本文關(guān)鍵詞：咪唑克生對膿毒癥小鼠的生存保護(hù)作用及其抗炎效應(yīng)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討咪唑克生對膿毒癥小鼠的生存保護(hù)作用及其抗炎效應(yīng)與抗炎機(jī)制。方法⑴將C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為對照組(生理鹽水)、模型組(腹腔注射無菌LPS,40mg/kg)、治療組(IDA 1mg/kg+LPS 40mg/kg),分別觀察各組小鼠生存狀況并及時(shí)記錄死亡時(shí)間。⑵將C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、IDA低/中/高治療組,對照組腹腔注射同等體積的生理鹽水,模型組腹腔注射LPS 10mg/kg,IDA治療組分別注射LPS 10mg/kg和不同劑量的IDA(0.3、1、3mg/kg)。在制模6h后分別收集各組小鼠血清,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測炎癥因子TNF-α、IL-6的水平;制模24小時(shí)后,各組分別收集血清及肝組織,用全自動生化分析儀檢測血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)乳酸脫氫酶(LDH)的含量,用ELISA檢測肝組織炎癥因子的水平。⑶以原代腹腔巨噬細(xì)胞和RAW264.7細(xì)胞為工具細(xì)胞,LPS為誘導(dǎo)劑構(gòu)建體外細(xì)胞炎癥模型,對照組不做任何處理,LPS組加入10μg/ml LPS,IDA組加入10μg/ml LPS和不同劑量的IDA(5、25、100μM),細(xì)胞置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞加藥刺激24h后收集上清,采用ELISA法檢測炎癥因子TNF-α、IL-6、MCP-1的含量,硝酸還原酶法檢測NO的含量;分別于LPS作用2h、4h收集細(xì)胞,檢測炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA水平;于藥物作用1h,LPS作用不同時(shí)間點(diǎn)檢測細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的表達(dá)。結(jié)果⑴生理鹽水對照組小鼠活動正常,狀態(tài)良好,生存率為100%;模型組小鼠在造模4h后陸續(xù)出現(xiàn)死亡,96h生存率僅為16.7%,與對照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001);腹腔注射咪唑克生干預(yù)后明顯提高小鼠生存率(41.7%比16.7%,P0.05)。⑵lps攻擊6h后,小鼠血清tnf-α、il-6水平均較對照組顯著升高[tnf-α(ng/l):403.96±40.98比17.50±8.68;il-6(ng/l):61400.31±7826.61比2436.30±448.89;均p㩳0.001],咪唑克生能劑量依賴性的抑制炎癥因子的升高[tnf-α(ng/l):低劑量組379.67±52.32比403.96±40.98(p=0.407),中劑量組273.17±24.77比403.96±40.98(p=0.001),高劑量組170.09±28.53比403.96±40.98(p㩳0.001);il-6(ng/l):低劑量組45516.55±5422.18比2436.30±448.89(p=0.001),中劑量組30705.32±1785.33比2436.30±448.89(p㩳0.001),高劑量組16570.81±1083.65比2436.30±448.89(p㩳0.001)]。咪唑克生能有效抑制lps攻擊小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶的異常升高:[ast(u/l):255.14±11.24比455.89±40.87;alt(u/l):53.62±5.02比85.51±5.10;ldh(u/l):700.33±53.47比2184.03±107.22,均p㩳0.01]。同時(shí),咪唑克生還可以降低肝組織的炎癥因子水平:[tnf-α(pg/mg):2353.44±367.03比3670.87±258.27(p㩳0.01);il-6(ng/l):3526.60±167.16比4618.79±352.94(p㩳0.01)]。