近年來,采用基因治療手段對眼底疾病進行根本性的治療,受到越來越多科研學者的重視。然而,基因治療遇到的瓶頸在于高效的遞送載體。因此,尋求能夠緊密結(jié)合基因,實現(xiàn)定位靶組織、定時釋放基因和定點自我降解的目標的理想載體成為目前基因治療領(lǐng)域研究的重中之重。本課題從三個部分進行研究。首先,研究考察了Niosomes的制備條件與理化性質(zhì)。經(jīng)HA修飾后的陽離子類脂質(zhì)體,粒徑為175~184 nm,電位為-29~-33 mV。其次,采用視網(wǎng)膜色素上皮(ARPE-19)細胞,對載體進行細胞攝取水平的研究。結(jié)果顯示,各組載體細胞攝取能力隨著HA的修飾量增加而不斷增加,且20%HA-C-niosomes組的攝取能力顯著高于無HA修飾組。最后,采用了增強型綠色熒光蛋白(pEGFP),將其作為質(zhì)粒包載入陽離子類脂質(zhì)體后,并修飾以透明質(zhì)酸,得到HA-C-niosomes/DNA。體外細胞學實驗結(jié)果表明,20%HA-C-niosomes組的轉(zhuǎn)染效率,相比裸質(zhì)粒組,增加了2倍。而通過在SD大鼠體內(nèi)開展的體內(nèi)轉(zhuǎn)染學評價,視網(wǎng)膜冷凍切片,發(fā)現(xiàn)RPE層有明顯綠色熒光蛋白的表達;且20%HA-C-niosomes組體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率是裸質(zhì)粒組的6.5倍。綜上,該HA修飾的陽離子類脂質(zhì)體(HA-C-niosomes)具有良好的穩(wěn)定性以及基因保護作用,能夠主動靶向到RPE細胞,并實現(xiàn)良好的基因轉(zhuǎn)染效果。
【學位單位】：上海應用技術(shù)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R77;R450
【部分圖文】：

圖 1. 人眼的示意圖Fig 1. Schematic diagram of the human eye[14]分在視覺的過程中都有一個特定的功能，但含有感光則扮演中較為重要的角色。視網(wǎng)膜的垂直部分揭示了組織: 內(nèi)界膜，神經(jīng)纖維層，神經(jīng)節(jié)細胞層，內(nèi)網(wǎng)狀，外界膜，PR 內(nèi)外節(jié)段和色素上皮細胞（如圖 2）。層。它由一個單層的細胞構(gòu)成，夾在脈絡膜與脈絡。RPE 執(zhí)行各種功能：處理 PR 細胞外部節(jié)段，形成血強視力，清除廢物，防止有毒和氧化損傷，選擇性運說，光感受器和 RPE 是視網(wǎng)膜疾病的基因治療的主要著關(guān)鍵作用，并且容易受到大量單基因缺陷的影響[13結(jié)構(gòu)，可用于精確地向光感受器和 RPE 提供治療材料

圖 1. 人眼的示意圖Fig 1. Schematic diagram of the human eye[14]眼睛的每個部分在視覺的過程中都有一個特定的功能，但含有感光內(nèi)的視網(wǎng)膜在其中則扮演中較為重要的角色。視網(wǎng)膜的垂直部分揭示了好的層組成的多層組織: 內(nèi)界膜，神經(jīng)纖維層，神經(jīng)節(jié)細胞層，內(nèi)網(wǎng)狀外叢狀層，外核層，外界膜，PR 內(nèi)外節(jié)段和色素上皮細胞（如圖 2）。視網(wǎng)膜最外部的一層。它由一個單層的細胞構(gòu)成，夾在脈絡膜與脈絡Bruch 膜(BM)之間。RPE 執(zhí)行各種功能：處理 PR 細胞外部節(jié)段，形成血吸收多余的光來增強視力，清除廢物，防止有毒和氧化損傷，選擇性運經(jīng)視網(wǎng)膜。一般來說，光感受器和 RPE 是視網(wǎng)膜疾病的基因治療的主要們在視覺周期中起著關(guān)鍵作用，并且容易受到大量單基因缺陷的影響[13高度組織性的層狀結(jié)構(gòu)，可用于精確地向光感受器和 RPE 提供治療材料

上海應用技術(shù)大學 碩士學位論部基因治療：給藥途徑部基因的傳遞可以通過不同的途徑進行，包括局部灌注、眼周路線、腔內(nèi)注射注射、視網(wǎng)膜下注射或脈絡膜上腔注射（圖 3）[11]。不同的給藥途徑具有不點，選擇給藥途徑時應該基于目標細胞以及所使用的載體的特征[15]。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 周冬梅;謝曉芳;莊燕;王飛;劉鳳芝;曾健強;馬軼凡;蔡林濤;;不同表面電荷的陽離子脂質(zhì)體對人外周血單核細胞活化和細胞活性的影響[J];生物物理學報;2010年08期

本文編號：2887720