發(fā)布時(shí)間：2020-11-06 05:01

　　 研究背景:長鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),已發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤患者血清中表達(dá)量異常增高,已展現(xiàn)出作為一種新型生物標(biāo)志物的診斷價(jià)值。lncRNAs存在于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis,RA)患者滑膜組織、破骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞中,參與了RA的發(fā)生發(fā)展。但有關(guān)lncRNAs在RA患者血清及血清外泌體中表達(dá)量的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。目的:研究HOTAIR等3種lncRNAs在RA、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)和健康對照組血清及血清外泌體中的差異表達(dá),分析lncRNA表達(dá)量與RA患者疾病活動(dòng)度的相關(guān)性,探討血清lncRNA作為RA診斷標(biāo)志物的可能性,為RA患者的病情判斷與活動(dòng)性監(jiān)測提供新的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。方法:收取50例RA疾病組,50例SLE疾病對照組,及60例健康對照組血清,提取血清總RNA,以管家基因GAPDH為內(nèi)參,利用RT-qPCR方法分析HOTAIR、XIST和H19三種lncRNA在RA疾病組、SLE疾病對照組和健康組三組中的表達(dá)情況。用Person相關(guān)性分析探討血清HOTAIR表達(dá)量與疾病活動(dòng)指數(shù)(DAS28)的相關(guān)性,繪制受試者工作曲線(receiver-operating characteristic,ROC),評估血清lncRNA的RA臨床價(jià)值。選取同樣患者和對照組血清,包括40例RA、50例SLE和60例健康對照血清,分離純化血清中外泌體,用納米粒子追蹤分析技術(shù)和透射電鏡技術(shù)對外泌體進(jìn)行表征分析;通過外泌體膜表面標(biāo)記CD63和CD81,定量檢測外泌體數(shù)量。用RT-qPCR檢測外泌體中HOTAIR、XIST和H19等三種lncRNA的表達(dá)水平,比較分析血清lncRNA與外泌體lncRNA的相關(guān)關(guān)系,應(yīng)用ROC曲線評估外泌體HOTAIR的潛在診斷價(jià)值。結(jié)果:一、血清lncRNAs檢測結(jié)果。RA組與健康對照組相比,血清HOTAIR表達(dá)量顯著增加(P=0.0005),AUC=0.69,診斷敏感性和診斷特異性分別為58%和78%;RA組與SLE疾病對照組相比,血清HOTAIR表達(dá)量顯著增加(P=0.004),AUC=0.67,診斷敏感性和診斷特異性分別為56%和78%;XIST在三組間表達(dá)水平無明顯差異(P0.05);H19在血清中表達(dá)量過低而無法檢測出。血清中HOTAIR表達(dá)值與DAS28評分呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P=0.005 r=0.4937),且DAS28評分5.1疾病高度活動(dòng)組的HOTAIR表達(dá)量顯著高于5.1DAS2和2.6的疾病中低度活動(dòng)組(P0.0001);HOTAIR表達(dá)量與血清CRP水平之間呈正相關(guān)性(r=0.411,P=0.004)與抗CCP抗體、ESR、RF水平未發(fā)現(xiàn)有相關(guān)關(guān)系(P0.05)。二、血清外泌體IncRNAs檢測結(jié)果。CD81檢測結(jié)果顯示,RA組的胞體濃度明顯低于其他各組(P0.05);IncRNAHOTAIR表達(dá)水平均顯著高于SLE疾病對照組和健康對照組(P=0.0001),RA與正常組及SLE與正常組的ROC曲線下面積分別AUC=0.79、AUC=0.76,敏感性、特異性分別為73%和80%,66%和85%。此外,血清RA與血清外泌體RA相同標(biāo)本間的HOTAIR表達(dá)量之間有相關(guān)性(P=0.003,r=0.482);HOTAIR 表達(dá)水平與 ESR 水平值相關(guān)(=0.008,r=0.481)和DAS28評分值不相關(guān)。結(jié)論:IncRNA HOTAIR在RA患者血清以及血清外泌體中的表達(dá)量顯著性升高且在血清中與DAS28評分呈顯著正相關(guān)關(guān)系。HOTAIR在RA患者血清中異常表達(dá),檢測其血清表達(dá)水平有助于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的鑒別診斷以及疾病的活動(dòng)性判斷;血清及其外泌體中的HOTAIR可能是診斷RA和預(yù)測疾病活動(dòng)度潛在的生物標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R593.22;R440
【部分圖文】：

圖１．?１?ＬｎｃＲＮＡ分類??Ｆｉｕｒｅ?１．１?Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＩｎｃＲＮＡ??

