當(dāng)前HIV-1的治療主要針對(duì)其生活史的各階段,阻斷其復(fù)制周期,然而并不能殺滅體內(nèi)游離病毒顆粒以及與宿主靶細(xì)胞基因整合的潛伏病毒。目前已廣泛應(yīng)用的高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒療法（Highly active antiretroviral therapy,HAART）雖能夠抑制患者體內(nèi)病毒復(fù)制,甚至阻斷病毒在個(gè)體間的傳播,但HIV-1病毒潛伏庫(kù)基本不受HAART藥物影響,HAART治療中斷后患者體內(nèi)病毒載量會(huì)迅速反彈。清除體內(nèi)游離病毒粒子,縮小病毒潛伏庫(kù)規(guī)模,實(shí)現(xiàn)對(duì)患者體內(nèi)HIV-1的長(zhǎng)久抑制,達(dá)到功能性治愈甚至徹底治愈是當(dāng)前HIV-1治療研究的熱點(diǎn)。近年在長(zhǎng)期慢性感染HIV-1的“精英控制者”體內(nèi)分離得到了多種具有優(yōu)異中和活性的廣譜抗體。人源化小鼠以及靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí),被動(dòng)輸入的中和抗體對(duì)HIV-1病毒呈現(xiàn)出劑量相關(guān)的預(yù)防及保護(hù)功效,將保護(hù)性HIV-1抗體長(zhǎng)期且穩(wěn)定的導(dǎo)入HIV-1患者體內(nèi)對(duì)實(shí)現(xiàn)HIV-1功能性治愈具有重要意義。在實(shí)驗(yàn)研究中我們實(shí)驗(yàn)室分離鑒定了具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的單克隆中和抗體Y498,我們將針對(duì)HIV-1包膜蛋白CD4結(jié)合區(qū)的中和抗體Y498、VRC01,針對(duì)包膜gp12... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市211工程院校985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：125 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料與方法
    (一) 實(shí)驗(yàn)材料
        1. 細(xì)胞系與培養(yǎng)基
        2. 質(zhì)粒
        3. 菌株
        4. 抗體與重組蛋白
        5. 工具酶
        6. 試劑盒
        7. 生化試劑
    (二) 儀器設(shè)備
    (三) 實(shí)驗(yàn)方法
        1. 細(xì)胞培養(yǎng)
        2. 氨基酸點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)
        3. 免疫熒光實(shí)驗(yàn)
        4. CaptureELISA
        5. HIV-1假病毒制備及病毒滴度測(cè)定
        6. IgG1形式的HIV-1中和抗體的表達(dá)與純化
        7. 基于HIV-1假病毒的中和實(shí)驗(yàn)
        8. 表達(dá)HIV-1中和抗體的AAV8載體質(zhì)粒構(gòu)建
        9. 載體質(zhì)粒的基因表達(dá)功能驗(yàn)證
        10. Fc結(jié)構(gòu)域M428L/N434S位點(diǎn)突變的載體質(zhì)粒構(gòu)建
        11. 重組AAV8病毒載體包裝與純化
        12. 重組AAV載體滴度,純度測(cè)定
        13. 純化AAV載體的體外活性鑒定
        14. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血漿中AAV載體介導(dǎo)表達(dá)的抗體濃度測(cè)定
        15. 恒河猴對(duì)AAV8載體顆粒的體液免疫反應(yīng)
        16. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    (一) Y498抗體表位預(yù)測(cè)
    (二) 點(diǎn)突變驗(yàn)證預(yù)測(cè)的表位氨基酸
    (三) CD4結(jié)合區(qū)靶向的中和抗體Y498與VRC01中和活性分析及比較
    (四) AAV8載體質(zhì)粒構(gòu)建
    (五) AAV8載體質(zhì)粒功能驗(yàn)證
    (六) 純化AAV載體的滴度、純度測(cè)定及體外細(xì)胞水平功能驗(yàn)證
    (七) AAV載體介導(dǎo)的中和抗體在BALB/c小鼠體內(nèi)的表達(dá)
    (八) BALB/c小鼠血漿的HIV-1病毒中和能力分析
    (九) AAV介導(dǎo)表達(dá)的中和抗體在恒河猴體內(nèi)的免疫治療作用
    (十) 恒河猴對(duì)AAV8載體顆粒體液免疫反應(yīng)分析
結(jié)果分析與討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
英文縮略語(yǔ)
發(fā)表論文
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鏈霉菌胞外多糖、靈芝多糖和米糠多糖對(duì)HIV gp41六股螺旋束核心結(jié)構(gòu)形成的影響[J]. 文曉蕓,吳少瑜,徐偉,呂琳,劉叔文,饒進(jìn)軍,張嘉杰,王廣發(fā),萬(wàn)山河,吳曙光.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(10)



本文編號(hào)：3627998