研究背景:結(jié)核病(TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mtb)感染引起的一種慢性免疫紊亂性疾病,由于缺乏理想的診療相關(guān)標(biāo)志物,結(jié)核病的防控面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn),這也是導(dǎo)致在全球范圍內(nèi)結(jié)核病愈演愈烈的主要原因之一。環(huán)狀RNA(circular RNA,circRNA)是新近發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)源性RNA,其進(jìn)化保守,具有組織和發(fā)育階段特異性,在細(xì)胞質(zhì)中豐富而穩(wěn)定地存在。越來越多的研究提示circRNA參與了多種人體的病理、生理過程,可以作為腫瘤、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等疾病潛在的診療標(biāo)志物。circRNA在機(jī)體抗Mtb感染過程中的作用以及能否作為結(jié)核病診療標(biāo)志物目前尚鮮見報(bào)道。研究目的:通過基因芯片技術(shù)檢測(cè)肺結(jié)核患者血漿中circ RNA的表達(dá)譜,篩選并鑒定具有成為結(jié)核病診斷標(biāo)志物潛力的circRNA;探討篩選的circRNA與結(jié)核病病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性及其在抗結(jié)核治療效果評(píng)估方面的能力,以期為結(jié)核病的診療提供新的標(biāo)志物。研究方法:采用基因芯片技術(shù)分別檢測(cè)3例活動(dòng)性肺結(jié)核患者和3例健康對(duì)照者血漿中circRNA的表達(dá)譜,挑選6條上調(diào)表達(dá)中差異最顯著的circRNA(hsa_circ_0009024,hsa_circ_0001953,hsa_circ_0008297,hsa_circ_0003528,hsa_circ_0003524和hsa_circ_0015879)在50例活動(dòng)性肺結(jié)核患者和50例健康對(duì)照者血漿中進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證。采用受試者工作特征(ROC)曲線分析circRNA對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值。采用Spearman分析circRNA的表達(dá)水平與結(jié)核病患者疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。收集120例活動(dòng)性肺結(jié)核患者、100例健康體檢者、40例肺炎患者、40例COPD患者、40例肺癌患者的外周血,分離血漿樣本,采用qRT-PCR檢測(cè)各組血漿中hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024的表達(dá),應(yīng)用ROC曲線分析hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024診斷肺結(jié)核的敏感度和特異度。對(duì)25例接受規(guī)范抗結(jié)核治療的肺結(jié)核患者治療前及治療后第6個(gè)月血漿中hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024表達(dá)水平進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。、研究結(jié)果:1.基因芯片檢測(cè)結(jié)果顯示,肺結(jié)核患者血漿中有61條circRNA存在差異性表達(dá),其中上調(diào)43條,下調(diào)18條。qRT-PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示,與健康對(duì)照組相比,肺結(jié)核患者血漿中hsa_circ_0009024、hsa_circ_0001953、hsa_circ_0008297、hsa_circ_0003528、hsa_circ_0003524、hsa_circ_0015879表達(dá)均顯著上調(diào),與芯片檢測(cè)結(jié)果一致。2.ROC曲線分析結(jié)果顯示,hsa_circ_0001953、hsa_circ_0009024、hsa_circ_0003528、hsa_circ_0003524,hsa_circ_0008297和hsa_circ_0015879診斷肺結(jié)核的曲線下面積(AUC)分別為0.856、0.808、0.768、0.715、0.692和0.676。相關(guān)性分析結(jié)果顯示,hsa_circ_0001953(P0.001)、hsa_circ_0009024(P=0.001)、hsa_circ_0008297(P=0.027)與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān),而hsa_circ_0015879(P=0.135)、hsa_circ_0003528(P=0.336)和hsa_circ_0003524(P=0.578)與疾病嚴(yán)重程度無關(guān)性。3.擴(kuò)大樣本量檢測(cè)可知,肺結(jié)核患者血漿hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024表達(dá)顯著高于健康對(duì)照組和疾病對(duì)照組(肺炎、COPD、肺癌患者),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。ROC曲線分析結(jié)果顯示,血漿hsa_circ_0001953鑒別肺結(jié)核與健康人群的AUC為0.826,敏感度和特異度分別為69.17%和89.00%;血漿hsa_circ_0009024鑒別肺結(jié)核與健康人群的AUC為0.777,敏感度和特異度分別為60.00%和86.00%;聯(lián)合hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024鑒別肺結(jié)核與健康人群的AUC為0.915,敏感度為72.5%,特異度為96.00%。聯(lián)合hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024鑒別肺結(jié)核與疾病對(duì)照組患者的AUC為0.897,敏感度為79.17%,特異度為86.67%。與抗結(jié)核治療前相比,肺結(jié)核患者接受規(guī)范抗結(jié)核治療6月后血漿hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024表達(dá)水平顯著下降。結(jié)論:1.與健康志愿者相比,肺結(jié)核患者血漿中circRNA表達(dá)譜發(fā)生部分變化,提示circRNA可能在肺結(jié)核病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。2.Hsa_circ_0001953和hsa_circ_0009024在肺結(jié)核患者血漿中表達(dá)顯著升高,且與疾病嚴(yán)重程度正相關(guān),在有效抗結(jié)核治療后二者表達(dá)水平顯著下降,有望成為肺結(jié)核診斷及療效監(jiān)測(cè)的潛在生物標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R52;R440
【部分圖文】：

TB：肺結(jié)核；HC 健康對(duì)照?qǐng)D 1 芯片掃描圖3.2.2 箱形圖分析通過箱形圖可觀察到芯片掃描后各組樣品熒光密度值的分布情況，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化后 log2-ratios 接近同一水平（圖 2）。

箱形圖TB：肺結(jié)核；HC健康對(duì)照

第 3 章 結(jié)果13TB：肺結(jié)核；HC 健康對(duì)照?qǐng)D 1 芯片掃描圖3.2.2 箱形圖分析通過箱形圖可觀察到芯片掃描后各組樣品熒光密度值的分布情況，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化后 log2-ratios 接近同一水平（圖 2）。圖 2 箱形圖TB：肺結(jié)核；HC 健康對(duì)照3.2.3 分層群聚圖分析分層群聚圖結(jié)果顯示了肺結(jié)核患者組和健康對(duì)照組中差異表達(dá) circRNA 的聚類情況（圖 3），紅色表示表達(dá)上調(diào)，綠色表示表達(dá)下調(diào)。
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