目的:通過(guò)活檢廢棄卵裂球胚胎結(jié)合分離外周血單個(gè)白細(xì)胞,進(jìn)行單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增。研究高通量測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建方法對(duì)DNA高通量測(cè)序測(cè)序覆蓋度、敏感性、特異性等的影響;研究不同測(cè)序深度及獲取數(shù)據(jù)量對(duì)DNA高通量測(cè)序測(cè)序覆蓋度、敏感性、特異性等的影響;建立基于單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增的基因點(diǎn)突變及染色體拷貝數(shù)變異的高通量測(cè)序方法,優(yōu)化單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物高通量測(cè)序流程。以達(dá)到在同一個(gè)檢測(cè)體系中同時(shí)完成染色體病及單基因遺傳病的診斷。為染色體病及單基因遺傳病的胚胎植入前診斷提供更為全面、經(jīng)濟(jì)及準(zhǔn)確的方法。方法:在體視鏡下分離已知致病突變位點(diǎn)的β地中海貧血患者外周血單個(gè)白細(xì)胞、活檢廢棄卵裂球胚胎。隨后進(jìn)行單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增,以單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物作為模板,對(duì)HBB基因目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增。采用兩種方法構(gòu)建高通量測(cè)序文庫(kù):(1)單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物及PCR產(chǎn)物按1:99;3:97;5:95及10:90的比例混合后,再構(gòu)建高通量測(cè)序文庫(kù);(2)單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物及PCR產(chǎn)物分別構(gòu)建高通量測(cè)序文庫(kù),兩種測(cè)序文庫(kù)按1:99;3:97;5:95及10:90的比例混合。0.1×、2×測(cè)序深度下進(jìn)行高通量測(cè)序。...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞表
引言
第一部分 研究方案可行性驗(yàn)證及實(shí)驗(yàn)流程建立
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第二部分 研究不同建庫(kù)方案、測(cè)序深度對(duì)通過(guò)高通量測(cè)序同時(shí)檢測(cè)基因點(diǎn)突變和染色體拷貝數(shù)變異的影響
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第三部分 應(yīng)用高通量測(cè)序同時(shí)檢測(cè)基因點(diǎn)突變和染色體拷貝數(shù)變異檢測(cè)方案驗(yàn)證
    1 材料
    2 方法
    3 CMA芯片檢測(cè)樣本染色體CNV
    4 結(jié)果
    5 討論
研究總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄1 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄2 在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果
致謝



本文編號(hào)：3809173