本文關(guān)鍵詞：臨床分離非傷寒沙門菌耐藥性和對(duì)頭孢曲松耐藥機(jī)制的初步研究

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【摘要】：目的研究天津地區(qū)急性腹瀉患者糞便標(biāo)本分離的非傷寒沙門菌(NTS)對(duì)常用抗菌藥物的敏感性,對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株進(jìn)行分子分型和超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBLs)基因、頭孢菌素酶(Amp C)酶基因檢測(cè),了解其對(duì)頭孢曲松耐藥的機(jī)制,為本地區(qū)治療非傷寒沙門菌感染臨床合理使用抗菌藥物和預(yù)防控制提供依據(jù)。方法1.菌株的分離鑒定和抗菌藥物敏感性試驗(yàn):對(duì)2014年5-10月間就診于天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院和天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院腸道門診的急性腹瀉患者的糞便標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng),采用生化鑒定、血清學(xué)鑒定并結(jié)合PCR檢測(cè)inv A基因確定非傷寒沙門菌。采用K-B法對(duì)所有的非傷寒沙門菌菌株進(jìn)行11種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn),對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株進(jìn)一步檢測(cè)對(duì)阿奇霉素的敏感性。2.PFGE和MLST:對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株采用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)和多位點(diǎn)序列分型(MLST)的方法進(jìn)行分子分型鑒定。PFGE采用限制性內(nèi)切酶Xba I酶切,獲得聚類分析圖譜;MLST將擴(kuò)增沙門菌的7個(gè)管家基因(thr A,pur E,suc A,his D,aro C,hem D,dna N),將測(cè)序結(jié)果與國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站比較后獲得等位基因圖譜和ST型。3.ESBLs和Amp C酶基因的檢測(cè):對(duì)頭孢曲松耐藥株和中介耐藥株采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增ESBLs基因(TEM、SHV、CTX-M、OXA)和Amp C酶基因(ACC、CMY),獲得陽(yáng)性結(jié)果后進(jìn)行DNA序列分析。結(jié)果1.生化鑒定和血清學(xué)鑒定結(jié)果與PCR擴(kuò)增inv A基因的鑒定結(jié)果一致,共分離得到非重復(fù)非傷寒沙門菌108株,88株來(lái)自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院,20株來(lái)自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院。2.108株非傷寒沙門菌中,多重耐藥率達(dá)到17.6%。對(duì)萘啶酸、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、頭孢曲松和厄他培南的敏感率依次為61.10%、68.50%、66.70%、97.10%和100.00%。3.發(fā)現(xiàn)了3株頭孢曲松不敏感菌株。其中2株頭孢曲松耐藥株為腸炎沙門菌Sa8709和Sa8771,1株頭孢曲松中介株為鼠傷寒沙門菌Sa8763,都是多重耐藥株。Sa8709分離自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院,對(duì)氨芐西林、萘啶酸、頭孢曲松和阿奇霉素耐藥,對(duì)環(huán)丙沙星中介耐藥;Sa8771分離自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院,對(duì)氨芐西林、鏈霉素、萘啶酸、頭孢曲松、頭孢他啶耐藥,對(duì)環(huán)丙沙星和左氧氟沙星中介耐藥;Sa8763分離自天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院,對(duì)氨芐西林、萘啶酸、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氯霉素、四環(huán)素和阿奇霉素耐藥,對(duì)頭孢曲松中介耐藥。