目的提取紅細(xì)胞RhD膜蛋白并將其固化至乳膠微球以獲得固相化RhD蛋白靶分子。方法采集3份志愿者全血標(biāo)本,分別使用Yared MA法提取濃縮紅細(xì)胞、試劑盒法提取濃縮紅細(xì)胞及血影細(xì)胞膜蛋白的方法提取標(biāo)本紅細(xì)胞RhD膜蛋白,通過(guò)蛋白質(zhì)定量檢測(cè)及免疫印跡試驗(yàn)評(píng)價(jià)不同方法的提取效果。將不同方法提取出的RhD蛋白固化至乳膠微球,并通過(guò)流式細(xì)胞儀分析其抗原活性。結(jié)果 RhD膜蛋白濃度（mg/m L）分別為（n=3）:0.24±0.04（Yared MA法提取濃縮紅細(xì)胞）、4.82±0.09（試劑盒法提取濃縮紅細(xì)胞）和4.31±0.39（試劑盒法提取血影細(xì)胞）與濃縮紅細(xì)胞上的RhD膜蛋白濃度（mg/m L）。免疫印跡試驗(yàn):Yared MA法從濃縮紅細(xì)胞提取的RhD蛋白僅有1條RhD特異性條帶;試劑盒法從濃縮紅細(xì)胞提取的RhD蛋白無(wú)特異性條帶,從血影細(xì)胞提取的RhD蛋白有2條RhD特異性條帶。流式分析（n=3）:Yared MA法提取的濃縮紅細(xì)胞樣品與試劑盒法提取的血影細(xì)胞樣品、濃縮紅細(xì)胞樣品的熒光強(qiáng)度分別為:98.00±12.53、92.67±10.69、50.00±13.89。結(jié)論 Yared MA... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)輸血雜志. 2017,30(09)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：3 頁(yè)

【部分圖文】：

不同方法提取(及同一方法提取不同紅細(xì)胞)

1空白對(duì)照組;2YaredMA法提取濃縮紅細(xì)胞ＲhD膜蛋白;3試劑盒法提取血影細(xì)胞ＲhD膜蛋白;4試劑盒法提取濃縮紅細(xì)胞ＲhD膜蛋白圖3不同方法(及同一方法提取不同紅細(xì)胞)提取的ＲhD膜蛋白熒光強(qiáng)度強(qiáng)度比較(n=3)3討論目前普遍認(rèn)為ＲhD抗原是由多種紅細(xì)胞膜成分，如Ｒh相關(guān)糖蛋白，共同組成的1種復(fù)合抗原［7］，但紅細(xì)胞膜骨架成分卻并不是影響Ｒh抗原活性的絕對(duì)因素，在無(wú)細(xì)胞膜骨架成分的標(biāo)本中同樣可檢出Ｒh抗原活性［8］。在本實(shí)驗(yàn)中我們通過(guò)比較文獻(xiàn)［5］建立的ＲhD膜蛋白提取方法與試劑盒提取膜蛋白的方法發(fā)現(xiàn)，YaredMA法蛋白提取濃度較低，約僅為試劑盒法提取膜蛋白濃度的1/20(圖1);但免疫印跡檢測(cè)結(jié)果顯示試劑盒提取血影細(xì)胞的ＲhD蛋白純度卻不及YaredMA法提取濃縮紅細(xì)胞:試劑盒法提取的血影細(xì)胞有2條明顯的條帶，雖然1條與YaredMA法相同位于約45kD的位置，然而另1條卻位于約30kD處，可能是蛋白降解導(dǎo)致的結(jié)果(圖2)。紅細(xì)胞蛋白組成以血紅蛋白為主(約占紅細(xì)胞濕重的97%)［9］。試劑盒法提取濃縮紅細(xì)胞膜ＲhD蛋白的過(guò)程與YaredMA法、試劑盒法提取血影細(xì)胞膜ＲhD蛋白不同，它沒(méi)有去除血紅蛋白的過(guò)程，血紅蛋白完全保留在了提取液中。YaredMA法提取取濃縮紅細(xì)胞膜ＲhD蛋白可完全去除血紅蛋白的干擾，而試劑盒法提取血影細(xì)胞膜ＲhD蛋白則最多可去除86.33%的血紅蛋白［6］。雖然試劑盒法提取血影細(xì)胞與濃縮紅細(xì)胞膜蛋白濃度相近，但免疫印跡檢測(cè)結(jié)果差別明顯———在血紅蛋白的干擾下濃縮紅細(xì)胞膜蛋白提取液中無(wú)ＲhD特異性條帶(圖2)。由此可見(jiàn)提取紅細(xì)胞膜蛋白去除血紅蛋白的干擾是十分必要的。ＲhD膜蛋白固化至乳膠微球的流式檢測(cè)顯示:YaredMA法提取取濃縮紅細(xì)胞膜ＲhD蛋白與試劑盒法提取血影細(xì)胞ＲhD膜蛋白的熒光強(qiáng)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同血影細(xì)胞制備方法質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的建立[J]. 吳凡,梁延連,蘇宇清,周丹,李大成,張印則.  中國(guó)輸血雜志. 2014(05)



本文編號(hào)：2980547