杜氏肌營養(yǎng)不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一種X染色體隱性遺傳疾病,以神經肌肉退行性變?yōu)樘卣�。該病通常由抗肌萎縮蛋白基因突變引起,并由此導致抗肌萎縮蛋白功能缺失。DMD病情嚴重,預后不良,一般20歲左右死于呼吸衰竭或心力衰竭。DMD在男性新生兒中的發(fā)病率為1/3500,其致病基因為抗肌萎縮蛋白基因(dystrophy,DMD基因)。DMD主要的突變類型為基因部分缺失或重復,約占全部突變類型的60%。由于DMD目前尚無有效治療方法,DMD致病基因的檢測、產前診斷及遺傳咨詢是預防DMD的關鍵措施。本研究收集到一例肌營養(yǎng)不良家系,應用二代測序,在先證者的DMD基因51號外顯子剪接位點附近發(fā)現(xiàn)了一個新發(fā)致病突變C.7310-11AG,家系內另一名患者同樣有此變異,兩名患者的母親為該變異的雜合攜帶者。通過RT-PCR實驗并結合sanger測序,發(fā)現(xiàn)新的剪切位點變異改變了DMD的剪接,使10bp內含子堿基插入了mRNA中。DMD的mRNA插入10bp堿基后,經分析會形成截短蛋白,可能導致蛋白產物的活性降低,從而導致杜氏肌營養(yǎng)不良癥�；准毎刖C合征(Basal cell nevus syndrome,BCNS)又稱Gorlin-Goltz綜合征(Gorlin-Goltz syndrome,GGS),是一種罕見的常染色體顯性遺傳性疾病。目前主要的致病基因為PTCH1,也有少數(shù)報道認為PTCH2、SUFU基因與BCNS有關,尤其是伴有成神經管細胞瘤或腦膜瘤的BCNS。BCNS的臨床表現(xiàn)包括多個器官的異常,主要有顱面異常、神經系統(tǒng)異常、骨骼異常、手足異常等。本研究收集到一例BCNS家系,然后用sanger測序檢測PTCH1基因。在先證者PTCH1基因上2號外顯子發(fā)現(xiàn)一新發(fā)的剪切位點變異C.7310-11AG,家系內另一患者也有相同變異。通過RT-PCR實驗和sanger測序,發(fā)現(xiàn)剪切位點變異使PTCH1基因2號外顯子跳讀。綜上,這一新發(fā)變異是BCNS的致病突變。
【學位單位】：湖南理工學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R746.2;R596;R440
【部分圖文】：

學院碩士學位論文 第2章 一例杜氏肌營養(yǎng)不良癥的基因檢測與分小孩比較智力尚可。步態(tài)異常，不能跳躍，跑步時常跌倒，上廁所不能單獨起立，腓腸肌假性肥大，四肢腱反射稍遲鈍，扁平足；血液檢測顯示肌酸肌酶（CreaCK）升高。先證者弟弟（Ⅳ-8），兩歲半，有相同癥狀，程度較輕，血液檢測顯高。先證者母親（Ⅲ-3）表型正常，但是血液檢測顯示 CK 升高。家系內其他成員，第二代成員中有兩名已去世的男性，生前同樣表現(xiàn)出肌營養(yǎng)不良的癥狀。

先證者弟弟（Ⅳ-8），兩歲半，有相同癥狀，程度較輕，血母親（Ⅲ-3）表型正常，但是血液檢測顯示 CK 升高。家系成員中有兩名已去世的男性，生前同樣表現(xiàn)出肌營養(yǎng)不良的癥圖 2-1 杜氏肌營養(yǎng)不良家系圖，圖中箭頭所指的為先證者

圖 2-3 PCR 反應條件 PCR 產物鑒定制備 1%瓊脂糖凝膠：稱取瓊脂糖粉末 0.5 g，加入 1×TBE 緩沖液至 30 mL，在加熱溶解；加入核酸染料 5 μL，振蕩搖晃均勻；趁膠微熱不燙手時，將膠倒入制膠膜，插入梳子，避免氣泡產生；待膠完全冷卻凝固后，將膠放入電泳槽，向電泳槽內加入 1×TBE 緩沖液直至漫在點樣孔進行點樣，DNA maker 溶液和 PCR 擴增產物均為 3 μL。設置電壓為 150 V，時間為 20 分鐘，進行凝膠電泳。在紫外分析儀中觀察凝膠電泳結果，選擇帶型單一及濃度較髙的擴增產物進行測 PCR 產物測序與分析取凝膠電泳結果理想的 PCR 產物送至鉑尚生物技術有限公司進行 sanger 測序，測
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