發(fā)布時(shí)間：2017-04-10 08:03

  本文關(guān)鍵詞：通遼地區(qū)大腸埃希菌耐藥分析及其生物膜形成與Ⅰ類(lèi)整合子相關(guān)性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的:大腸埃希菌(Escherichia coli,E.coli)是棲居在人和動(dòng)物腸道中正常菌群的重要成員之一,同時(shí)也是一種機(jī)會(huì)致病菌,可以引發(fā)腸道外感染包括泌尿道感染、血液感染以及腦膜炎等。2014年WHO全球抗生素耐藥監(jiān)測(cè)報(bào)告指出,在全球114個(gè)國(guó)家中大腸埃希菌對(duì)于第三代頭孢菌素以及氟喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥性已經(jīng)達(dá)到了很高的水平。了解臨床感染的大腸埃希菌耐藥現(xiàn)狀,可以優(yōu)化抗菌藥物的使用,為臨床治療提供指導(dǎo);細(xì)菌生物膜(Bacterial Biofilm,BBF)是指細(xì)菌粘附于接觸物表面,分泌大量細(xì)胞外聚合物,包括肽聚糖、纖維蛋白和磷脂等,并將細(xì)胞自身包繞其中而形成的膜樣物。生物膜狀態(tài)下的細(xì)菌,其基因表型發(fā)生改變,可以產(chǎn)生較高的耐藥性;Ⅰ類(lèi)整合子(Int1)是革蘭陰性菌臨床分離株中最常見(jiàn)的整合子,可以將捕獲的外源耐藥基因轉(zhuǎn)變?yōu)楣δ苄缘谋磉_(dá)單位,從而表達(dá)出對(duì)某一藥物的抗性。另一方面,不同的耐藥基因又可以插入同一個(gè)Ⅰ類(lèi)整合子中,介導(dǎo)多重耐藥株的形成。本研究旨在分析通遼地區(qū)某醫(yī)院臨床分離大腸埃希菌的耐藥情況,了解Ⅰ類(lèi)整合子的分布狀況,并對(duì)細(xì)菌生物膜狀態(tài)和浮游狀態(tài)下的Ⅰ類(lèi)整合酶基因(int I1)的表達(dá)情況進(jìn)行分析,初步探討生物膜形成與Ⅰ類(lèi)整合子的相關(guān)關(guān)系。材料及方法:99株臨床分離大腸埃希菌收集于2013年10月至2014年3月通遼市某三級(jí)甲等醫(yī)院,紙片擴(kuò)散法分析其耐藥情況;微孔板法檢測(cè)99株大腸埃希菌生物膜形成能力,分析生物膜形成能力與耐藥性之間的關(guān)系;設(shè)計(jì)Ⅰ類(lèi)整合酶基因和可變區(qū)上下游引物,PCR檢測(cè)99株大腸埃希菌Ⅰ類(lèi)整合子的攜帶情況,高通量測(cè)序分析整合子攜帶耐藥基因盒的類(lèi)型;在溫度、濕度等相同實(shí)驗(yàn)條件下分別培養(yǎng)浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)的細(xì)菌,提取兩種狀態(tài)下的細(xì)菌總RNA,實(shí)時(shí)定量PCR分別測(cè)定Ⅰ類(lèi)整合酶基因在浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)下的表達(dá)情況。結(jié)果及結(jié)論:藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果及耐藥數(shù)據(jù)分析表明,99株臨床分離的大腸埃希菌耐藥程度較高,在23種抗生素中有13種抗生素的耐藥率超過(guò)50%,亞胺培南和美羅培南的耐藥率最低,分別為7%和5%;微孔板法顯示,99株大腸埃希菌普遍可以形成生物膜,但各菌株形成生物膜的能力差別較大。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,菌株形成生物膜能力的強(qiáng)弱,與菌株對(duì)阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南三種抗生素耐藥率的高低有相關(guān)性;在99株大腸埃希菌中Ⅰ類(lèi)整合酶陽(yáng)性菌株共有55株,陽(yáng)性率為55.6%,其中攜帶Ⅰ類(lèi)整合子相關(guān)基因盒的菌株共有36株,攜帶率為36.4%,所檢測(cè)四株菌株主要攜帶arr-3、dfr A27、dfr A17和Aad A5四種類(lèi)型基因盒,其中一株攜帶arr-3--dfr A27的組合形式,三株攜帶dfr A17--Aad A5的組合形式;細(xì)菌在浮游狀態(tài)和生物膜狀態(tài)均有Ⅰ類(lèi)整合酶基因表達(dá),但兩種狀態(tài)下Ⅰ類(lèi)整合酶基因m RNA轉(zhuǎn)錄水平不同,Ⅰ類(lèi)整合酶基因在生物膜狀態(tài)下表達(dá)水平有顯著增高。
