目的:亞胺培南體外誘導高毒力肺炎克雷伯菌耐藥,分析誘導前后的菌株的生理學,耐藥性和毒力特征改變,以及生物膜形成能力的變化,并進一步借助轉(zhuǎn)錄組學測序,去闡述高毒力肺炎克雷伯菌誘導耐藥后的相關(guān)關(guān)鍵基因的變化。方法:1.高毒力肺炎克雷伯菌株采用低濃度肉湯傳代法進行體外亞胺培南誘導,誘導后篩選出目的菌株,通過E-test法確認誘導后菌株的MIC值。此外,誘導前后的菌株通過16sRNA測序、PFGE等方法確定誘導前后菌株的同源性,以保證后續(xù)實驗的順利進行。2.誘導后的耐藥菌株表型表化鑒定,主要包括:高粘表型檢測、PCR檢測耐藥基因與毒力基因以及CPS的定量。3.通過血清抗性、抗中性粒細胞吞噬實驗、生物膜形成能力、體外動物實驗來檢測誘導前后的菌株毒力特征的變化,并通過轉(zhuǎn)錄組學分析相關(guān)毒力基因和耐藥基因的表達變化。結(jié)果:1.亞胺培南體外誘導高毒力肺炎克雷伯菌產(chǎn)生MIC值分別為2、4的耐藥菌株,通過16sRNA測序以及PFGE同源性分析,誘導前后的三株菌是具有同源性。2.與誘導前的高毒力肺炎克雷伯菌相比較,誘導后MIC值為2、4的耐藥菌株發(fā)生了一系列微生物學變化,如:拉絲現(xiàn)象消失、PCR檢測毒力基因如... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

誘導前后菌株同源性分析

A. BD2411 菌株 B. 誘導后菌株 BD2411-2 C. 誘導后菌株 BD2411-4MIC=0.125 MIC=2 MIC=4圖 2 誘導前后菌株對 IPN 的 MIC 值測定4.3 誘導前后菌株粘性變化

A. BD2411 B. BD2411-2 C. BD2411-4圖 3 誘導前后菌株拉絲實驗結(jié)果如圖 4 所示，拉絲實驗結(jié)果顯示，誘導前后菌株拉絲發(fā)生了變化：誘導前高毒力肺炎克雷伯菌 BD2411 拉絲長度＞5mm，為陽性，表現(xiàn)為高粘表型，誘導后的菌株 BD2411-2、BD2411-4 拉絲現(xiàn)象消失，均為非高粘表型。


本文編號：3390793