【研究目的】1.研究燒傷膿毒癥患者嚴重感染時外周血中性粒細胞功能的變化,包括中性粒的細胞數量,趨化功能,以及凋亡的改變,初步揭示膿毒癥患者在嚴重感染期中性粒細胞的表型變化。2.建立CLP膿毒癥小鼠模型,體外LPS刺激小鼠骨髓中性粒細胞模型,對CLP小鼠模型骨髓中性粒細胞的趨化、凋亡及表型進行檢測研究,LPS刺激骨髓中性粒細胞體外細胞模型,使用P38抑制劑刺激中性粒細胞,初步揭示P38 MAPK信號通路對中性粒細胞表型的調節(jié)作用,為中性粒細胞在膿毒癥的發(fā)病機制中的作用提供一定的理論依據,為臨床膿毒癥的治療提供新的思路。【研究方法】1.臨床試驗部分:收集5例臨床燒傷膿毒癥患者感染期血液樣本,同期收集5例健康青年志愿者作為對照組,通過Ficoll密度梯度離心法分離然后提純中性粒細胞,通過臺盼藍染色觀察中性粒細胞活性;瑞氏染色觀察細胞形態(tài)以及CD66b染色鑒定其純度;通過瓊脂糖凝膠趨化實驗檢測趨化距離,流式細胞儀檢測中性粒細胞的凋亡比例,同時檢測中性粒細胞表面分子PD-L1（CD274）改變,行相關性分析,并對上述數據統(tǒng)計分析。2.動物模型部分:取20只雄性C57/B6小鼠按隨機原則分為假手術... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

3.1Ficoll密度梯度離心法

接著在室溫下避光孵育 15min，加入等體積 100μL4%的多聚甲定 20min，上機前再加入 200μLPBS，最后流式細胞儀檢測外純度。周血中性粒細胞瓊脂糖趨化實驗性粒細胞可以在某些趨化物的刺激下發(fā)生定向的遷移運動的特較常用的外源性趨化因子（fMLP），通過 fMLP 的作用對成人的趨化功能進行檢測。我們課題組前期的實驗結果已證實40,4實驗中，fMLP 能夠引起外周血中性粒細胞發(fā)生遷移的l/L，因此，在本實驗中我們選取最佳濃度的 fLMP 來誘導中性選用 fLMP 的刺激濃度為 0.1μmol/L。為趨化模型：

成人中性粒細胞的瑞氏染色（100×he Wright’s staining of PMNs in huma的活力細胞的活力：如果未與臺盼藍胞膜完整，可認為是活細胞；，觀察細胞可呈現藍色，說明 3 次，具體結果見表 2.3.2。 成人外周血中性粒細胞的活力活細胞數×107/mL）細胞的總數（×107/mL）0.73 0.75 0.71 0.72 0.72 0.74


本文編號：3543983