背景:近年認(rèn)為腸道屏障功能損害是膿毒癥時(shí)多器官衰竭發(fā)生的始動因素。腸上皮細(xì)胞緊密連接是腸黏膜機(jī)械屏障的組成部分,一旦緊密連接受損,腸上皮細(xì)胞間的通透性增加,細(xì)菌和內(nèi)毒素等就可通過腸道屏障進(jìn)入體循環(huán),與多種疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。緊密連接可以用來評價(jià)腸粘膜屏障的功能。目的:用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)膿毒癥大鼠模型,研究植物乳酸菌對膿毒癥大鼠的回腸組織緊密連接蛋白(Claudin-1、Occludin)的表達(dá)影響,進(jìn)而探究植物乳酸菌是否對膿毒癥大鼠腸道屏障功能起到保護(hù)作用。方法:90只清潔級健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為對照組(C組)、植物乳酸菌預(yù)處理組(LP組)、膿毒癥組(LPS組)、膿毒癥加乳酸菌干預(yù)組(LPS+LP組)、乳酸菌預(yù)處理加膿毒癥組(LP+LPS組)。采用LPS尾靜脈注射誘導(dǎo)膿毒癥大鼠模型,LPS+LP組在尾靜脈注射LPS 1h后灌胃植物乳酸菌一次。LP+LPS組連續(xù)灌胃3天后尾靜脈注射LPS一次。處理后分別從6h、12h、24h從實(shí)驗(yàn)組取6只大鼠,采用透射電鏡觀察緊密連接超微結(jié)構(gòu),應(yīng)用Western Blot檢測Claudin-1、Occludin蛋白的表達(dá)。采用免疫組織化學(xué)法、免疫熒光法檢測回腸組織Claudin-1、Occludin蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)動物干預(yù)情況:C組大鼠灌胃后無影響,生活狀態(tài)良好,毛發(fā)有光澤,無異�；顒臃磻�(yīng),對外界聲音、刺激反應(yīng)敏感,無死亡;LP組(乳酸菌預(yù)處理組)大鼠灌胃處理后與C組無大區(qū)別,活動如常,均存活;LPS組(膿毒癥組)大鼠尾靜脈注射LPS后,活動度大幅度減少,少食或不進(jìn)食進(jìn)水。毛發(fā)無光澤,拉稀便,倦怠,呼吸急促,對外界刺激反應(yīng)遲鈍,甚至死亡;LPS+LP組、LP+LPS組也出現(xiàn)相似癥狀。2.透射電鏡觀察緊密連接超微結(jié)構(gòu):在C組、LP組緊密連接結(jié)構(gòu)正常,且縫隙連接無斷開,微絨毛排列整齊,細(xì)胞間隙無增大;均未見異常緊密連接蛋白結(jié)構(gòu)。LPS組可見多處異常緊密連接結(jié)構(gòu),如不連續(xù),腫脹等,且伴有縫隙連接出現(xiàn)不連續(xù)現(xiàn)象,微絨毛缺如,提示膿毒癥對緊密連接影響比較大。LP+LPS組、LP+LPS組也可見異常緊密連接結(jié)構(gòu),但較LPS組少。3.小腸組織Claudin-1蛋白表達(dá):Claudin-1在6h、12h、24h的LP組較C組無差異,統(tǒng)計(jì)學(xué)無意義。C組在6h、12h、24h均高于LPS組(P0.01)。LP+LPS組在6h、12h、24h均高于LPS組(P0.05)。LPS+LP組在6h、24h高于LPS組(P0.05),在12h二者無差異。4.小腸組織Occludin蛋白表達(dá):Occludin在6h、12h、24h的LP組較對照組(C組)無差異,統(tǒng)計(jì)學(xué)無意義。LPS組與C組比較,在6h時(shí)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無差異,12h、24h中C組高于LPS組(P0.01)。LP+LPS組較LPS組,在6h時(shí)無差異,在12h時(shí)高于LPS組(P0.05),24h時(shí)高于LPS組(P0.01)。LP+LPS組較LPS組,6h、12h無差異,24h時(shí)高于LPS組(P0.05)。5.小腸組織Claudin-1、Occludin蛋白免疫組化表達(dá):C組、LP組在6h、12h、24h呈強(qiáng)棕色陽性顆粒沿腸粘膜上皮細(xì)胞膜頂端分布,均呈連續(xù)性分布。LP+LPS組沿腸粘膜上皮分布連續(xù)性較好,并未有明顯中斷。LPS+LP組、LPS組棕色陽性顆粒可見明顯減少,顏色弱化,并有多處中斷。6.小腸組織Claudin-1、Occludin蛋白免疫熒光表達(dá):Claudin-1、Occludin蛋白在6h、12h、24h中C組、LP組可見該蛋白呈線性致密顆粒分布在回腸黏膜上皮,未中斷,熒光強(qiáng)。LP+LPS組緊密連接蛋白大部分也能保持完整,但仍能發(fā)現(xiàn)一些斷裂分開現(xiàn)象。LPS+LP組與LPS組的熒光強(qiáng)度差異不大,兩組存在較多的斷裂現(xiàn)象,且熒光弱。結(jié)論:通過尾靜脈注射脂多糖可成功誘導(dǎo)膿毒癥大鼠模型。植物乳酸菌可上調(diào)Claudin-1、Occludin蛋白的表達(dá),對膿毒癥大鼠腸道屏障功能具有保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

