如滿足下述標(biāo)準(zhǔn)中 ②在感染組織或外周血中檢測(cè)出 EBER-1 陽性細(xì)胞; ③外 的 1 條或 1 條以上: ①血清 EBV 抗體滴度異常增高, 包括抗 周血 PBMC 中 EBV-DNA 水平高于 102.5 拷貝/g DNA; ④受 EBV-DNA。 (3) 排除上述臨床表現(xiàn)系由其他已知疾病所致 者。 VCA-IgG≥1∶640 或抗 EA-IgG≥1∶160, VCA/EA-IgA 陽性; 累組織中 EBV-EBERS 原位雜交或 EBV-LMP1 免疫組化染 色陽性; ⑤ Southern 雜 交 在 組 織 或 外 周 血 中 檢 測(cè) 出 EBV 相關(guān)噬血淋巴組織細(xì)胞增多癥 (EBV-HLH) 的診 慢性活動(dòng)性 EBV 感染 (CAEBV) 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7-8]: (1) 有持 續(xù)高熱 (>1 周) , 肝脾明顯腫大; (2) 外周血象 2 系或 3 系顯

能變化可提示疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后。本文對(duì) EBV 感染患兒不 同臨床疾病類型及其免疫功能的關(guān)系進(jìn)行了研究, 現(xiàn)報(bào)告 如下。 1 資料與方法 臨床資料 病例來自 2010 年 10 月至 2012 年 4 月湖

, 機(jī)體細(xì)胞免疫功

1. 1

南省兒童醫(yī)院內(nèi)科收治的 111 例 EBV 感染患兒, 其中男 62 EBV 感染的不同臨床類型將 111 例患兒分為以下 4 組: 普 通傳染性單核細(xì)胞增多癥 (IM) 組 47 例; 重癥 IM 組 35 例; 慢 省兒童醫(yī)院兒?企w檢的 32 例正常兒童為對(duì)照組, 其中男 臨床資料比較, 差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

例, 女 49 例。年齡 8 個(gè)月至 15 歲, 中位年齡 4.03 歲。根據(jù) 性活動(dòng)性 EBV 感染 (CAEBV) 組 10 例; EBV 相關(guān)噬血淋巴 組織細(xì)胞增多癥 (EBV-HLH) 組 19 例。另選擇同期在湖南 21 例, 女 11 例; 年齡 2~14 歲。這5組患兒的性別、 年齡等 IM 診斷標(biāo)準(zhǔn): 以第 7 版 《實(shí)用兒科學(xué)》 的診斷標(biāo)準(zhǔn)為依

沙 410007

作者單位: 湖南省兒童醫(yī)院 a 肝病中心; b 急救中心, 湖南 長(zhǎng)

電子信箱: zhanghui_17@yahoo.com.cn

斷: (1)HLH 診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]依據(jù) HLH-2004 方案, 即符合以下 8 項(xiàng)中的 5 項(xiàng)可診斷 HLH: ①發(fā)熱, ②脾臟增大, ③外周血

中國(guó)實(shí)用兒科雜志 2013 年 6 月 第 28 卷 第 6 期

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至少兩系減少 (血紅蛋白<90 g/L、 血小板<100 × 109/L、 中
9

性粒細(xì)胞<110 × 10 /L) ; ④高甘油三酯血癥和 (或) 低纖維 蛋白原血癥, ⑤骨髓、 脾臟或淋巴結(jié)中有噬血現(xiàn)象, ⑥NK 細(xì) 胞活力降低或缺乏, ⑦血清鐵蛋白≥500 mg/L, ⑧可溶性 為具備了 EBV 感染證據(jù): ①血清學(xué)抗體檢測(cè)提示原發(fā)性急 原位雜交和 Southern 雜交等在患者血清、 骨髓、 淋巴結(jié)等受 累組織檢測(cè) EBV 為陽性。 1. 2 1. 2. 1 方法 分組 CD25 (SIL-2R) ≥2400 U/mL。 (2) 對(duì)有下列 2 項(xiàng)之一者認(rèn) 性 EBV 感染或活動(dòng)性感染; ②分子生物學(xué)方法包括 PCR、

和 CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC,再 加 入 100 μ L 抗凝靜脈血充分混勻, 共標(biāo)記 30 min, 加固定劑 30 10~20 min, 加 PBS 緩 沖 液 補(bǔ) 充 , 用 流 式 細(xì) 胞 儀 計(jì) 數(shù) 10 μL 固定 5 min 后, 加入紅細(xì)胞溶解液 1 mL 充分溶解紅細(xì)胞 000~15 000 個(gè)淋巴細(xì)胞。血清免疫球蛋白和補(bǔ)體測(cè)定采

