目的:通過前期lncRNA基因芯片篩選,我們尋找到了與腹膜纖維化相關的關鍵性長鏈非編碼RNA（lncRNA-AV310809）,共表達網(wǎng)絡分析預測其可能通過纖維化信號通路（Wnt2/β-catenin信號通路）發(fā)揮作用。本研究旨在進一步通過體外實驗探討該關鍵性lncRNA在腹膜纖維化過程中的作用及具體調(diào)控機制。方法:1、體外培養(yǎng)腹膜間皮細胞系（HMrSV5）,運用濃度為7ng/ml的轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）刺激細胞48h,建立腹膜間皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）模型。運用Western blot檢測纖維連接蛋白（FN）、I型膠原蛋白（COL-I）、E鈣黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）表達變化;運用實時定量PCR驗證lncRNA-AV310809表達水平的改變;通過Western blot觀察TGF-β1對Wnt2/β-catenin信號通路的影響。2、運用TGF-β1刺激已轉(zhuǎn)染lncRNA-AV310809過表達質(zhì)�；蜿幮詫φ召|(zhì)粒的HMrSV5細胞。用光鏡觀察HMrSV5細胞形態(tài)的變化;Western blot及免疫熒光檢測FN、COL-I、E-cadhe... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞來源
        2.1.2 試劑及耗材
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 主要儀器及耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 細胞凍存與復蘇
        2.2.3 細胞計數(shù)
        2.2.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.5 RT- PCR檢測各組RNA的表達
        2.2.6 western blot檢測各組蛋白表達水平
        2.2.7 細胞免疫熒光
        2.2.8 MTT法檢測細胞增殖
        2.2.9 細胞劃痕實驗
        2.2.10 統(tǒng)計學分析
第3章 結果
    3.1 TGF-β1 誘導HMrSV5細胞EMT發(fā)生
    3.2 TGF-β1 刺激HMrSV5細胞后，lncRNA-AV310809表達上調(diào)
    3.3 TGF-β1 刺激HMrSV5細胞后，Wnt2/β-catenin信號通路被活化
    3.4 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效果鑒定
    3.5 過表達lncRNA-AV310809促進TGF-β1 誘導的HMrSV5細胞EMT發(fā)生
        3.5.1 過表達lncRNA-AV310809對HMrSV5細胞形態(tài)的影響
        3.5.2 過表達lncRNA-AV310809對HMrSV5細胞EMT相關蛋白表達水平的影響
    3.6 過表達lncRNA-AV310809促進TGF-β1 誘導的Wnt2/β-catenin信號通路的活化
    3.7 過表達lncRNA-AV310809對HMrSV5細胞增殖和遷移修復能力的影響
第4章 討論
第5章 結論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3654797