本文關鍵詞：鹽酸致小鼠急性肺損傷模型及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 建立一種操作簡捷可靠、劑量精確的小鼠單側肺損傷模型的方法,本研究在總結既往氣管滴注方法的基礎上,對導管、滴注手法加以改進,引入指示劑和脂多糖,通過肉眼觀察大體肺臟解剖和病理組織學變化,驗證建立及完善一種簡捷可靠、劑量精確的小鼠單側肺導管滴注方法。方法 18只雄性健康C57BL/6J小鼠按照體重隨機分為3組:(1)正常對照組(normal saline,NS組)經(jīng)導管滴注無菌生理鹽水(1μl/g體重)至小鼠左肺;(2)伊文斯蘭組(Evans blue,EB組)同樣方法滴注0.05%伊文斯蘭-生理鹽水(1μl/g體重)至小鼠左肺;(3)脂多糖組(lipopolysaccharide,LPS組)則滴注脂多糖-生理鹽水(3.5mg/Kg體重)至小鼠左肺;各組小鼠麻醉固定后,頸前皮膚消毒行氣管切開,暴露約5 mm氣管,導管經(jīng)口咽部插入左肺主支氣管,滴注無菌生理鹽水/0.05%伊文斯蘭-生理鹽水/脂多糖-生理鹽水,隨后緩慢推注約30倍液體體積的空氣,將小鼠豎直放置5分鐘后,以仰臥位放置于小動物加熱板。(1)密切觀察實施經(jīng)導管氣管滴注后小鼠的情緒、活動、飲食水等狀態(tài)的變化;(2)滴注6h時,在小鼠清醒安靜狀態(tài)下測呼吸功能(Pehn),每只小鼠適應5分鐘,待數(shù)值穩(wěn)定后檢測7~10 min;(3)滴注24 h時處死動物;取肺組織進行病理分析。結果 小鼠在經(jīng)導管行氣管內滴注后均能正常存活,解剖小鼠顯示EB組小鼠左肺均勻分布伊文斯蘭,右肺無明顯異常;插管成功率為100%,NS組和EB組小鼠呼吸功能無明顯差異(P值0.05),LPS組呼吸功能嚴重損傷,與NS組和EB組比較差異有統(tǒng)計學意義(P值0.001);NS組和EB組小鼠肺組織病理切片HE染色雙肺均無明顯病理學改變,LPS組小鼠肺出現(xiàn)嚴重急性肺損傷。結論 經(jīng)導管氣管內滴注方法制作小鼠單側肺損傷模型,操作方便、成功率高、重復性好、用藥劑量精確可靠,能夠有效的實現(xiàn)小鼠肺部精準定量、定位給藥,為臨床相關疾病的深入研究提供了一種改進的有效而實用的方法。目的 建立一種穩(wěn)定、規(guī)范的鹽酸導致小鼠急性肺損傷模型(Acute lung injury,ALI),探索酸性物質吸入性肺損傷的機制。方法 120只C57BL/6J小鼠隨機分為(hydrochloric acid,HCl)組和生理鹽水(normal saline,NS)組,每組分5個試驗時間點,即30 min、2 h、6 h、12 h和24 h。經(jīng)導管滴注0.1M HCl/NS(1μl/g體重)至左肺,檢測各時間點(30 min除外)小鼠的呼吸功能、肺濕干重比值(wet/dry weight,W/D)、支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)的白細胞計數(shù)和蛋白濃度,觀察肺組織病理學改變;免疫組化研究ALI病程中炎性細胞浸潤變化;免疫印跡檢測肺組織中炎性因子的水平。結果 12 h HCl刺激組的呼吸功能嚴重失常(P值0.01vs NS組),肺W/D明顯高于其他時間組(P值0.05)和對照組(P值0.01vs NS組);BALF蛋白濃度和白細胞總數(shù)在6 h HCl刺激組達到峰值(P值0.05vs其他時間組,P值0.01vs NS組);炎性因子IL-1β、TNF-α、NF-κB和IL-6在肺組織中表達隨HCl刺激時間逐漸升高,12 h后表達量降低;HCl刺激30 min即出現(xiàn)嗜中性粒細胞肺組織浸潤,巨噬細胞和T淋巴細胞較晚出現(xiàn)。結論 本研究通過吸入稀鹽酸模擬吸入性肺炎小鼠模型,發(fā)現(xiàn)吸入性肺炎早期即可出現(xiàn)白細胞升高而巨噬細胞出現(xiàn)時相較晚;大量炎性因子均參與了整個疾病發(fā)生發(fā)展過程。另外,本實驗經(jīng)氣管單側滴注法獲得單側吸入性肺炎的模型,更符合臨床吸入性肺炎的特點,為臨床深入研究吸入性肺炎制作了很好的動物模型。
【關鍵詞】：單側氣管滴注 伊文斯蘭 脂多糖 鹽酸 吸入性急性肺損傷 小鼠
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55;R-332
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 第一部分：經(jīng)氣管單側精確滴注法制作小鼠單側急性肺損傷模型的研究6-23
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 1 前言10-11
• 2 材料與方法11-15
• 3 結果15-18
• 4 討論18-20
• 5 結論20-21
• 參考文獻21-23
• 第二部分：鹽酸導致小鼠急性肺損傷機制研究23-56
• 中文摘要23-25
• 英文摘要25-27
• 1 前言27-28
• 2 材料與方法28-38
• 3 結果38-44
• 4 討論44-50
• 5 結論50
• 6 展望50-52
• 參考文獻52-56
• 附錄56-57
• 致謝57-58
• 綜述58-69
• 參考文獻67-69

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