【關(guān)鍵詞】：大腸埃希菌 抗生素耐藥 生物膜 Ⅰ類(lèi)整合子 實(shí)時(shí)定量PCR
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文縮寫(xiě)詞表11-12
• 第一章 緒論12-19
• 1 臨床分離大腸埃希菌及其耐藥性現(xiàn)狀12
• 1.1 大腸埃希菌概述12
• 1.2 大腸埃希菌的耐藥現(xiàn)狀12
• 2 生物膜與細(xì)菌耐藥12-14
• 2.1 細(xì)菌生物膜概述12-13
• 2.2 EPS的屏障作用13
• 2.3 生物膜的營(yíng)養(yǎng)限制和特殊微環(huán)境學(xué)說(shuō)13-14
• 2.4 細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)（Quorum sensing, QS）14
• 2.5 生物膜中基因表型的改變14
• 3 整合子-基因盒與細(xì)菌耐藥14-18
• 3.1 整合子的結(jié)構(gòu)與分類(lèi)15-16
• 3.2 耐藥基因盒的結(jié)構(gòu)16
• 3.3 耐藥基因盒的幾種類(lèi)型16-17
• 3.4 整合子檢測(cè)方法17-18
• 4 細(xì)菌生物膜與整合子關(guān)聯(lián)猜想18-19
• 4.1 應(yīng)激反應(yīng)（SOS）18
• 4.2 耐藥基因的水平傳遞18-19
• 第二章 實(shí)驗(yàn)研究19-33
• 1 實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 1.1 菌株來(lái)源19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材19-21
• 1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器21
• 1.4 數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-33
• 2.1 99株臨床分離大腸埃希菌的耐藥情況分析21-23
• 2.2 99株大腸埃希菌生物膜形成能力及Ⅰ類(lèi)整合子的相關(guān)研究23-27
• 2.3 大腸埃希菌Ⅰ類(lèi)整合酶基因在生物膜轉(zhuǎn)錄水平的研究27-33
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-50
• 1 大腸埃希菌臨床分離株耐藥情況分析33-37
• 1.1 細(xì)菌的分離鑒定33
• 1.2 生長(zhǎng)曲線的繪制33-34
• 1.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果34-36
• 1.4 耐藥結(jié)果的可視化分析36-37
• 2 大腸埃希菌生物膜形成能力及Ⅰ類(lèi)整合子的相關(guān)研究37-44
• 2.1 大腸埃希菌生物膜模型的建立與鑒定37-38
• 2.2 99株大腸埃希菌生物膜形成能力的定量分析38-40
• 2.3 大腸埃希菌生物膜形成能力與耐藥性的相關(guān)性分析40
• 2.4 PCR篩選Ⅰ類(lèi)整合酶基因40
• 2.5 PCR篩選Ⅰ類(lèi)整合子相關(guān)基因盒40-41
• 2.6 攜帶Ⅰ類(lèi)整合子基因盒菌株的耐藥情況41-42
• 2.7 Ⅰ類(lèi)整合子攜帶基因盒序列分析42-44
• 3 大腸埃希菌Ⅰ類(lèi)整合酶基因在生物膜轉(zhuǎn)錄水平的研究44-50
• 3.1 大腸埃希菌生物膜和浮游狀態(tài)RNA提取44-45
• 3.2 大腸埃希菌生物膜和浮游狀態(tài)mRNA的定性檢測(cè)45-46
• 3.3 Ⅰ類(lèi)整合酶基因在生物膜狀態(tài)和浮游狀態(tài)下mRNA表達(dá)水平差異比較46-50
• 第四章 討論50-53
• 第五章 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 作者簡(jiǎn)介61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：通遼地區(qū)大腸埃希菌耐藥分析及其生物膜形成與Ⅰ類(lèi)整合子相關(guān)性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：296237