用散射比濁法。免疫球蛋白測(cè)定試劑盒購自西門子醫(yī)學(xué)

診斷產(chǎn)品 (上海) 有限公司, Multi TEST CD3-FITC/CD16+ CD45-PerCP/CD4-APC 購自美國(guó) DB 公司。 1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 分析, P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果 2. 1 組、 EBV-HLH 組 C3、 C4 水平低于其余3組, 且 C4 與其余3 IgG 水平顯著低于其余4組患兒, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P< 0.01) 。見表 1。 血清免疫球蛋白和補(bǔ)體檢測(cè)結(jié)果的比較 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件 SPSS17.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)

CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC 和 CD3-FITC/CD8-PE/ 計(jì)分析, 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 數(shù)據(jù)處理采用方差

EBV 感染患兒均于入院 3 d 內(nèi)抽取 EBV 抗體, 進(jìn)行肝腎功 能、 心肌酶、 免疫全套 (血清免疫球蛋白和補(bǔ)體) 、 淋巴細(xì)胞 免疫功能、 EBV-DNA 定量等項(xiàng)檢查; 對(duì)入選的正常兒童, 均在征得其家長(zhǎng)同意后進(jìn)行血清免疫球蛋白和補(bǔ)體及淋 巴細(xì)胞免疫功能檢查。 1. 2. 2 指標(biāo)測(cè)定 采用德國(guó) PARTEC 流式細(xì)胞儀和全自

采用前瞻性臨床病例研究方法, 對(duì)入選

CAEBV

動(dòng)蛋白分析儀。外周血 T、 B 細(xì)胞亞群和 NK 細(xì)胞檢測(cè)采用 EDTA-K2 抗凝,, 在每支試管中加入 10 μL 的四標(biāo)記單克隆 表1
普通 IM 組 (47 例) 重癥 IM 組 (35 例) CAEBV 組 (10 例) 對(duì)照組 (32 例) EBV-HLH 組 (19 例)

組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01) ; CAEBV 組 IgE 水平高于

流式細(xì)胞儀檢測(cè)法, 檢測(cè)方法: 取 外 周 靜 脈 血 1 mL 抗 體 CD3-FITC/CD16 + CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC
IgG IgA IgM

其余 4 組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01) ; EBV-HLH 組 IgA、

不同臨床疾病類型 EBV 感染患兒及對(duì)照組免疫球蛋白和補(bǔ)體的檢測(cè) (g/L)
0.47 ± 0.58 0.45 ± 0.34 0.49 ± 0.78 0.61 ± 1.25 0.84 ± 0.62 1.02 ± 0.50 0.69 ± 0.93 0.85 ± 0.57 2.52 ± 4.03 5.46 ± 3.57 2.18 ± 3.96 2.33 ± 4.06 IgE 0.93 ± 0.34 0.67 ± 0.52 0.84 ± 0.28 0.86 ± 0.32 C3

5.38 ± 3.82 5.19 ± 3.07 5.29 ± 2.98 6.12 ± 2.52

0.31 ± 0.25 0.18 ± 0.56 0.21 ± 0.15 0.19 ± 0.35

C4

2.71 ± 2.63

0.27 ± 1.02

0.54 ± 0.52

2.10 ± 4.18

0.39 ± 0.47

0.13 ± 0.17

2. 2

(P<0.01) ; EBV-HLH 組總 T 細(xì)胞, CD4 、 CD8 、 CD4 /CD8 、
+ + + +

普通 IM 組及重癥 IM 組 CD8+ 比值較其他 3 組顯著升高

外周血 T、 B 細(xì)胞亞群和 NK 細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果的比較

義 (P<0.01) ; CAEBV 組 CD4 + 輕度升高, 但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, CD4 +/CD8 + 較其余 EBV 患兒升高, 與對(duì)照組相比差異無統(tǒng) 見表 2。 計(jì)學(xué)意義; B 細(xì)胞較 IM 患兒及對(duì)照組明顯降低 (P<0.05) 。

NK 及 B 細(xì)胞均顯著下降, 差異與其余 4 組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 表2
普通 IM 組 (47 例) 重癥 IM 組 (35 例) CAEBV 組 (10 例) 對(duì)照組 (32 例) EBV-HLH 組 (19 例) 總 T 細(xì)胞 (%) CD4+細(xì)胞 (%) 47.58 ± 9.26 40.27 ± 7.58

不同臨床疾病類型 EBV 感染患兒及對(duì)照組外周血 T、 B 細(xì)胞亞群和 NK 細(xì)胞檢測(cè)
CD8+細(xì)胞 (%) 34.54 ± 7.61 32.41 ± 8.20 1.97 ± 3.42 2.15 ± 2.17 CD4+/CD8+ 12.21 ± 8.62 9.08 ± 5.87 8.17 ± 6.31 NK 細(xì)胞 (%)