對外界聲音、刺激反應(yīng)敏感，無死亡；LP 組（乳酸菌預(yù)處理組）大鼠灌胃處理后與 C 組無區(qū)別，活動如常，均存活；LPS 組（膿毒癥組），大鼠基本不進(jìn)食進(jìn)水，拉稀便，活動度大幅度減少，毛發(fā)無光澤，呼吸急促，對外界刺激反應(yīng)遲鈍，甚至死亡；LPS+LP 組（膿毒癥加乳酸菌干預(yù)組）也出現(xiàn)相似癥狀，活動量減少，拉稀便，對外界刺激反應(yīng)弱，但死亡數(shù)比 LPS 組少；LP+LPS 組（乳酸菌預(yù)處理加膿毒癥組）活動度相較于 LPS 稍好些，拉稀便，存活率較 LPS 組和 LPS+LP 組高。本實(shí)驗(yàn)共使用 113 只大鼠，造模 24h 內(nèi)，如圖 1.1 所示，C 組，LP 組均無死亡，均為 100%。LPS 組在 6 小時(shí)內(nèi)的生存率為 100%（6/6）,12 小時(shí)為 50%（3/6）,24 小時(shí)生存率為 16.7%（1/6），LP+LPS 組在 6 小時(shí)內(nèi)生存率為 83.3%（5/6），在 12 小時(shí)內(nèi)生存率為 50%（3/6），24 小時(shí)生存率為 50%（3/6），LPS+LP組在 6 小時(shí)內(nèi)生存率為 100%（6/6），12 小時(shí)生存率為 16.7%（1/6），24 小時(shí)生存率為 50%（3/6）。最后 90 只大鼠獲得完整數(shù)據(jù)。

1.2 膿毒癥大鼠剖腹探查情況大鼠在注射 LPS 后分別于 6h、12h、24h 剖腹探查（如圖 1.2 所示），可聞及明顯刺鼻氣味，腹腔內(nèi)可見明顯血性腹水，有多處器官相互黏連，且在大部分大鼠肝臟表面發(fā)現(xiàn)許多小膿點(diǎn)，腸管明顯脹氣，多有黃色粘液便等改變。C組、LP 組剖腹探查則未有如上述異常表現(xiàn)。綜上，可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)該方法通過成功建立膿毒癥大鼠模型。

構(gòu)完好；LPS 組電鏡下可見多處異常緊密連接結(jié)構(gòu)，如不連續(xù)，腫脹等，圖 2 C白色箭頭所示兩處緊密連接出現(xiàn)不連續(xù)現(xiàn)象，微絨毛缺如。綜上，提示膿毒癥對大鼠回腸組織的緊密連接形態(tài)結(jié)構(gòu)有影響。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Christoph G Dietrich;Tanja Kottmann;Manuela Alavi;;Commercially available probiotic drinks containing Lactobacillus casei DN-114001 reduce antibiotic-associated diarrhea[J];World Journal of Gastroenterology;2014年42期

2 Stelios F Assimakopoulos;Ismini Papageorgiou;Aristidis Charonis;;Enterocytes’tight junctions:From molecules to diseases[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2011年06期

本文編號：2862861