目的線(xiàn)粒體損傷是膿毒癥介導(dǎo)急性肝損傷的主要機(jī)制之一,線(xiàn)粒體膜的轉(zhuǎn)運(yùn)功能正常是維持線(xiàn)粒體功能的基本條件。線(xiàn)粒體膜通過(guò)調(diào)節(jié)離子、水以及脂肪酸等物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn),維持線(xiàn)粒體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,并調(diào)控細(xì)胞的合成和代謝功能。本研究探討川芎嗪對(duì)膿毒癥致急性肝損傷(SALI)大鼠肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能的保護(hù)作用。方法按隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠分為假手術(shù)組、SALI模型組〔采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)制模〕、川芎嗪治療組(CLP術(shù)后經(jīng)尾靜脈注入鹽酸川芎嗪60mg/kg)和川芎嗪預(yù)防組(CLP術(shù)前7d,每日經(jīng)尾靜脈注射鹽酸川芎嗪60mg/kg),每組12只。各組于術(shù)后10h取腹主動(dòng)脈血和肝臟,用酶耦聯(lián)速率法測(cè)定血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和線(xiàn)粒體型天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(m-AST)水平;用比色和化學(xué)熒光素法檢測(cè)肝細(xì)胞三磷酸腺苷(ATP)含量;用磷定量化方法檢測(cè)肝細(xì)胞線(xiàn)粒體ATP酶活性;用蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜水通道蛋白8(AQP8)、肉毒堿棕櫚�；D(zhuǎn)移酶(CPT)的表達(dá)。結(jié)果1.與假手術(shù)組相比,SALI模型組、川芎嗪治療組和川芎嗪預(yù)防組血清ALT、AST和m-AST　水平平顯著升高,且川芎嗪預(yù)防組較川芎嗪治療組血清AST、m-AST水平降低更為顯著〔AST(U/L):303.9±110.3 比427.0±117.9,m-AST(U/L):168.2±60.0 比239.6±64.9,均P0.05〕;肝細(xì)胞ATP含量顯著降低,肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜ATP酶活性、AQP8和CPT-1A的表達(dá)量明顯下降。2.與SALI模型組相比,川芎嗪治療組和川芎嗪預(yù)防組血清ALT、AST和m-AST水平顯著降低〔ALT(U/L):123.8±32.8、105.0±44.5 比233.0±110.1,AST(U/L):427.0±117.9、、303.9±110.3 比 742.6±441.4,m-AST(U/L):239.6±64.9、、168.2±60.0比412.8±252.6,均P0.01〕,肝細(xì)胞ATP含量均顯著升高(nmol/mg:29.5±10.3、34.6±11.2比19.3±8.8,均P0.01)。3.線(xiàn)粒體膜ATP酶活性均顯著升高〔以SALI組(100%)為參照,Na+-K+-ATP酶(U/mg):3.91±0.30、、3.97±0.35 比2.87±0.82,Mg2+-ATP酶(U/mg):3.75±0.38、3.88±0.35 比2.64±1.06,Ca2--ATP酶(U/mg):3.15±0.58、、2.98±0.31 比 1.75±1.25,Ca2+-Mg2+-ATP酶(U/mg):3.82±0.31、、3.91±0.42比2.57±1.01,均P0.01〕。4.線(xiàn)粒體膜AQP8和CPT-1A的表達(dá)量明顯升高〔以SALI(100%)為參照,AQP8/COX-IV:(79.12±7.79)%、(88.40±9.22)%比(62.08±11.91)%,CPT-1A/COX-IV:(87.92±10.06)%、(84.91±17.48)%比(72.11±7.82)%,均P0.01〕,4組間肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜CPT-2表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 1.SD大鼠采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)可制備膿毒癥模型,并引發(fā)急性肝損傷,致血清致ALT、AST和m-AST7水平升高。2.膿毒癥介導(dǎo)的急性肝損傷發(fā)生時(shí),線(xiàn)粒體膜的Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,AQP-8、CPT-1A蛋白表達(dá)減低及線(xiàn)粒體A TP含量減低。3.川穹嗪對(duì)膿毒癥大鼠肝功能的改善功能,對(duì)肝細(xì)胞線(xiàn)粒體的保護(hù)作用,其可能機(jī)制是::(1)川芎嗪通過(guò)穩(wěn)定線(xiàn)粒體膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性,改善膿毒癥狀態(tài)下線(xiàn)粒體膜對(duì)離子的轉(zhuǎn)運(yùn)作用,實(shí)現(xiàn)對(duì)線(xiàn)粒體功能的保護(hù)作用。(2)川芎嗪通過(guò)上調(diào)AQP 8蛋白表達(dá),維持SALI大鼠肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜水穩(wěn)態(tài),從而減輕膿毒癥介導(dǎo)的急性肝損傷。(3)CPT-1A可能是SALI的主要損傷靶點(diǎn),川芎嗪對(duì)肝細(xì)胞線(xiàn)粒體的保護(hù)作用是通過(guò)恢復(fù)CPT-1A的表達(dá)量,促進(jìn)脂肪酸進(jìn)入線(xiàn)粒體,保護(hù)了脂代謝。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R459.7
【部分圖文】：