78.62 ± 8.72

68.76 ± 10.42 71.49 ± 10.08 48.35 ± 9.20

70.23 ± 11.03

49.68 ± 8.32 48.56 ± 8.78

27.42 ± 10.01

18.84 ± 9.04 17.22 ± 6.81

11.31 ± 8.16

3.18 ± 1.89

11.85 ± 7.82

16.98 ± 9.21 9.13 ± 6.93

B 細(xì)胞 (%)

3.24 ± 1.27

1.73 ± 1.06

11.02 ± 9.70

3.81 ± 7.64

17.62 ± 8.71

8.92 ± 7.26

3

討論 EB 病毒 (Epstain-Barr virus, EBV) 是一種雙鏈 DNA 病

細(xì)胞增多癥 (infectious mononucleosis, IM) 、 慢性活動(dòng)性 EBV 感染 (chronic active Epstein-Barr virus infection, CAEBV) 及 lated EBV-HLH) , 后兩種疾病是較為嚴(yán)重的 EBV 感染相關(guān)疾
[2]

在兒童, 非腫瘤性 EBV 感染疾病主要包括傳染性單核

毒, 屬于皰疹病毒科, 亞科, 人感染 EBV 后建立終身潛伏感 毒, 與鼻咽癌、 淋巴瘤等多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān) 。
[1]

染, 人群感染率超過 90%。EBV 是一種重要的腫瘤相關(guān)病

EBV 相關(guān)噬血淋巴組織細(xì)胞增生癥 (Epstein-Barr virus-re? hemophagocytic lymphohistiocytosis

syndrome,

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病, 預(yù)后不良。

感染時(shí), EBV 首先在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖, 然后感染附 以造成全身性感染。外周血單個(gè)核細(xì)胞 (PBMC) 被用來檢 測(cè) EBV 載量, PBMC 中 EBV-DNA 水平有助于 CAEBV 的診 斷, EBV-DNA 水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)。 巴細(xì)胞是 EBV 侵犯的靶細(xì)胞。EBV 感染 B 淋巴細(xì)胞, 被感 應(yīng)[10]。機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì) EBV 感染的控制作用主要通過細(xì) EBV 是一種人類普遍易感的皰疹病毒, 患兒體內(nèi) B 淋

EBV 主要通過唾液傳播, 也可經(jīng)輸血傳染。原發(fā) EBV

病機(jī)制, 持續(xù)異常免疫狀態(tài)特別是 T 細(xì)胞亞群異常與臨床 關(guān)。對(duì) EBV 感染患兒利用外周血淋巴細(xì)胞分化抗原的測(cè)

EBV 感染后細(xì)胞免疫功能紊亂是各種疾病類型的發(fā)

近的 B 淋巴細(xì)胞, 受到感染的 B 淋巴細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)可

病情惡化有關(guān)。 EBV 感染引起的嚴(yán)重器官功能損傷與機(jī) 體免疫失衡有關(guān), 可能尤其與 CD4 + 及 B 細(xì)胞降低顯著相

定動(dòng)態(tài)觀察淋巴細(xì)胞亞群變化, 對(duì)于疾病發(fā)展及預(yù)后有重 要意義。以上研究為我們更深入地辨別 EBV 感染的不同 臨床類型和尋找治療 EBV 感染的有效方法提供了重要依 據(jù)。 參考文獻(xiàn):
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染的 B 細(xì)胞傳遞病毒抗原信息, 引起強(qiáng)烈的 T 細(xì)胞免疫反 胞免疫來實(shí)現(xiàn), 目前認(rèn)為 T 細(xì)胞免疫對(duì)控制 EBV 感染起決 定性作用。各種分化抗原中, CD3 是所有 T 細(xì)胞的表面標(biāo) 上調(diào)機(jī)體的免疫功能, CD8 是細(xì)胞毒 T 細(xì)胞和抑制 T 細(xì)胞

志, CD4 則是輔助 T 細(xì)胞 (TH) 和效應(yīng) T 細(xì)胞的表面標(biāo)志, TH 通過釋放多種細(xì)胞因子輔助 B 細(xì)胞和效應(yīng) T 細(xì)胞活化, (Ts) 的表面標(biāo)志, 抑制 T 細(xì)胞 (Ts) 通過釋放抑制因子抑制 B 細(xì)胞和效應(yīng) T 細(xì)胞活化, 下調(diào)機(jī)體的免疫功能。如果患兒 存在免疫缺陷或免疫反應(yīng)過于強(qiáng)烈, 都會(huì)引起嚴(yán)重的免疫 損傷, 從而導(dǎo)致慢性活動(dòng)性感染、 器官功能衰竭等。

cell-free Epstein-Barr virus genomecopy number in patients Leuk Lymphoma, 2002, 43 (4): 173-179.

