本文關(guān)鍵詞：血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)的超聲溶栓的聲學(xué)參數(shù)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:超聲溶栓(Sonothrombolysis,STL)作為一種治療血栓的新技術(shù)已經(jīng)有20年以上的研究歷史,但仍然沒有在臨床廣泛應(yīng)用。微泡介導(dǎo)的超聲溶栓雖然可以顯著提高溶栓效率,但無法進(jìn)入梗阻性血栓內(nèi)部,其增強(qiáng)空化的能力受限。本研究采用通過介入導(dǎo)管向血栓內(nèi)注射微泡和尿激酶的方法(Intraclot microbubbles mediated ultrasound thrombolysis,IMUT)溶栓,能夠使微泡和尿激酶同時(shí)局限在血栓內(nèi)部,再通過超聲激勵(lì)微泡空化產(chǎn)生聲孔效應(yīng),促進(jìn)尿激酶對血栓的滲透,從而獲得更好的溶栓效果。本課題組前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí),IMUT溶栓效果顯著優(yōu)于經(jīng)外周循環(huán)液中注射微泡的溶栓方法。而本研究的目的是尋找適合IMUT溶栓的聲學(xué)參數(shù)組合,聲壓(即峰值負(fù)壓)和超聲占空比是決定微泡空化強(qiáng)度的兩個(gè)關(guān)鍵因素,故本研究旨在探索聲壓和占空比對體外血栓溶栓率的影響。研究目的:探索血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)的超聲溶栓方法(IMUT)增強(qiáng)的體外超聲溶栓實(shí)驗(yàn)中,不同聲壓和不同占空比對IMUT超聲溶栓的影響。材料與方法:1.實(shí)驗(yàn)儀器:(1)超聲聲孔儀:發(fā)射頻率為1MHz的DCT-700型超聲聲孔儀,脈沖重復(fù)頻率設(shè)定為100Hz,聲壓范圍285k Pa-931k Pa可調(diào),占空比1-10%可調(diào)。深圳威爾德醫(yī)療電子有限公司生產(chǎn)。(2)小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng):加拿大Visual Sonics公司生產(chǎn)的Vevo2100型超高頻小動(dòng)物超聲儀,探頭頻率20MHz,具備超聲造影顯像模式。(3)倒置熒光顯微鏡:德國LEICA公司生產(chǎn)DMIRB倒置熒光顯微鏡。(4)帶側(cè)孔酒精注射針:直徑21G×200mm,穿刺針尖帶有3個(gè)側(cè)孔,日本株式會社八光醫(yī)療公司生產(chǎn)。(5)體外模擬循環(huán)實(shí)驗(yàn)裝置:由37℃恒溫水槽(底部鋪墊厚約2cm的吸聲海綿)、自制模擬循環(huán)密閉管道系統(tǒng)、精密微量蠕動(dòng)泵組成。2.主要實(shí)驗(yàn)試劑:(1)脂氟顯微泡造影劑,新橋醫(yī)院超聲科自制,微泡濃度約(7-8)×109/ml,稀釋15倍后抽取0.02ml(約含0.9-1.7×107 MBs)注入血栓樣本內(nèi)部。(2)注射用尿激酶,100000IU/瓶,廣東麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠生產(chǎn)。溶于0.9%氯化鈉注射液(中國大冢制藥有限公司)0.5ml稀釋混勻后抽取20000IU(0.1ml)備用。3.實(shí)驗(yàn)方法:制備血栓:取健康志愿者靜脈全血100份,每份1m L全血置于EP管中,在恒溫水浴箱內(nèi)孵育3h后取出,去除血清,用中性磷酸鹽緩沖液沖洗三遍。實(shí)驗(yàn)一:不同聲壓對血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)的超聲溶栓效果影響的體外實(shí)驗(yàn)研究50份新鮮人血血栓,平均分成4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對照組(n=10),均采用酒精針向血栓內(nèi)注入稀釋15倍的微泡液0.02 ml及尿激酶2萬單位后,使用超聲輻照10分鐘,占空比設(shè)定為10%,脈沖寬度1ms,實(shí)驗(yàn)1-4組的聲壓分別設(shè)定為285 k Pa、512 k Pa、708 k Pa、931 k Pa;對照組予超聲假照。實(shí)驗(yàn)二:不同占空比對血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)的超聲溶栓效果影響的體外實(shí)驗(yàn)研究50份健康者體外血栓樣本,平均分成4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對照組(n=10),均采用酒精針向血栓內(nèi)注入稀釋15倍的微泡液0.02 ml及尿激酶2萬單位后,使用超聲輻照10分鐘,聲壓設(shè)定為931k Pa,實(shí)驗(yàn)1-4組占空比分別設(shè)定為1%、2%、5%、10%;對照組不予超聲治療。不同聲壓組和不同占空比組均使用酒精針在血栓內(nèi)部注射微泡和尿激酶,用濾紙將血栓吸干后,再用電子天平稱量血栓的最初質(zhì)量(W0)。