大鼠脊髓背角Ⅱ?qū)颖磉_(dá)T型鈣電流的神經(jīng)元的形態(tài)及電生理特性研究
發(fā)布時(shí)間：2021-03-09 14:25
目的:T型鈣通道,也稱為低電壓激活鈣通道,是電壓依賴型鈣離子通道家族中的成員,有三種亞型:Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3,廣泛分布于中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng),其中就包括脊髓背角II層,即膠狀質(zhì)（Substantia gelatinosa,SG）區(qū)。SG區(qū)是傷害性刺激向中樞傳遞的初級(jí)門戶,主要由興奮性和抑制性中間神經(jīng)元組成,與疼痛信息的傳遞與整合密切相關(guān)。為了進(jìn)一步探討T型鈣通道在痛信息傳遞中的作用,本實(shí)驗(yàn)研究了3-5周齡幼年SD（Sprague-Dawley）大鼠脊髓背角SG區(qū)表達(dá)T型鈣電流的神經(jīng)元的形態(tài)及電生理特性,以期為揭示T型鈣通道在疼痛傳導(dǎo)通路中的作用及機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。方法:首先,選取幼年雄性SD大鼠,制作450μm的脊髓腰骶膨大部位（L1-S3）橫切片,使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄SG神經(jīng)元的電生理特性:包括主動(dòng)膜特性、被動(dòng)膜特性以及T型鈣電流;并運(yùn)用T型鈣通道阻斷劑氯化鎳、TTA-A2等藥物,研究這些藥物對(duì)T型鈣電流阻斷的藥理學(xué)特點(diǎn),如藥物的起效時(shí)間、作用高峰時(shí)間、可逆性、劑量依賴曲線及半抑制有效濃度(IC50)等。其次,選取同上SD大鼠,制備300...
【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
脊髓切片的制備
圖 3.1 大鼠脊髓背角 SG 神經(jīng)元上 T 型鈣電流的表達(dá)。A：電流鉗模式下，記錄 SG 神經(jīng)元內(nèi)向電流的刺激方案及代表圖：Control（Aa），0.5 μM TTX（Ab），0.5 μM TTX + 1 mM NiCl2（Ac），純化相減（Ad）。B：從 A 圖中所得的電流密度隨電壓變化圖。C：電流曲線代表圖 Control（Ca），0.5 μM TTX（Cb），0.5 μM TTX + 40 μM TTA-A2（Cc），純化相減（Cd）。D：從 C 圖所得的電流密度隨電壓變化圖。3.2 T 型鈣通道阻斷劑對(duì) T 型鈣電流的影響我們接下來(lái)進(jìn)一步探究 NiCl2和 TTA-A2 對(duì) T 型鈣電流的抑制效能。如圖 3.2A-B 所示，使用 0.2 mM NiCl2使得 T 型鈣電流的幅值下降至原來(lái)的 29.6 ± 4.6%（41.6 ± 8.6 pA；P < 0.001；n = 8 cells；N = 5 SD rats；圖 3.2 C），到達(dá)抑制峰值的時(shí)間大概需要 15-20 min。這種阻斷效能可在人工腦脊液中灌流 30 min 后恢復(fù)至原來(lái)的 89.6 ± 3.9%（36.8 ± 7.4 pA；P = 0.063；n = 8 cells；N = 5 SD rats；圖 3.2 C）。使用 40 μM TTA-A2 使 T 型鈣電流幅值降至原來(lái)的 12.1 ± 4.7%（153.9± 68.1 pA；P = 0.004；n = 3 cells；N=2 SD rats；圖 3.2 D-F）。經(jīng)過(guò)人工腦脊液
15圖3.2 SG神經(jīng)元上T型鈣電流的藥理學(xué)特性。A：T型鈣電流代表圖Control，0.2 mM NiCl2，Washout 及重疊曲線。T 型鈣電流的激活是通過(guò)每 10 s 一次的脈沖刺激：從鉗制電位-110 mV（500 ms）階躍至測(cè)試電位-50 mV（200 ms）。B：NiCl2阻斷 T 型鈣電流的時(shí)間依賴曲線。C：NiCl2對(duì) T 型鈣電流的阻斷效率柱狀圖。D：T 型鈣電流代表圖 Control，40 μM TTA-A2，Washout 及重疊曲線。E：TTA-A2 阻斷 T 型鈣電流的時(shí)間依賴曲線。F：TTA-A2 對(duì) T 型鈣電流的阻斷效率柱狀圖。G-H：NiCl2和TTA-A2對(duì)T型鈣電流的濃度依賴曲線。*代表p < 0.05，**代表 p < 0.01，***代表 p < 0.001，n.s.表示無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.3 SG 神經(jīng)元上 T 型鈣電流的電生理特性為明確 T 型鈣電流對(duì) SG 神經(jīng)元的調(diào)控作用，接下來(lái)我們首先研究 T 型鈣電流的電生理特性。T 型鈣電流的幅值大小從 6.1 pA 到 415.4 pA 不等（n = 178cells；N = 60 SD rats），平均幅值為 84.8 ± 5.3 pA（圖 3.3A）。電流大小在< 50 pA，