３．２?ＲＡ血清ＩｎｃＲＮＡ?ＨＯＴＡＩＲ的表達(dá)水平與ＤＡＳ２８評分值的相關(guān)性??ＨＯＴＡＩＲ表達(dá)量和ＲＡ疾病活動(dòng)程度即ＤＡＳ２８評分呈顯著正相關(guān)（尸＝〇？?０??０２２?ｒ＝０．５０６６，圖２－２Ａ）。根據(jù)ＤＡＳ２８評分系統(tǒng)規(guī)定，ＤＡＳ２８彡５．１為疾病高度??活動(dòng)，５．１＞ＤＡＳ２８＞３．２為疾病中度活動(dòng)，３．２＞ＤＡＳ２８＞２．６為疾病低度活動(dòng)，ＤＡＳ??２８＜２．６為病情緩解；我們將３３例ＲＡ患者分為高度活動(dòng)組（１５例）和中低度活??動(dòng)組（１８例）兩組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，疾病高度活動(dòng)組的ＨＯＴＡＩＲ相對表達(dá)量比疾病??中低度活動(dòng)組明顯升髙（尸＜０．０００１，圖２－２Ｂ）。??Ａ?Ｂ??Ｙ＝－４．１３２＋０．４３５７？Ｘ?８??ｒ＝０．５０６６??１?＾０００２２?剩?Ｒ?ａ??７－?？?？?？?？?為?ｌ?１??Ｑ?？?？?？?？？?０－Ｊ?１?１???３Ｈ?！?１?１?ｙ?Ｓ?？＜〇??０?２?４?６?４＾＇?Ｗ??ＨＭｌＲ＋ａ對表達(dá)量?＃?＃??圖２－２?ＨＯＴＡＩＲ表達(dá)量與ＤＡＳ２８評分的相關(guān)性??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＨＯＴＡＩＲ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ＤＡＳ２８?ｓｃｏｒｅ??Ａ：?ＨＯＴＡＩＲ?和?ＤＡＳ２８?評分值相關(guān)性分析?Ｐ＝０．００５，?ｒ＝０．５０６６??Ｂ：在ＲＡ高度活動(dòng)組（ＤＡＳ２８彡５．１）及中低度活動(dòng)組（５．１＞ＤＡＳ２８＞２．６）血清中ＨＯＴＡＩＲ??表達(dá)分析，ａ：?ＰＯ．ＯＯＯｌ??３．４血清ＨＯＴＡＩＲ的表達(dá)

進(jìn)一步分析血清中ＨＯＴＡＩＲ的表達(dá)與血清抗ＣＣＰ抗體、ＲＦ、ＣＲＰ、ＥＳＲ??的相關(guān)性，結(jié)果表明，ＲＡ患者血清ＨＯＴＡＩＲ水平與ＣＲＰ水平呈顯著正相關(guān)關(guān)??系（圖２－３；尸＝０．００４），但與抗ＣＣＰ抗體、ＲＦ、ＥＳＲ均無明顯相關(guān)性（戶＞０．０５）??（表?２－７）。??表２－７?ＨＯＴＡＩＲ表達(dá)量與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)指標(biāo)相關(guān)性??ＲＡ實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)?Ｐｅａｒｓｏｎ?ｒ?Ｒ２?Ｐ值??Ａ－ＣＣＰ?．?－０．０７５?０．００５?Ｐ＞０．０５??ＲＦ?－０．０７０?０．００６?例．０５??ＣＲＰ?０．４１１?０．１６８?尸＝０．００４??ＥＳＲ?－０．１７０?０．０３０?ｉ＾Ｏ．０５??６］?Ｐ＝０．００４??．?ｒ＝０．４１１??＾?遂■’?４－?？?＃??〇?？參?魯??０?２０?４０?６０?８０?１００??ＣＲＰ??圖２－３ＨＯＴＡＩＲ表達(dá)量與ＣＲＰ相關(guān)性??Ｆｉｇｕｒｅ?２－３ＨＯＴＡＩＲ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ＣＲＰ?Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ??注：血清中ＨＯＴＡＩＲ的表達(dá)量與血清ＣＲＰ相關(guān)性分析，Ｐ＝０．００４，?ｒ＝０．４１１??３．５ＲＯＣ曲線分析??分別對ＲＡ患者組和ＳＬＥ疾病對照組，ＲＡ患者組和正常對照組ＨＯＴＡＩＲ水??平進(jìn)行分析，以敏感性（真陽性率）為縱坐標(biāo)，（１－特異性）（假陽性率）為橫??坐標(biāo)
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