4.Sa8709、Sa8771和Sa8763的PFGE帶型不同,聚類分析顯示Sa8709和Sa8771相似度較高,為91.70%,與Sa8763相似度較低,為55.80%。經(jīng)MLST分型后,Sa8709、Sa8771為ST11型,Sa8763為ST34型。5.Sa8709擴(kuò)增出符合預(yù)期長(zhǎng)度的CTX-M基因片段,Sa8771擴(kuò)增出符合預(yù)期長(zhǎng)度的CTX-M基因片段和TEM基因片段,Sa8763擴(kuò)增出符合預(yù)期長(zhǎng)度的OXA基因片段,測(cè)序結(jié)果經(jīng)與對(duì)應(yīng)的基因序列Gen Bank對(duì)比后相似性均在98%以上。結(jié)論1.本地區(qū)臨床分離的非傷寒沙門菌呈現(xiàn)一定程度的多重耐藥性,未發(fā)現(xiàn)對(duì)碳青霉烯類耐藥。2.本地區(qū)臨床分離的非傷寒沙門菌對(duì)氟喹諾酮類藥物環(huán)丙沙星和左氧氟沙星的敏感性低于70%,應(yīng)考慮重新評(píng)估氟喹諾酮類藥物是否仍適于非傷寒沙門菌感染的經(jīng)驗(yàn)治療和細(xì)菌感染性腹瀉的經(jīng)驗(yàn)治療。3.本地區(qū)出現(xiàn)了攜帶ESBLs基因?qū)ΨZ酮類、頭孢曲松和阿奇霉素都耐藥的腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌,對(duì)公眾健康構(gòu)成極大威脅。4.本地區(qū)應(yīng)持續(xù)開展對(duì)臨床分離的非傷寒沙門菌的分子分型和耐藥監(jiān)測(cè)研究。
【關(guān)鍵詞】：非傷寒沙門菌 耐藥 氟喹諾酮 廣譜頭孢菌素 多位點(diǎn)序列分型 脈沖場(chǎng)凝膠電泳 超廣譜β內(nèi)酰胺酶 頭孢菌素酶
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、非傷寒沙門菌的分離鑒定和抗菌藥物敏感性監(jiān)測(cè)17-29
• 1.1 材料和方法17-21
• 1.1.1 菌株來(lái)源17
• 1.1.2 主要試劑17-18
• 1.1.3 主要儀器18
• 1.1.4 菌株的保存18
• 1.1.5 菌株的分離和生化鑒定18-19
• 1.1.6 菌株的PCR鑒定19-20
• 1.1.7 菌株的血清學(xué)鑒定20
• 1.1.8 菌株的抗菌藥物敏感性試驗(yàn)20-21
• 1.2 結(jié)果21-24
• 1.2.1 非傷寒沙門菌株的臨床資料21
• 1.2.2 非傷寒沙門菌的分離和生化鑒定、血清學(xué)鑒定結(jié)果21
• 1.2.3 非傷寒沙門菌的PCR鑒定結(jié)果21-22
• 1.2.4 非傷寒沙門菌的藥敏試驗(yàn)結(jié)果22-24
• 1.3 討論24-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 二、非傷寒沙門菌頭孢曲松不敏感株的基因分型和超廣譜β內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)29-45
• 2.1 材料和方法29-35
• 2.1.1 菌株來(lái)源29
• 2.1.2 主要儀器29
• 2.1.3 主要試劑29-30
• 2.1.4 對(duì)頭孢曲松耐藥、中介株的阿奇霉素藥物敏感性試驗(yàn)30
• 2.1.5 脈沖場(chǎng)凝膠電泳30-32
• 2.1.6 多位點(diǎn)序列分型32-34
• 2.1.7 頭孢曲松不敏感菌株的ESBLs和AmpC的檢測(cè)34-35
• 2.2 結(jié)果35-38
• 2.2.1 菌株的基本臨床資料35-36
• 2.2.2 阿奇霉素的藥敏試驗(yàn)36
• 2.2.3 菌株的PFGE分型36
• 2.2.4 菌株的MLST分型36-37
• 2.2.5 菌株的ESBLs和AmpC基因的檢測(cè)37-38
• 2.3 討論38-44
• 2.4 小結(jié)44-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明55-56
• 綜述 非傷寒沙門菌的耐藥性和對(duì)廣譜頭孢菌素耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展56-69
• 綜述參考文獻(xiàn)61-69
• 致謝69-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷70

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