目的1.通過(guò)應(yīng)用羧基磁珠與外泌體表面蛋白相應(yīng)的抗體偶聯(lián),運(yùn)用免疫法進(jìn)行血清外泌體的捕獲,建立一種利用免疫磁珠捕獲外泌體的方法。2.通過(guò)制備的免疫磁珠對(duì)外泌體進(jìn)行捕獲后,以磁珠做為固相載體,以外泌體類(lèi)似為抗原,構(gòu)建雙抗體夾心體系,探索雙抗體夾心法在制備的免疫磁珠上是否適用。方法1.免疫磁珠的制備:篩選免疫磁珠制備的工藝和制備中所需的最適抗體體積,運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)羧基一步法和羧基兩步法兩種工藝,以及抗體（濃度:1μg/μl）體積為10μl,15μl和20μl條件下制備的免疫磁珠的效率,檢測(cè)OD值,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)三次,取其均數(shù),數(shù)據(jù)以x描述,兩組實(shí)驗(yàn)空白對(duì)照組均為未偶聯(lián)任何抗體的空白磁珠。實(shí)驗(yàn)中所用抗體為單克隆鼠抗CD-63。2.免疫磁珠法捕獲外泌體:收集河南省人民醫(yī)院健康體檢者血清20例,用制備的免疫磁珠根據(jù)抗原抗體特異性吸附原理捕獲血清中的外泌體。設(shè)置對(duì)照組為經(jīng)過(guò)同樣操作步驟,偶聯(lián)外泌體不相關(guān)抗體的磁珠,選用抗體為乙肝表面抗體。3.對(duì)捕獲的結(jié)果進(jìn)行鑒定:透射電子顯微鏡觀察外泌體的形態(tài)和大小;Western blot分析外泌體的標(biāo)志蛋白,Western blot所分析的蛋白為跨膜蛋白... 

【文章來(lái)源】：河南中醫(yī)藥大學(xué)河南省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料與方法
    1.研究對(duì)象
    2.實(shí)驗(yàn)材料
    3.實(shí)驗(yàn)方法
結(jié)果
    1.磁珠偶聯(lián)工藝篩選結(jié)果
    2.磁珠偶聯(lián)抗體濃度篩選結(jié)果
    3.磁珠提取外泌體結(jié)果
    4.驗(yàn)證雙抗體夾心法是否適用結(jié)果
    5
    6
    7
    8
    9
討論
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄2


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]結(jié)直腸癌患者血清外泌體代替腫瘤組織檢測(cè)K-Ras基因突變的研究[J]. 崔琮,靳楊,譚招麗,王巖,王友亮,徐建明.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2017(05)



本文編號(hào)：3152366