發(fā)布時間：2021-04-13 17:53

　　解脲支原體是一種介于細菌與病毒之間的、能獨立生活的最小原核細胞型微生物,同時也是一種易引起生殖道、泌尿道感染的病原微生物。對于男性會引起前列腺炎、尿道炎、腎盂腎炎等;對于女性會引起陰道炎、子宮頸炎、盆腔炎等生殖腔道的炎性反應(yīng),是造成不孕不育、流產(chǎn)的病原體之一。當(dāng)前常用于檢測解脲支原體的培養(yǎng)法和血清學(xué)方法靈敏度低、特異性差、假陽性高且耗時費力,然而,熒光定量PCR技術(shù)（FQ-PCR）因具有靈敏、快速、精確定量的優(yōu)點,開始廣泛應(yīng)用在臨床微生物檢測方面。熒光定量PCR（FQ-PCR）檢測技術(shù)融合了普通PCR高靈敏性、DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精確定量等優(yōu)點,能達到檢測值更為精確、特異性更加靈敏、封閉式操作污染途徑少的優(yōu)點。它通過直接檢測PCR反應(yīng)過程中熒光信號的變化,以獲取特定區(qū)段擴增產(chǎn)物定量的結(jié)果,不需要進行實驗后處理或電泳檢測,實現(xiàn)完全封閉操作,解決了普通PCR技術(shù)的諸多難題。目的:本研究建立及優(yōu)化熒光定量PCR檢測解脲支原體的反應(yīng)體系,為臨床微生物檢測提供新的技術(shù)手段。方法:1.通過比對NCBI BLAST中已有的解脲脲原體和微小脲原體UreB基因序列,選擇高度保守的區(qū)域設(shè)計引... 

【文章來源】：廣州醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

引物和探針濃度的確定-Uu的擴增注：圖5中相同顏色曲線代表同一種濃度，紅→10-1/μL，黃→10-2/μL，草綠→10-3/μL，藍綠→10-4/μL；同一種顏色中：上→引物300nmol/L，探針150nmol/L.

3.1.4 熒光定量 PCR 方法的檢測限確定和特異性分析Uu（serover 10）、Up（serover 3）標(biāo)準菌株DNA原液濃度分別經(jīng)分光光度計測定為200 ng/μL和250 ng/μL。熒光定量PCR方法的檢測限確定結(jié)果見圖7和圖8，Uu的10-1～10-5均有明顯的擴增曲線，10-6無明顯的擴增曲線，因此Uu的檢測限為0.01 ng；Up的10-1～10-5均有明顯的擴增曲線，10-6無明顯的擴增曲線，因此Uu的檢測限為0.0125 ng。經(jīng)多次重復(fù)結(jié)果穩(wěn)定。熒光定量PCR方法的特異性確定結(jié)果見圖9，以臨床分離株白色念珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、糞腸球菌、加德納菌、乳酸桿菌、人型支原體、人基因組的DNA和陰性對照均無擴增曲線，Uu和Up

3.1.4 熒光定量 PCR 方法的檢測限確定和特異性分析Uu（serover 10）、Up（serover 3）標(biāo)準菌株DNA原液濃度分別經(jīng)分光光度計測定為200 ng/μL和250 ng/μL。熒光定量PCR方法的檢測限確定結(jié)果見圖7和圖8，Uu的10-1～10-5均有明顯的擴增曲線，10-6無明顯的擴增曲線，因此Uu的檢測限為0.01 ng；Up的10-1～10-5均有明顯的擴增曲線，10-6無明顯的擴增曲線，因此Uu的檢測限為0.0125 ng。經(jīng)多次重復(fù)結(jié)果穩(wěn)定。熒光定量PCR方法的特異性確定結(jié)果見圖9，以臨床分離株白色念珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、糞腸球菌、加德納菌、乳酸桿菌、人型支原體、人基因組的DNA和陰性對照均無擴增曲線，Uu和Up陽性?

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]泌尿生殖道解脲支原體和人型支原體感染情況及藥敏結(jié)果分析[J]. 周景欣.  中國微生態(tài)學(xué)雜志. 2017(03)
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[5]解脲支原體感染對不育男性精液質(zhì)量及生育能力的影響[J]. 劉伯龍,王娟花,唐正,張益康,秦松林.  中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志. 2016(04)
[6]微小脲原體相對定量方法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 趙縝,劉璐,趙芳,曹國君,黃燕群,季育華.  檢驗醫(yī)學(xué). 2015(09)
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[8]血清1型鴨甲型肝炎病毒實時定量PCR檢測方法的建立與初步應(yīng)用[J]. 孫慶歌,李晶梅,朱薇,肖愛芳,賴志,薛霜,高俊鋒,馬慧慧,祝春花,謝紅玲.  中國獸藥雜志. 2014(12)
[9]菠蘿凋萎相關(guān)病毒-1實時熒光定量RT-PCR檢測體系的建立與應(yīng)用[J]. 胡加誼,羅志文,李向宏,范鴻雁,周朋,章紹延,張治禮,劉志昕,何凡.  植物保護. 2014(06)
[10]改進莖環(huán)引物RT-PCR法實時定量檢測microRNA[J]. 薛慧慧,馬驍驍,朱長保,晁天柱,肖君華,周宇荀.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2014(28)

博士論文
[1]二聚體突變引物定量PCR技術(shù)的研發(fā)及其臨床應(yīng)用[D]. 夏乾峰.重慶醫(yī)科大學(xué) 2011

碩士論文
[1]重要致病性弧菌TaqMan實時PCR檢測方法的建立[D]. 王海波.山東大學(xué) 2009



本文編號：3135749