由于陽離子聚合物基因載體在基因治療方面具有易制備、穩(wěn)定性高、免疫反應(yīng)小、質(zhì)粒負(fù)載能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),所以在本論文中,我們設(shè)計(jì)了兩種不同的陽離子聚合物型基因載體:含RGD的明膠（Gelatin）-聚乙烯亞胺（PEI）聚合物載體（GT-PEIx）和氨基化修飾的可控規(guī)整聚合物基因載體。明膠是一種通過酸法或者堿法水解動物膠原蛋白獲得的變性蛋白,明膠具有一段精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp）的序列肽（RGD）,RGD可以與癌細(xì)胞表面11種整合素特異性結(jié)合,增加細(xì)胞粘附,提高細(xì)胞吸收能力。據(jù)此我們在設(shè)計(jì)聚合物時(shí)將明膠修飾,增加一段連接臂再與不同濃度,不同結(jié)構(gòu),不同分子量的聚乙烯亞胺（PEI）偶聯(lián),合成了 64種具有癌細(xì)胞靶向的明膠-聚乙烯亞胺聚合物載體。同時(shí)探究不同的PEI濃度,PEI的分子結(jié)構(gòu),PEI的分子量對所合成聚合物轉(zhuǎn)染性能的影響。我們發(fā)現(xiàn)GT-PEI11為效果最好的聚合物載體,其在A549,B16F10,COS7,HEPG2中的轉(zhuǎn)染效率分別達(dá)到了 74%、58%、66%、29%,與正常細(xì)胞COS7,HEPG2相比,在癌細(xì)胞A549和B16F10中的轉(zhuǎn)染效率更高,說明RGD序列對... 

【文章來源】：南京理工大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．２?ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物的咁ＮＭＲ??從明膠，ＧＴ－ＦＸ以及ＧＴ－ＰＥＩｘ的紅外光譜圖（圖２．３）中可以看出明?

ＧＴ－ＰＥＩ丨２、ＧＴ－ＰＥＩｉ９、ＧＴ－ＰＥＩ２〇?為例，按?ＧＴ－ＰＥＩｘ／ＤＮＡ?質(zhì)量比分別為?２０：１、４０：１?和?６０：１??制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物，并且對它們進(jìn)行粒徑和電勢的測定。同時(shí)測定ＰＥＩ２５Ｋ／ＤＮＡ為３的??轉(zhuǎn)染復(fù)合物的粒徑和Ｚｅｔａ電位作為對比。結(jié)果如圖２．４所示，ＧＴ－ＰＥＩ＾ＧＴ－ＰＥＩｉ＾ＧＴ－ＰＥＩ＾、??ＧＴ－ＰＥｈｏ與質(zhì)粒ＤＮＡ可以形成粒徑在２００?ｎｍ左右的納米粒子，同時(shí)轉(zhuǎn)染復(fù)合物帶有＋２３??－＋３２ｍＶ的電勢，可以看出來ＧＴ－ＰＥＩＸ／ＤＮＡ轉(zhuǎn)染復(fù)合物的粒徑和電勢都是比較合適的，??從電勢和粒徑分析，ＧＴ－ＰＥＩｘ聚合物應(yīng)該可以作為基因轉(zhuǎn)染載體。??１９??

．?４．?２．?２瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)??ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物主要是通過靜電相互作用和ｐＤＮＡ形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物，所以我脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)來測試ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物和ｐＤＮＡ之間的復(fù)合能力如圖ａ所示，ＧＴ－ＰＥＩＸ聚合物能否有效壓縮包裹質(zhì)粒ＤＮＡ。我們以ＧＴ－ＰＥＩｎ為例，在瓊脂


本文編號：2965562