本文關(guān)鍵詞：iRhom2通過Notch信號通路影響機(jī)械通氣性肺損傷的機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景機(jī)械通氣是一種用于維持呼吸功能以及在各種臨床和手術(shù)情境下使病人呼吸負(fù)擔(dān)降到最低的支持性療法。然而,它可能引起肺損傷,導(dǎo)致機(jī)械通氣性肺損傷(ventilator-induced lung injury,VILI)。肺保護(hù)性通氣策略是急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)患者的標(biāo)準(zhǔn)治療手段,這使VILI的臨床意義越來越受到重視。對于需行機(jī)械通氣支持療法的ARDS以及其他重癥病人,預(yù)防和緩解VILI仍然是麻醉圍手術(shù)期醫(yī)學(xué)和危重病醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。VILI的發(fā)生機(jī)制包含了肺氣壓傷,肺容積傷,肺不張傷以及生物傷。高通氣量或高氣壓的機(jī)械通氣可通過許多不同的臨床相關(guān)機(jī)制引起促炎介質(zhì)的釋放。肺氣壓傷,肺容積傷,肺不張傷以及生物傷并不是相互排斥的,因?yàn)橥ㄟ^引起應(yīng)力破壞,前三者均可導(dǎo)致生物傷,因此生物傷成為現(xiàn)在研究的焦點(diǎn)。肺泡巨噬細(xì)胞(alveolar macrophage,AM)在免疫自身穩(wěn)定及宿主防御的維護(hù)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,并且它們是肺部暴露于傷害性刺激后促炎細(xì)胞因子的主要生產(chǎn)者。巨噬細(xì)胞能被機(jī)械通氣迅速激活,這表明它們可能在VILI的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。但機(jī)械通氣激活和調(diào)控肺泡巨噬細(xì)胞活化的機(jī)制尚未完全闡明。Notch信號活化的“三步蛋白水解模型”:首先,Notch受體在高爾基體被Furin切割組裝成成熟的異二聚體受體,隨后異二聚體受體被轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞表面與配體結(jié)合,被ADAM 10/Kuz或ADAM 17/TACE切割,最后被膜內(nèi)的γ-促分泌酶切割,引起NICD的釋放。Notch信號可以增加核因子-kappa B(NF-κB)的活化,后者被證實(shí)可以促進(jìn)VILI的發(fā)生,因此,Notch信號通路在VILI中可能也發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。此外,有實(shí)驗(yàn)證明TACE在Notch通路的激活中有顯著作用。非活動的菱形蛋白2(inactive rhomboid-like protein2,iRhom2)屬于Rhomboid蛋白家族,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)十余種Rhomboid蛋白家族成員,它們參與了各種細(xì)胞內(nèi)外的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。在巨噬細(xì)胞中,iRhom2與TACE結(jié)合并促進(jìn)其從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中排出,而缺乏iRhom2導(dǎo)致TACE從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排出失敗,阻止了TACE向細(xì)胞表面的轉(zhuǎn)運(yùn),進(jìn)一步影響了TACE的功能。由此推測,iRhom2可能通過iRhom2/TACE/Notch通路影響機(jī)械通氣性肺損傷。通過研究Notch信號通路在機(jī)械通氣性肺損傷中的作用,進(jìn)而調(diào)控肺泡巨噬細(xì)胞中的iRhom2來觀察Notch信號通路活化的程度,有利于闡明iRhom2影響機(jī)械通氣性肺損傷的作用機(jī)制,為臨床干預(yù)機(jī)械通氣性肺損傷提供新的線索和靶點(diǎn),為防治機(jī)械通氣性肺損傷提供理論依據(jù)和臨床策略。第一部分機(jī)械通氣對肺泡巨噬細(xì)胞Notch信號通路的影響目的:通過在健康的小鼠身上構(gòu)建機(jī)械通氣性肺損傷模型,就機(jī)械通氣對肺泡巨噬細(xì)胞Notch信號通路的影響進(jìn)行深入研究。方法:隨機(jī)選取3只C57BL/6小鼠為一組,共分3組(n=3),一組作為對照(Con),另一組通高潮氣量(HVT),第三組則為低潮氣量組(LVT)。在持續(xù)通氣4小時后,將小鼠的肺組織取出,通過肺組織病理學(xué)切片檢查及肺損傷評分,肺EBA滲透指數(shù),肺組織濕干重量比以及肺泡灌洗液中蛋白含量等對肺損傷的情況進(jìn)行評價和分析。對各種炎癥因子以及肺泡灌洗液中的細(xì)胞總數(shù)進(jìn)行測量,從而對肺部炎癥的反應(yīng)程度進(jìn)行評價。在持續(xù)四小時的機(jī)械通氣之后,把肺巨噬細(xì)胞進(jìn)行分離提取,并用Western Blot方法對NICD蛋白含量進(jìn)行檢測,用PCR方法檢測Hes-5 m RNA水平,從而對與Notch通路有關(guān)的蛋白表達(dá)水平進(jìn)行評價。結(jié)果:與對照組相比,高潮氣量機(jī)械通氣不僅能夠引起肺組織的損傷,還可以增加肺組織的EBA滲透指數(shù)、濕干重量比以及肺泡灌洗液中蛋白的含量,同時升高了肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及TNF-α、IL-6、MIP-2等炎癥因子的表達(dá)水平。