目的:通過(guò)前期lncRNA基因芯片篩選,我們尋找到了與腹膜纖維化相關(guān)的關(guān)鍵性長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA-AV310809）,共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析預(yù)測(cè)其可能通過(guò)纖維化信號(hào)通路（Wnt2/β-catenin信號(hào)通路）發(fā)揮作用。本研究旨在進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討該關(guān)鍵性lncRNA在腹膜纖維化過(guò)程中的作用及具體調(diào)控機(jī)制。方法:1、體外培養(yǎng)腹膜間皮細(xì)胞系（HMrSV5）,運(yùn)用濃度為7ng/ml的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1）刺激細(xì)胞48h,建立腹膜間皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）模型。運(yùn)用Western blot檢測(cè)纖維連接蛋白（FN）、I型膠原蛋白（COL-I）、E鈣黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)變化;運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證lncRNA-AV310809表達(dá)水平的改變;通過(guò)Western blot觀察TGF-β1對(duì)Wnt2/β-catenin信號(hào)通路的影響。2、運(yùn)用TGF-β1刺激已轉(zhuǎn)染lncRNA-AV310809過(guò)表達(dá)質(zhì)�；蜿幮詫�(duì)照質(zhì)粒的HMrSV5細(xì)胞。用光鏡觀察HMrSV5細(xì)胞形態(tài)的變化;Western blot及免疫熒光檢測(cè)FN、COL-I、E-cadhe... 

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞來(lái)源
        2.1.2 試劑及耗材
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 主要儀器及耗材
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
        2.2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.5 RT- PCR檢測(cè)各組RNA的表達(dá)
        2.2.6 western blot檢測(cè)各組蛋白表達(dá)水平
        2.2.7 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.8 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        2.2.9 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 TGF-β1 誘導(dǎo)HMrSV5細(xì)胞EMT發(fā)生
    3.2 TGF-β1 刺激HMrSV5細(xì)胞后，lncRNA-AV310809表達(dá)上調(diào)
    3.3 TGF-β1 刺激HMrSV5細(xì)胞后，Wnt2/β-catenin信號(hào)通路被活化
    3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效果鑒定
    3.5 過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809促進(jìn)TGF-β1 誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞EMT發(fā)生
        3.5.1 過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809對(duì)HMrSV5細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.5.2 過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809對(duì)HMrSV5細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響
    3.6 過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809促進(jìn)TGF-β1 誘導(dǎo)的Wnt2/β-catenin信號(hào)通路的活化
    3.7 過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809對(duì)HMrSV5細(xì)胞增殖和遷移修復(fù)能力的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3654797