圖 1 大鼠肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜 AQP 8 蛋白表達(dá)Fig1 The expression ofAQP 8 in the mitochondrial membrane in rat hepatocytesA：代表性的免疫印跡顯示四組 AQP 8 及 COX-Ⅳ內(nèi)參表達(dá)B：AQP 8 蛋白的相對(duì)表達(dá)量柱狀圖， n=12，＊:P＜0.01（與對(duì)照組比較），#:P＜0.01（與膿毒癥組比較）3.4 線(xiàn)粒體膜 CPT 表達(dá)SALI模型組肝細(xì)胞線(xiàn)粒體外膜CPT-1A表達(dá)量較假手術(shù)組明顯降低（P＜0.01）；川芎嗪預(yù)防組和治療組線(xiàn)粒體外膜 CPT-1A 表達(dá)量較 SALI 模型組明顯升高（均 P＜0.01），見(jiàn)圖 2；而川芎嗪治療組與預(yù)防組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組間肝細(xì)胞線(xiàn)粒體內(nèi)膜 CPT-2 表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖 3。

圖 2 大鼠肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜 CPT-1A 的表達(dá)Fig2 The expression of CPT-1Ain the mitochondrial membrane in rat hepatocytesC：代表性的免疫印跡顯示四組的 CPT-1A 及 COX-Ⅳ內(nèi)參表達(dá)D：CPT-1A 的相對(duì)表達(dá)量柱狀圖， n=12，＊:P＜0.01(與對(duì)照組比較)，#:P＜0.01(與膿毒癥組比較)

圖 3 大鼠肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜 CPT-2 的表達(dá)Fig3 The expression of CPT-2 in the mitochondrial membrane in rat hepatocytesE：代表性的免疫印跡顯示 CPT-2 及 COX-Ⅳ內(nèi)參表達(dá)F：CPT-2 的相對(duì)表達(dá)量柱狀圖，n=124. 討論膿 毒癥是 一種 由細(xì)菌和病 毒 等微生物引 起的 全身炎癥反應(yīng)綜（inflammatory response syndrome，SIRS），在嚴(yán)重的情況下會(huì)引起膿毒性休多器官功能障礙，因此它是危重癥死亡的主要原因之一。美國(guó)每年約有 75 萬(wàn)者患病，年增長(zhǎng)率為 1.5％，到 2020 年每年將有數(shù)百萬(wàn)新發(fā)嚴(yán)重膿毒癥患者到目前為止，臨床上仍未有廣泛用于治療膿毒癥的特效藥物，膿毒癥的高發(fā)
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本文編號(hào)：2874369