杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一種X染色體隱性遺傳疾病,以神經(jīng)肌肉退行性變?yōu)樘卣鳌Ｔ摬⊥ǔＳ煽辜∥s蛋白基因突變引起,并由此導(dǎo)致抗肌萎縮蛋白功能缺失。DMD病情嚴(yán)重,預(yù)后不良,一般20歲左右死于呼吸衰竭或心力衰竭。DMD在男性新生兒中的發(fā)病率為1/3500,其致病基因?yàn)榭辜∥s蛋白基因(dystrophy,DMD基因)。DMD主要的突變類(lèi)型為基因部分缺失或重復(fù),約占全部突變類(lèi)型的60%。由于DMD目前尚無(wú)有效治療方法,DMD致病基因的檢測(cè)、產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢是預(yù)防DMD的關(guān)鍵措施。本研究收集到一例肌營(yíng)養(yǎng)不良家系,應(yīng)用二代測(cè)序,在先證者的DMD基因51號(hào)外顯子剪接位點(diǎn)附近發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新發(fā)致病突變C.7310-11AG,家系內(nèi)另一名患者同樣有此變異,兩名患者的母親為該變異的雜合攜帶者。通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)并結(jié)合sanger測(cè)序,發(fā)現(xiàn)新的剪切位點(diǎn)變異改變了DMD的剪接,使10bp內(nèi)含子堿基插入了mRNA中。DMD的mRNA插入10bp堿基后,經(jīng)分析會(huì)形成截短蛋白,可能導(dǎo)致蛋白產(chǎn)物的活性降低,從而導(dǎo)致杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥。基底細(xì)胞痣綜合征(Basal cell nevus syndrome,BCNS)又稱Gorlin-Goltz綜合征(Gorlin-Goltz syndrome,GGS),是一種罕見(jiàn)的常染色體顯性遺傳性疾病。目前主要的致病基因?yàn)镻TCH1,也有少數(shù)報(bào)道認(rèn)為PTCH2、SUFU基因與BCNS有關(guān),尤其是伴有成神經(jīng)管細(xì)胞瘤或腦膜瘤的BCNS。BCNS的臨床表現(xiàn)包括多個(gè)器官的異常,主要有顱面異常、神經(jīng)系統(tǒng)異常、骨骼異常、手足異常等。本研究收集到一例BCNS家系,然后用sanger測(cè)序檢測(cè)PTCH1基因。在先證者PTCH1基因上2號(hào)外顯子發(fā)現(xiàn)一新發(fā)的剪切位點(diǎn)變異C.7310-11AG,家系內(nèi)另一患者也有相同變異。通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)和sanger測(cè)序,發(fā)現(xiàn)剪切位點(diǎn)變異使PTCH1基因2號(hào)外顯子跳讀。綜上,這一新發(fā)變異是BCNS的致病突變。
【學(xué)位單位】：湖南理工學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R746.2;R596;R440
【部分圖文】：

學(xué)院碩士學(xué)位論文 第2章 一例杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥的基因檢測(cè)與分小孩比較智力尚可。步態(tài)異常，不能跳躍，跑步時(shí)常跌倒，上廁所不能單獨(dú)起立，腓腸肌假性肥大，四肢腱反射稍遲鈍，扁平足；血液檢測(cè)顯示肌酸肌酶（CreaCK）升高。先證者弟弟（Ⅳ-8），兩歲半，有相同癥狀，程度較輕，血液檢測(cè)顯高。先證者母親（Ⅲ-3）表型正常，但是血液檢測(cè)顯示 CK 升高。家系內(nèi)其他成員，第二代成員中有兩名已去世的男性，生前同樣表現(xiàn)出肌營(yíng)養(yǎng)不良的癥狀。

先證者弟弟（Ⅳ-8），兩歲半，有相同癥狀，程度較輕，血母親（Ⅲ-3）表型正常，但是血液檢測(cè)顯示 CK 升高。家系成員中有兩名已去世的男性，生前同樣表現(xiàn)出肌營(yíng)養(yǎng)不良的癥圖 2-1 杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良家系圖，圖中箭頭所指的為先證者

圖 2-3 PCR 反應(yīng)條件 PCR 產(chǎn)物鑒定制備 1%瓊脂糖凝膠：稱取瓊脂糖粉末 0.5 g，加入 1×TBE 緩沖液至 30 mL，在加熱溶解；加入核酸染料 5 μL，振蕩搖晃均勻；趁膠微熱不燙手時(shí)，將膠倒入制膠膜，插入梳子，避免氣泡產(chǎn)生；待膠完全冷卻凝固后，將膠放入電泳槽，向電泳槽內(nèi)加入 1×TBE 緩沖液直至漫在點(diǎn)樣孔進(jìn)行點(diǎn)樣，DNA maker 溶液和 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物均為 3 μL。設(shè)置電壓為 150 V，時(shí)間為 20 分鐘，進(jìn)行凝膠電泳。在紫外分析儀中觀察凝膠電泳結(jié)果，選擇帶型單一及濃度較髙的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè) PCR 產(chǎn)物測(cè)序與分析取凝膠電泳結(jié)果理想的 PCR 產(chǎn)物送至鉑尚生物技術(shù)有限公司進(jìn)行 sanger 測(cè)序，測(cè)
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