with EBV-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis[J] . [4] Yamashita N, Kimura H, Morishima T. Virological aspects of (6): 239-246. Epstein-Barr virus infections[J] . Acta Med Okayama, 2005, 59

EBV 感染后機(jī)體 T 細(xì)胞發(fā)生了強(qiáng)烈反應(yīng), 主要引起 TS 和 TC 細(xì)胞 ( CD8+細(xì)胞) 增加。CD8+細(xì)胞在急性 EBV 感染中的高 重癥 IM 組 CD4+較普通 IM 組下降, 目前有研究認(rèn)為, EBV 感 染患兒急性期存在的免疫功能紊亂可能還與 CD4 CD25
+

本研究中普通 IM 組和重癥 IM 組 CD8+比值升高, 提示

[5] 胡亞美, 江載芳. 諸福棠實(shí)用兒科學(xué) [M] . 7 版. 北京: 人民衛(wèi) [6] 蔣娟, 于潔, 王曉莉, 等. 伴有多臟器功能損害的傳染性單核 (12) : 919-922. 生出版社, 2002: 821-825.

度活化和增殖狀態(tài), 有利于發(fā)揮清除病毒作用[11]。此外,
+

細(xì)胞增多癥 51 例臨床分析 [J] . 中國(guó)實(shí)用兒科雜志, 2007, 22

Treg 細(xì)胞降低引起的免疫失衡顯著相關(guān)

[12]

在伴隨嚴(yán)重器官功能損傷的情況下較為明顯。
+

, CD4 細(xì)胞降低
+

[7] Okano M, Kawa K, Kimura H, et al. Proposed guidelines for di? agnosing chronic active epstein-barr virus infection[J] . Am J Hematol, 2005, 80: 64-69.

隨著機(jī)體自身免疫調(diào)節(jié)上調(diào) CD4 , 逐漸恢復(fù)平衡進(jìn)入恢復(fù) 期 (潛伏期) 或慢性感染期。 EBV 感染慢性活動(dòng)性轉(zhuǎn)變時(shí) 和 (或) B 細(xì)胞下降。 EBV 感染的 CTL 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞去功 能化, 變成大顆粒淋巴細(xì)胞并異常增生, 產(chǎn)生高細(xì)胞因子 的發(fā)病機(jī)制。 伴隨 CD4+上升, 原本升高的 CD8+下降, 同時(shí)伴隨明顯的 NK 血癥及巨噬細(xì)胞活化, 造成廣泛的組織損傷是 EBV-HLH EBV-HLH 組總 T 細(xì)胞、 CD4 、 CD8 、 CD4 /CD8 、 NK、 B
+ + + +

CAEBV 組 CD4+/CD8+基本正常, B 細(xì)胞比值降低, 提示

[8] 申昆玲, 段紅梅.重癥 EB 病毒感染相關(guān)疾病的現(xiàn)狀和診治進(jìn) [9] Henter JI,Horne A,Aricó M,et al. HLH-2004: diagnostic sis [J] . Pediatr Blood Cancer, 2007, 48 (2) : 124-131. 展 [J] . 小兒急救醫(yī)學(xué), 2005, 12 (5) : 342.

and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocyto?

[10] Precopio LM, Sullivan JL, Willard C, et a1.Differential kinetics and specificity of EBV—specilic CIM + and CD8 + T cells during primary infection [J] .Immunology, 2003, 170 (10) : 2590-2598.

細(xì)胞均降低, 提示噬血淋巴組織細(xì)胞增多的發(fā)生與整個(gè)細(xì)

[11] 許俐, 林書祥, 胡堅(jiān), 等. 急性和慢性 EB 病毒感染兒童外周 630-631.

胞免疫功能低下顯著相關(guān)。 EBV 感染與機(jī)體體液免疫關(guān) C3、 C4 的下降, 這是否說明體液免疫降低的程度可能可以 提示疾病的預(yù)后情況, 尚有待進(jìn)一步研究。

血 CD8 + T 細(xì)胞活化差異比較 [J] . 天津醫(yī)藥, 2010, 7 (38) :

系不明顯, 研究發(fā)現(xiàn) EBV-HLH 組伴有體液免疫 IgA、 IgG、

[12] 岳玲, 封其華. EB 病毒感染兒童 CD4+CD25+變化及意義 [J] . 中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新, 2011, 1 (8) : 1-3.

2013 - 01 - 20 收稿 2013 - 03 - 05 修回 本文編輯: 郭繼龍



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本文編號(hào):82075

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