本文關(guān)鍵詞：碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌相關(guān)基因和質(zhì)粒的分子流行病學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 鮑曼不動桿菌 碳青霉烯類 耐藥基因 bla OXA-23 CC92 質(zhì)粒

【摘要】：目的明確本地區(qū)臨床分離鮑曼不動桿菌的分布特點(diǎn)及對碳青霉烯類藥物的耐藥情況,檢測碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌的A、B、D類碳青霉烯酶相關(guān)耐藥基因。比對其分子分型,明確各菌株間的進(jìn)化關(guān)系,對碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌流行病學(xué)進(jìn)行分析。同時探索質(zhì)粒水平傳播情況,為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。材料與方法收集成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院2012~2013的110株非重復(fù)臨床鮑曼不動桿菌,采用瓊脂二倍稀釋法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)篩選出碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌;PCR鑒定鮑曼不動桿菌種屬,擴(kuò)增檢測碳青霉烯類相關(guān)基因bla KPC,bla IMP,bla VIM-1,bla SIM,bla NDM-1,bla OXA-23,bla OXA-24,bla OXA-51,bla OXA-58和bla OXA-235;選擇多位點(diǎn)序列分型來判斷親緣關(guān)系;通過接合實(shí)驗(yàn)、質(zhì)粒測序,分析碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌攜帶質(zhì)粒的功能。結(jié)果110株鮑曼不動桿菌中共有67株(60.9%,67/110)對碳青霉烯類耐藥,這67株均100%檢出rec A、16S rRNA和bla OXA-51,其中54株(80.60%,54/67)攜帶bla OXA-23。67株CRAB中共有52株(77.62%,52/67)屬于克隆復(fù)合體92(CC92),其中Sequence Type 92(ST 92)型是最主要的ST型,其次分別為ST195型、ST136型、ST843型和ST75型。從52號碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌中分離發(fā)現(xiàn)新質(zhì)粒pAB52(Genbank:KR030046),該質(zhì)粒攜帶的毒力作用元件可能與細(xì)菌生長適應(yīng)性相關(guān)。結(jié)論1.附屬醫(yī)院鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥機(jī)制與攜帶碳青霉烯酶基因bla OXA-23有關(guān);2.碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌的克隆復(fù)合體以CC92為主;3.發(fā)現(xiàn)一株碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌攜帶質(zhì)粒pAB52,該質(zhì)粒中的毒力基因可能與碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌的適應(yīng)性相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：鮑曼不動桿菌 碳青霉烯類 耐藥基因 bla OXA-23 CC92 質(zhì)粒
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5
【目錄】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 英文縮略語表11-12
• 前言12-15
• 第一部分 110株鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類藥物的藥敏試驗(yàn)15-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料15
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株15
• 1.1.2 試劑及儀器15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 1.2.1 菌種收集及鑒定15
• 1.2.2 最低抑菌濃度檢測15
• 1.2.3 菌株復(fù)蘇15-16
• 1.2.4 抗菌藥物的配制16
• 1.2.5 含梯度濃度抗菌藥物的MH瓊脂平板的制備16
• 1.2.6 待測菌液的制備、接種及孵育16
• 1.2.7 讀取并記錄結(jié)果16
• 1.2.8 統(tǒng)計實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)16-17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-20
• 1.3.1 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果17
• 1.3.2 標(biāo)本來源統(tǒng)計17-20
• 第二部分 碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌相關(guān)基因的研究20-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 2.2.1 基因的檢測20-22
• 2.2.2 PCR測序22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-25
• 2.3.1 rec A、16S rRNA和bla_(OXA-51)鑒定結(jié)果22
• 2.3.2 bla_(OXA-23)檢測結(jié)果22-23
• 2.3.3 其他耐藥基因檢測結(jié)果23-25
• 第三部分 多位點(diǎn)序列分型研究鮑曼不動桿菌親緣關(guān)系25-33
• 3.1 MLST研究方案25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株25
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器25-26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 3.3.1 細(xì)菌DNA模板的制備26
• 3.3.2 PCR引物合成26-27
• 3.3.4 PCR 產(chǎn)物送上海鉑尚生物技術(shù)公司測序27
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 3.4.1 MLST實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 3.4.2 CRAB29
• 3.4.3 CIAB29-30
• 3.4.4 CSAB30
• 3.4.5 與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較30-33
• 第四部分 質(zhì)粒接合實(shí)驗(yàn)研究碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌水平轉(zhuǎn)移能力33-42
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料33
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株33
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器33
• 4.2 質(zhì)粒接合33-34
• 4.3 質(zhì)粒提取34-35
• 4.4 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備35
• 4.5 電擊轉(zhuǎn)化35-36
• 4.6 質(zhì)粒分析36-38
• 4.6.1 酶切實(shí)驗(yàn)36
• 4.6.2 連接實(shí)驗(yàn)36-38
• 4.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-42
• 4.7.1 質(zhì)粒接合實(shí)驗(yàn)結(jié)果38
• 4.7.2 pAB52質(zhì)粒的發(fā)現(xiàn)38-40
• 4.7.3 數(shù)據(jù)提交40
• 4.7.4 RAST分析40-42
• 討論與結(jié)論42-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 文獻(xiàn)綜述52-69
• 參考文獻(xiàn)65-69
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果69-70
• 致謝70

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：631197