發(fā)布時間：2021-05-23 00:16

　　目的:動態(tài)觀察膿毒癥相關(guān)急性肺損傷病程演變特點,評價表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷的作用并探討潛在作用機(jī)制,為臨床治療急性肺損傷探索新的治療策略。研究方法:實驗第一部分:腹腔注射脂多糖（LPS）制備小鼠膿毒癥相關(guān)急性肺損傷模型,通過評價小鼠一般狀態(tài)、體重、肺部病理學(xué)、肺泡毛細(xì)血管屏障功能和肺臟炎癥等指標(biāo),確認(rèn)模型建立成功。動態(tài)觀察膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠在疾病不同階段（6h、24h和72h）肺部炎癥損傷的演變特點。光鏡下觀察小鼠肺組織HE染色切片,通過肺損傷評分系統(tǒng)評價肺組織學(xué)損傷的程度;通過BCA法檢測肺泡灌洗液中總蛋白濃度和小鼠肺組織濕/干重比值反映肺泡毛細(xì)血管屏障功能改變;通過檢測小鼠肺泡灌洗液中中性粒細(xì)胞計數(shù),ELISA法檢測肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）濃度評價肺部炎癥反應(yīng)情況。第二部分:以第一部分模型方法制備膿毒癥相關(guān)急性肺損傷模型,探討表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷的作用。將32只實驗小鼠分成4組:對照組（8只）,表兒茶素（EC）對照組（8只）,模型組（8只）,表兒茶素（EC）治療組（8只）。對照組小鼠腹腔注射5ml/kg生理鹽水,半小時后鼻飼生理鹽水5ml/... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠模型的建立及演變特點
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 藥物溶液配制
        2.2 研究對象和分組
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 LPS誘導(dǎo)小鼠膿毒癥相關(guān)急性肺損傷模型的建立及分組
        2.3 小鼠肺組織病理學(xué)變化及肺損傷評分
        2.4 小鼠支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計數(shù)測定
        2.5 小鼠肺濕/干重比值測定
        2.6 小鼠支氣管肺泡灌洗液中總蛋白濃度測定
        2.7 支氣管肺泡灌洗液中TNF-α濃度測定
        2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 LPS誘導(dǎo)膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠一般狀態(tài)、體重變化
        3.2 LPS誘導(dǎo)膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠病理學(xué)改變和肺損傷評分
        3.3 LPS誘導(dǎo)膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺泡毛細(xì)血管屏障功能的改變
            3.3.1 支氣管肺泡灌洗液總蛋白濃度測定
            3.3.2 肺濕/干比重(W/D)測定
        3.4 LPS誘導(dǎo)膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺臟炎癥的改變
            3.4.1 支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計數(shù)表達(dá)變化
            3.4.2 支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子TNF-α表達(dá)變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷的保護(hù)性作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
            2.1.3 實驗溶液配制
        2.2 研究對象和分組
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠模型的建立及分組
        2.3 小鼠肺組織病理學(xué)變化及肺損傷評分
        2.4 小鼠支氣管肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計數(shù)測定
        2.5 小鼠肺濕/干重比測定
        2.6 小鼠支氣管肺泡灌洗液中總蛋白濃度測定
        2.7 小鼠RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)
        2.8 RAW264.7細(xì)胞活性檢測
            2.8.1 實驗分組
            2.8.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.8.3 藥物處理
            2.8.4 CCK8細(xì)胞活性檢測
        2.9 培養(yǎng)基上清中TNF-α、IL-6及NO表達(dá)水平測定
            2.9.1 培養(yǎng)基上清中TNF-α及NO表達(dá)水平測定
            2.9.2 培養(yǎng)基上清中IL-6表達(dá)水平測定
        2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    3 結(jié)果
        3.1 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺臟病理學(xué)改變的影響
        3.2 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺泡毛細(xì)血管屏障能力的影響
            3.2.1 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠支氣管肺泡灌洗液總蛋白濃度的影響
            3.2.2 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺濕/干比重(W/D)的影響
        3.3 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺臟炎癥反應(yīng)的影響
        3.4 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠體重及生存率的影響
        3.5 RAW264.7細(xì)胞細(xì)胞活力檢測
        3.6 表兒茶素對LPS誘導(dǎo)下RAW264.7細(xì)胞生成TNF-α的影響及量效關(guān)系
        3.7 表兒茶素對LPS誘導(dǎo)下RAW264.7細(xì)胞生成NO的影響及量效關(guān)系
        3.8 表兒茶素對LPS誘導(dǎo)下RAW264.7細(xì)胞生成IL-6的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 表兒茶素通過P38MAPK信號通路調(diào)節(jié)膿毒癥相關(guān)急性肺損傷炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象和分組
            2.2.1 研究對象
            2.2.2 膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠模型的建立及分組
        2.3 膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺組織基因檢測
            2.3.1 樣品破碎勻漿
            2.3.2 總RNA提取及DNA消化
            2.3.3 RNA定量
            2.3.4 cDNA合成
            2.3.5 實時熒光定量PCR
        2.4 Westernblot檢測肺組織中蛋白表達(dá)情況
            2.4.1 小鼠肺組織總蛋白樣品的制備
            2.4.2 蛋白濃度測定
            2.4.3 配膠
            2.4.4 目的蛋白的電泳和分離
            2.4.5 轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育及顯影
        2.5 P38蛋白構(gòu)建及藥效團(tuán)分析
            2.5.1 蛋白晶體結(jié)構(gòu)總結(jié)
            2.5.2 準(zhǔn)備蛋白
            2.5.3 構(gòu)建藥效團(tuán)
            2.5.4 蛋白4L8M和表兒茶素分子對接評分
        2.6 P38蛋白激酶活性檢測
    3 結(jié)果
        3.1 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺組織基因表達(dá)的影響
        3.2 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺組織P38及磷酸化P38蛋白表達(dá)的影響
        3.3 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺組織JNK、ERK1/2及磷酸化JNK、ERK1/2蛋白表達(dá)的影響
        3.4 表兒茶素對膿毒癥相關(guān)急性肺損傷小鼠肺組織c-Jun及磷酸化c-Jun蛋白表達(dá)的影響
        3.5 P38α蛋白構(gòu)建及藥效團(tuán)分析
            3.5.1 P38α蛋白三維結(jié)構(gòu)及作用方式
            3.5.2 P38α蛋白藥效團(tuán)分析結(jié)果
            3.5.3 表兒茶素與Pharmacophore_04分子對接結(jié)果
            3.5.4 以轉(zhuǎn)錄因子ATF2為底物檢測表兒茶素對P38α蛋白激酶的抑制作用
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)



本文編號：3201919