本文關(guān)鍵詞：分子信標(biāo)用于活細(xì)胞內(nèi)源性mRNA檢測的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察分子信標(biāo)(molecular beacons,MB)在活細(xì)胞內(nèi)及在體水平對內(nèi)源性m RNA檢測的可行性。方法:合成增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,e GFP)的MB,模擬體內(nèi)條件,分別從MB的穩(wěn)定性、與目標(biāo)基因結(jié)合的特異性和敏感性進(jìn)行檢測,并通過在活細(xì)胞和斑馬魚胚胎內(nèi)的應(yīng)用來觀察其對內(nèi)外源性m RNA的檢測的可行性。結(jié)果:MB在37℃條件下在體外48小時內(nèi)經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定未見降解,熔解曲線結(jié)果顯示熒光強(qiáng)度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);并且只有在靶序列存在的條件下MB的信號強(qiáng)度顯著增強(qiáng),MB的信號強(qiáng)度與靶基因濃度呈正相關(guān)并能基本穩(wěn)定存在;經(jīng)e GFP和靶向e GFP的MB共轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞能看到熒光表達(dá),靶向e GFP的MB可特異性結(jié)合細(xì)胞內(nèi)e GFP的m RNA;在單細(xì)胞期斑馬魚胚胎內(nèi)共注射MB以及目標(biāo)單鏈后能觀察到熒光表達(dá)。結(jié)論:結(jié)果表明分子信標(biāo)可用于活細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性m RNA的檢測。
【作者單位】： 上海長海醫(yī)院心血管內(nèi)科;上海浦東新區(qū)公利醫(yī)院;中國人民解放軍第一一七醫(yī)院心血管中心;
【關(guān)鍵詞】： 分子信標(biāo)(MB) 內(nèi)源性 熔解曲線 SLO 斑馬魚
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81470407)
【分類號】：R3416
【正文快照】： Chinese Library Classification(CLC):R-33;Q599 Document code:AArticle ID:1673-6273(2016)17-3227-05前言MB是于1996年由Tyagi和Kramer首次共同發(fā)現(xiàn)的單鏈寡核苷酸探針,一般包括環(huán)狀區(qū)(Loop)、莖干區(qū)(Stem)、熒光基團(tuán)(fluorophore)和猝滅基團(tuán)(Quencher)四部分結(jié)構(gòu)[1]。在

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：分子信標(biāo)用于活細(xì)胞內(nèi)源性mRNA檢測的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：390280