發(fā)布時(shí)間：2017-07-04 17:09

  本文關(guān)鍵詞：不對(duì)稱熒光PCR擴(kuò)增白念珠菌ITS-2基因單鏈DNA實(shí)驗(yàn)

  更多相關(guān)文章： 不對(duì)稱熒光聚合酶鏈反應(yīng) 白念珠菌 ITS-基因 單鏈DNA

【摘要】：目的比較在限制性引物不同稀釋比例條件下,不對(duì)稱熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增白念珠菌5.8S rDNA與28S rDNA間內(nèi)轉(zhuǎn)錄間區(qū)2(ITS-2)基因的單鏈DNA(ssDNA)的實(shí)際效果,探討其體系優(yōu)化方法。方法以常規(guī)PCR為對(duì)照,將20μmol/L的正向引物(P1)按照一定比例預(yù)稀釋后,分別與20μmol/L的熒光標(biāo)記反向引物(P2')組成含不同P1水平的引物對(duì),采用不對(duì)稱熒光PCR擴(kuò)增真菌ITS-2,并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳和測(cè)序分析,比較各實(shí)驗(yàn)組擴(kuò)增ssDNA的效果。結(jié)果不對(duì)稱熒光PCR成功擴(kuò)增出白念珠菌ITS-2基因的ssDNA,隨著限制性引物水平的降低,ITS-2基因的雙鏈DNA(dsDNA)條帶逐漸變淡,而ssDNA條帶逐漸變亮;在限制性引物稀釋比例達(dá)到1∶90~1∶100時(shí),ds DNA條帶已經(jīng)模糊不清,而ssDNA條帶則達(dá)到最亮。提示在此擴(kuò)增體系條件下,ssDNA拷貝數(shù)最多,為不對(duì)稱熒光PCR擴(kuò)增白念珠菌ITS-2基因ssDNA的最佳擴(kuò)增條件。PCR產(chǎn)物測(cè)序也表明,dsDNA上方的條帶為ITS-2基因的ssDNA。結(jié)論通過(guò)優(yōu)化限制性引物水平,不對(duì)稱熒光PCR可以高效地?cái)U(kuò)增白念珠菌ITS-2基因的ssDNA。
【作者單位】： 上海市臨床檢驗(yàn)中心臨床微生物室;蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 不對(duì)稱熒光聚合酶鏈反應(yīng) 白念珠菌 ITS-基因 單鏈DNA
【基金】：上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)重點(diǎn)資助項(xiàng)目(20134010) 上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(15ZR1436100)
【分類號(hào)】：R440
【正文快照】： 近年來(lái),深部真菌感染的發(fā)病率大幅增加,特別是深部絲狀真菌感染的發(fā)病率正逐年明顯增加,在某些特定人群中其發(fā)病率甚至高于酵母樣真菌感染[1]。由于深部真菌感染早期診斷困難,且不同真菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性存在較大差異[2],致使真菌引起的深部感染死亡率很高。因此,提高真菌

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：518594