對各組血栓樣本治療后,將剩余血栓從自制模擬循環(huán)管道取出,用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)沖洗3遍,濾紙反復(fù)多次吸干后,電子天平稱取剩余血栓質(zhì)量(W1),計(jì)算并比較各組溶栓率。觀察指標(biāo)(1)溶栓率計(jì)算公式:(W0-W1)/W0×100%。(2)使用超高分辨率小動(dòng)物超聲儀(Visual Sonics Vevo2100型),分別于注射微泡和尿激酶前、超聲輻照前和輻照后觀察注射入血栓內(nèi)部微泡的分布及變化情況。(3)使用LEICA DMIRB倒置熒光顯微鏡×100光鏡下對HE染色后的正常血栓、尿激酶+微泡組血栓、不同聲壓治療組和不同占空比治療組血栓樣本的周邊及內(nèi)部情況進(jìn)行觀察。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:各組溶栓率比較,實(shí)驗(yàn)4組(931k Pa)的溶栓率(50.9±11.5%)顯著高于對照組溶栓率(22.9±10.7%)及實(shí)驗(yàn)1組(285k Pa)溶栓率(29.5±7.0%)(P0.01);而實(shí)驗(yàn)3組(708k Pa)的溶栓率(46.2±15.6%)也高于對照組溶栓率(P0.05)。但是實(shí)驗(yàn)2組(512k Pa)、實(shí)驗(yàn)3組(708k Pa)、實(shí)驗(yàn)4組(931k Pa)之間溶栓率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組血栓標(biāo)本HE染色后光鏡下觀察,假照組可見血栓溶解形成的小缺損,周邊細(xì)胞疏松帶薄而略不均勻;隨著聲壓升高,血栓溶解破壞形成的缺損逐漸變大,血栓周邊細(xì)胞疏松帶由厚薄不均到明顯增厚、甚至可見空泡形成。實(shí)驗(yàn)二:各組溶栓率比較,實(shí)驗(yàn)4組(DC=10%)的溶栓率(52.6±14.6%)、實(shí)驗(yàn)3組(DC=5%)的溶栓率(42.0±16.0)、實(shí)驗(yàn)2組(DC=2%)的溶栓率(39.5±7.9%)均與假照組有顯著差異(22.9±10.7%,P0.01);實(shí)驗(yàn)4組(DC=10%)、實(shí)驗(yàn)3組(DC=5%)均高于實(shí)驗(yàn)1組(DC=1%)的溶栓率(29.7±10.3%)(P0.05);實(shí)驗(yàn)4組(DC=10%)的溶栓率亦高于實(shí)驗(yàn)2組(DC=2%)(P0.05);實(shí)驗(yàn)4組(DC=10%)、實(shí)驗(yàn)3組(DC=5%)之間溶栓率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。HE染色后×100光鏡下觀察各組血栓標(biāo)本,單純尿激酶+微泡組其周邊纖維蛋白網(wǎng)帶厚薄均勻、連續(xù)性好,無明顯差別;隨著占空比升高,血栓周邊纖維蛋白網(wǎng)帶變細(xì)、不規(guī)則、失去正常連續(xù)性、有空泡形成并逐漸增大。單純尿激酶+微泡組,可見尿激酶作用后纖維蛋白降解形成的小空洞;隨著占空比增加,血栓溶解破壞越來越明顯、纖維蛋白降解越來越多,形成的空洞越來越大。結(jié)論:血栓內(nèi)注射微泡和尿激酶方法可以增強(qiáng)超聲溶栓,在本研究設(shè)定的參數(shù)范圍內(nèi),以聲壓708k Pa、占空比2%較為合適。
【關(guān)鍵詞】：聲學(xué)參數(shù) 血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)超聲溶栓法 溶栓率
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R454.3;R543
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 英文摘要5-9
• 中文摘要9-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 不同聲壓對血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)的超聲溶栓效果影響的體外實(shí)驗(yàn)研究14-24
• 2.1 材料與方法14-17
• 2.2 結(jié)果17-21
• 2.3 討論21-23
• 2.4 結(jié)論23-24
• 第三章 不同占空比對血栓內(nèi)微泡介導(dǎo)的超聲溶栓效果影響的體外實(shí)驗(yàn)研究24-31
• 3.1 材料與方法24-26
• 3.2 結(jié)果26-29
• 3.3 討論29-30
• 3.4 結(jié)論30-31
• 全文結(jié)論31
• 本研究的局限性與今后的研究方向31-32
• 參考文獻(xiàn)32-34
• 文獻(xiàn)綜述 超聲溶栓體外實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展34-52
• 參考文獻(xiàn)43-52
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果52-53
• 致謝53

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