甲基轉(zhuǎn)移酶催化的DNA甲基化反應是非常重要的表觀遺傳修飾過程,在改變DNA的構(gòu)象、染色質(zhì)的結(jié)構(gòu),基因表達等生物過程中起著非常關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性和甲基化水平的異常會導致多種疾病的發(fā)生,DNA甲基轉(zhuǎn)移酶也因而成為醫(yī)學診斷及治療一些復雜疾病的重要靶標。因此,開發(fā)建立操作簡單、靈敏度高的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的檢測方法不僅在表觀遺傳等基本生物過程的研究而且在相關(guān)疾病診斷、藥物開發(fā)研究等方面具有重要意義。此外,葡萄糖是糖尿病診斷的一項重要生化指標。研究建立操作簡單、靈敏度高、價格低廉的葡萄糖定量檢測方法,對于糖尿病的治療和控制十分必要。本論文中,我們基于一些簡單、高效的核酸擴增技術(shù),以及性能優(yōu)異的Ce02納米材料,發(fā)展了分別針對甲基轉(zhuǎn)移酶及葡萄糖兩類物質(zhì)的新型熒光傳感方法。主要內(nèi)容如下:1、論文第二章,我們基于末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)介導的核酸擴增技術(shù)建立了一種新型的檢測DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的新方法。在本方法中,只需要設計一種簡單的莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA分子,其莖部含有Dam甲基轉(zhuǎn)移酶特殊識別5’-G-A-T-C-3’序列,且3’末端被磷酸封閉。當Dam甲基轉(zhuǎn)移酶作用于該莖環(huán)DNA...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 選題背景與意義
    1.2 甲基轉(zhuǎn)移酶檢測技術(shù)研究進展
        1.2.1 傳統(tǒng)的檢測方法
        1.2.2 基于功能核酸探針的檢測方法
    1.3 葡萄糖檢測技術(shù)研究進展
    1.4 本論文選題思想和主要研究內(nèi)容
        1.4.1 基于核酸末端延伸反應的甲基轉(zhuǎn)移酶的活性分析
        1.4.2 基于CeO₂的熒光傳感體系
第二章 基于核酸末端延伸反應的蛋白酶活性分析
    2.1 前言
    2.2 實驗部分
        2.2.1 儀器與試劑
        2.2.2 Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的活性檢測的實驗步驟
        2.2.3 T4多聚核苷酸磷酸激酶的活性檢測的實驗步驟
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 基于核酸末端延伸反應的Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的活性檢測原理
        2.3.2 優(yōu)化TdT酶和DpnI酶的用量
        2.3.3 基于核酸末端延伸反應的Dam甲基轉(zhuǎn)移酶活性分析
        2.3.4 基于核酸末端延伸反應的Dam甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑實驗
        2.3.5 基于核酸末端延伸反應的T4多聚核苷酸激酶的活性檢測原理
        2.3.6 優(yōu)化Tris-HCl、TdT緩沖溶液、TdT酶的濃度
        2.3.7 基于核酸末端延伸反應的T4多聚核苷酸激酶活性分析
    2.4 本章小結(jié)
第三章 基于CeO₂納米粒子的葡萄糖熒光檢測
    3.1 前言
    3.2 實驗部分
        3.2.1 儀器與試劑
        3.2.2 基于Ce³⁺/鈣黃綠素的體系檢測H₂O₂的實驗過程
        3.2.3 基于CeO₂/鈣黃綠素的體系檢測H₂O₂和葡萄糖的的實驗過程
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 檢測原理
        3.3.2 基于Ce³⁺/鈣黃綠素體系檢測H₂O₂活性分析
        3.3.3 基于CeO₂/鈣黃綠素體系的活性分析
    3.4 本章小結(jié)
結(jié)語
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間科研成果



本文編號：3813111