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脊髓背角膠狀質(zhì)神經(jīng)元形態(tài)與電生理學(xué)特性的研究進(jìn)展[J]. 劉娜娜,王欣萌,彭斯聰,柳濤. 生理科學(xué)進(jìn)展. 2016(06)
本文編號(hào)：3072997
【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
脊髓切片的制備
圖 3.1 大鼠脊髓背角 SG 神經(jīng)元上 T 型鈣電流的表達(dá)。A：電流鉗模式下，記錄 SG 神經(jīng)元內(nèi)向電流的刺激方案及代表圖：Control（Aa），0.5 μM TTX（Ab），0.5 μM TTX + 1 mM NiCl2（Ac），純化相減（Ad）。B：從 A 圖中所得的電流密度隨電壓變化圖。C：電流曲線代表圖 Control（Ca），0.5 μM TTX（Cb），0.5 μM TTX + 40 μM TTA-A2（Cc），純化相減（Cd）。D：從 C 圖所得的電流密度隨電壓變化圖。3.2 T 型鈣通道阻斷劑對(duì) T 型鈣電流的影響我們接下來(lái)進(jìn)一步探究 NiCl2和 TTA-A2 對(duì) T 型鈣電流的抑制效能。如圖 3.2A-B 所示，使用 0.2 mM NiCl2使得 T 型鈣電流的幅值下降至原來(lái)的 29.6 ± 4.6%（41.6 ± 8.6 pA；P < 0.001；n = 8 cells；N = 5 SD rats；圖 3.2 C），到達(dá)抑制峰值的時(shí)間大概需要 15-20 min。這種阻斷效能可在人工腦脊液中灌流 30 min 后恢復(fù)至原來(lái)的 89.6 ± 3.9%（36.8 ± 7.4 pA；P = 0.063；n = 8 cells；N = 5 SD rats；圖 3.2 C）。使用 40 μM TTA-A2 使 T 型鈣電流幅值降至原來(lái)的 12.1 ± 4.7%（153.9± 68.1 pA；P = 0.004；n = 3 cells；N=2 SD rats；圖 3.2 D-F）。經(jīng)過(guò)人工腦脊液
15圖3.2 SG神經(jīng)元上T型鈣電流的藥理學(xué)特性。A：T型鈣電流代表圖Control，0.2 mM NiCl2，Washout 及重疊曲線。T 型鈣電流的激活是通過(guò)每 10 s 一次的脈沖刺激：從鉗制電位-110 mV（500 ms）階躍至測(cè)試電位-50 mV（200 ms）。B：NiCl2阻斷 T 型鈣電流的時(shí)間依賴曲線。C：NiCl2對(duì) T 型鈣電流的阻斷效率柱狀圖。D：T 型鈣電流代表圖 Control，40 μM TTA-A2，Washout 及重疊曲線。E：TTA-A2 阻斷 T 型鈣電流的時(shí)間依賴曲線。F：TTA-A2 對(duì) T 型鈣電流的阻斷效率柱狀圖。G-H：NiCl2和TTA-A2對(duì)T型鈣電流的濃度依賴曲線。*代表p < 0.05，**代表 p < 0.01，***代表 p < 0.001，n.s.表示無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.3 SG 神經(jīng)元上 T 型鈣電流的電生理特性為明確 T 型鈣電流對(duì) SG 神經(jīng)元的調(diào)控作用，接下來(lái)我們首先研究 T 型鈣電流的電生理特性。T 型鈣電流的幅值大小從 6.1 pA 到 415.4 pA 不等（n = 178cells；N = 60 SD rats），平均幅值為 84.8 ± 5.3 pA（圖 3.3A）。電流大小在< 50 pA，
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]脊髓背角膠狀質(zhì)神經(jīng)元形態(tài)與電生理學(xué)特性的研究進(jìn)展[J]. 劉娜娜,王欣萌,彭斯聰,柳濤. 生理科學(xué)進(jìn)展. 2016(06)
本文編號(hào)：3072997
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