在持續(xù)進(jìn)行四小時的高潮氣量機(jī)械通氣之后,對肺泡巨噬細(xì)胞進(jìn)行收集,Western Blot顯示細(xì)胞中NICD的蛋白水平顯著升高,RT-PCR顯示Hes-5基因的表達(dá)水平明顯升高。結(jié)論::高潮氣量機(jī)械通氣不僅可以促使小鼠肺泡巨噬細(xì)胞中與Notch信號通路有關(guān)的蛋白分子表達(dá)水平明顯升高,還對Notch信號通路具有激活作用。第二部分機(jī)械通氣性肺損傷中Notch信號通路的作用目的:研究機(jī)械通氣性肺損傷中Notch信號通路的作用。方法:隨機(jī)選取3只C57BL/6小鼠為一組,共分3組(n=3),一組作為對照(Con),另一組通高潮氣量(HVT),第三組則為DAPT組。停止機(jī)械通氣后,對病理學(xué)切片進(jìn)行檢查,評估肺損傷程度,同時檢測肺EBA滲透指數(shù)、肺泡灌洗液中蛋白含量以及肺濕干重量比,通過這些檢測對肺損傷的程度進(jìn)行評定,肺泡灌洗液中細(xì)胞計數(shù)和相應(yīng)炎癥因子的測定評估肺部的炎癥反應(yīng),對肺泡巨噬細(xì)胞進(jìn)行分離提取,通過免疫印跡試驗(yàn)的方法對NICD蛋白含量的變化進(jìn)行檢測。結(jié)果:與單純高潮氣量組相比,DAPT組的肺組織損傷程度明顯減輕。另外,DAPT組的肺EBA滲透指數(shù)、肺泡灌洗液中蛋白含量和、肺組織濕干重量比都明顯低于高潮氣量組;肺泡灌洗液中包括TNF-α、IL-6、MIP-2等在內(nèi)的炎癥因子水平也明顯低于高潮氣量組。Western Blot結(jié)果顯示DAPT組細(xì)胞中NICD蛋白水平較高潮氣量組也明顯下降。結(jié)論:Notch信號通路參與了機(jī)械通氣性肺損傷的形成,抑制該通路后能顯著減輕肺損傷程度。第三部分機(jī)械通氣性肺損傷中iRhom2對肺泡巨噬細(xì)胞Notch信號通路的影響目的:研究iRhom2對巨噬細(xì)胞中Notch信號通路的影響。方法:將RAW264.7細(xì)胞分為2組(n=3),對照組(R-Con組)以及經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染iRhom2蛋白下調(diào)的iRhom2蛋白下調(diào)組(R-iRhom2-/-),收取細(xì)胞后,通過Western Blot方法檢測細(xì)胞中NICD的表達(dá)。結(jié)果:Western Blot結(jié)果顯示iRhom2蛋白下調(diào)組(R-iRhom2-/-)細(xì)胞中NICD蛋白水平較對照組(R-Con組)明顯下降。結(jié)論:iRhom2下調(diào)可以降低巨噬細(xì)胞中Notch信號通路的活化標(biāo)志蛋白NICD的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：機(jī)械通氣性肺損傷 肺泡巨噬細(xì)胞 Notch信號通路 iRhom2
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略詞表13-15
• 前言15-19
• 第一部分 機(jī)械通氣對肺泡巨噬細(xì)胞Notch信號通路的影響19-33
• 一、實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 二、實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計及分組29
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-33
• 第二部分 機(jī)械通氣性肺損傷中Notch信號通路的作用33-38
• 一、實(shí)驗(yàn)材料33
• 二、實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計及分組34-35
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-38
• 第三部分 機(jī)械通氣性肺損傷中iRhom2對肺泡巨噬細(xì)胞Notch信號通路的影響38-43
• 一、實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 二、實(shí)驗(yàn)方法39-40
• 三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計及分組40-41
• 四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-43
• 討論43-46
• 全文總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述 機(jī)械通氣所致肺損傷的機(jī)制研究進(jìn)展51-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 碩士在讀期間發(fā)表論文57-58
• 致謝58-59

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張冬;于占革;;Notch信號通路與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年22期

2 孟曉;宋穎;劉云鵬;楊向紅;;大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞分化過程N(yùn)otch信號通路活化及欖香烯干預(yù)機(jī)制的探討[J];中華腫瘤防治雜志;2012年07期

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本文編號：360108