⑶lps能刺激腹腔巨噬細(xì)胞炎癥因子tnf-α(ng/l,7259.14±320.70比28.50±27.08,p㩳0.001)、il-6(ng/l,14809.60±5852.73比1113.47±465.53,p=0.001)、mcp-1(ng/l,20847.37±1788.33比447.37±395.69,p㩳0.001)及no(μmol/l,1900±144.31比603.03±102.18,p㩳0.001)分泌增加,咪唑克生能抑制巨噬細(xì)胞tnf-α(ng/l,低劑量組4695.92±435.51比7259.14±320.70,p㩳0.001;中劑量組3999.66±316.05比7259.14±320.70,p㩳0.001;高劑量組784.4±281.90比7259.14±320.70,p㩳0.001)、il-6(ng/l,低劑量組12400.64±5270.22比14809.60±5852.73,p=0.451;中劑量組5522.79±2492.45比14809.60±5852.73,p㩳0.013;高劑量組1802.96±1534.18比14809.60±5852.73,p=0.002)、mcp-1(ng/l,低劑量組19457.90±1126.71比20847.37±1788.33,p=0.214;中劑量組11373.68±1110.21比20847.37±1788.33,p㩳0.001;高劑量組2005.26±1534.28比20847.37±1788.33,p㩳0.001)和no(μmol/l,低劑量組1739.40±100.14比1900±144.31,p=0.188;中劑量組1390.91±181.60比1900±144.31,p=0.001;高劑量組654.54±150.21比1900±144.31,p㩳0.001)的分泌,且抑制程度與咪唑克生的濃度相關(guān)。⑷咪唑克生能抑制RAW 264.7細(xì)胞炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA的升高。此外,咪唑克生使巨噬細(xì)胞NF-κBp65入核提前至15min且表達(dá)明顯增加(18.70±2.29比1.09±0.36,P0.05),但可以減少NF-κBp50核內(nèi)的表達(dá),45min時(shí)差異顯著(2.94±0.54比1.99±0.14,P0.05)。結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)中,咪唑克生表現(xiàn)出對膿毒癥小鼠的生存保護(hù)作用,提高膿毒癥小鼠的存活時(shí)間和生存率。此外,咪唑克生還能顯著減輕內(nèi)毒素攻擊小鼠全身炎癥反應(yīng)和抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子和炎癥介質(zhì)的分泌,且呈劑量依賴性。在一定范圍內(nèi),低濃度的IDA(5μmol/L)就表現(xiàn)出一定的抑制效應(yīng),高濃度(100μmol/L)抗炎效應(yīng)最明顯,其抗炎作用可能與NF-κB信號途徑有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：膿毒癥 炎癥 巨噬細(xì)胞 作用機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分 咪唑克生對膿毒癥小鼠的生存保護(hù)作用15-18
• 1 引言15
• 2 材料與方法15-16
• 2.1 材料15-16
• 2.2 方法16
• 3 結(jié)果16-17
• 3.1 LPS對小鼠生存的影響16
• 3.2 咪唑克生對膿毒癥小鼠的保護(hù)作用16-17
• 4 討論17
• 5 結(jié)論17-18
• 第二部分 咪唑克生對內(nèi)毒素攻擊小鼠及活化的巨噬細(xì)胞抗炎效應(yīng)的研究18-28
• 1 引言18
• 2 材料與方法18-23
• 2.1 材料18-19
• 2.2 方法19-23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-25
• 3.1 動物及細(xì)胞一般情況23-24
• 3.2 咪唑克生對內(nèi)毒素攻擊小鼠血清炎癥因子TNF-α、IL-6 水平的影響24
• 3.3 咪唑克生對內(nèi)毒素攻擊小鼠血清AST、ALT、LDH的影響24
• 3.4 咪唑克生對內(nèi)毒素攻擊小鼠肝組織炎癥因子TNF-α、IL-6 的影響24
• 3.5 LPS及咪唑克生對巨噬細(xì)胞活力的影響24-25
• 3.6 不同劑量咪唑克生對細(xì)胞炎癥因子水平及NO含量的影響25
• 4 討論25-26
• 5 結(jié)論26-28
• 第三部分 咪唑克生抗炎機(jī)制的研究28-41
• 1 引言28
• 2 材料與方法28-36
• 2.1 材料28-30
• 2.2 方法30-36
• 3 結(jié)果36-39
• 3.1 咪唑克生對LPS活化的RAW264.7 細(xì)胞炎癥因子蛋白水平的影響36-37
• 3.2 咪唑克生對LPS活化的RAW264.7 細(xì)胞炎癥因子mRNA的影響37-39
• 3.3 咪唑克生對LPS活化的腹腔巨噬細(xì)胞NF-κB的影響39
• 4 討論39-40
• 5 結(jié)論40-41
• 全文結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 文獻(xiàn)綜述45-58
• 參考文獻(xiàn)53-58
• 附錄58-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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4 張璐瑤;聶W

本文編號：384892