發(fā)布時間：2020-10-26 17:23

　　 目的:探討研究抗感染治療及抗感染聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)治療對膿毒癥大鼠腸道微生態(tài)的影響,揭示抗感染治療及抗感染聯(lián)合免疫調(diào)節(jié)治療膿毒癥的療效機(jī)理,以及對膿毒癥大鼠腸道微生態(tài)影響的機(jī)制,為闡明膿毒癥的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供理論依據(jù),為探索膿毒癥診斷和治療方案的優(yōu)化奠定基礎(chǔ)。方法:隨機(jī)將66只150-250 g SD雄性大鼠分成5組(假手術(shù)組,膿毒癥組,環(huán)磷酰胺組,亞胺培南組,亞胺培南聯(lián)合環(huán)磷酰胺組)。采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture[CLP])復(fù)制膿毒癥模型,假手術(shù)組大鼠進(jìn)行同樣的手術(shù)操作,但不進(jìn)行穿孔及結(jié)扎。另隨機(jī)選取50只大鼠給予同樣的造模方式及分組(每組10只大鼠),進(jìn)行各組大鼠生存分析研究。判斷和鑒定膿毒癥模型復(fù)制成功后,通過腹腔注射亞胺培南(120 mg/kg)及環(huán)磷酰胺(10 mg/kg)給予干預(yù)治療,每隔12小時給予一次藥物治療;生存分析動物連續(xù)給予干預(yù)治療7日,記錄各組大鼠生存時間及數(shù)量并繪制7天生存曲線,定量分析各組生存數(shù)據(jù);腸道屏障功能分析及機(jī)制探討,選取給予治療后24小時時間節(jié)點。通過熒光示蹤法檢測各組大鼠血清中FD-70濃度,定量分析各組大鼠腸道通透性。通過HE組織切片,觀察各組大鼠腸道組織損傷,以及TUNEL法,定性分析各組大鼠腸道黏膜細(xì)胞凋亡,進(jìn)一步探討分析各組大鼠腸道跨細(xì)胞通透性水平。通過蛋白印跡技術(shù)(Western-blot技術(shù)),檢測各組大鼠腸道緊密連接蛋白(occludin)表達(dá)水平,探討分析各組大鼠細(xì)胞間通透性改變。通過酶聯(lián)免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay[ELISA])法檢測各組大鼠血清細(xì)胞因子(interleukin[IL]-6,IL-10,tumor necrosis factor[TNF]-α)表達(dá)水平,分析細(xì)胞因子對各組大鼠腸道通透性的影響。結(jié)果:(1)成功復(fù)制膿毒癥模型,膿毒癥大鼠7天生存率為18.18%。亞胺培南組膿毒癥大鼠生存率明顯提高(50%vs 18.18%),而聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠生存率進(jìn)一步改善(70%vs 50%)。(2)通過檢測血漿中FD-70表達(dá)量定量分析腸道通透性的改變,膿毒癥大鼠腸道通透性明顯增強(qiáng),亞胺培南治療組及聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠通透性明顯改善,而亞胺培南組與聯(lián)合治療組相比,聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠腸道通透性高于亞胺培南組。(3)進(jìn)一步探討聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠腸道通透性增加的可能機(jī)制,采用HE組織切片定性檢測各組大鼠腸道組織的病理損傷,以及TUNEL法定性檢測各組大鼠腸道黏膜細(xì)胞凋亡分析腸道跨細(xì)胞通透性。結(jié)果顯示,膿毒癥大鼠出現(xiàn)明顯的腸道組織損傷及細(xì)胞凋亡,亞胺培南組及聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠腸道組織損傷及凋亡明顯改善,亞胺培南組與聯(lián)合治療治療組相比,膿毒癥大鼠腸道組織病理損傷及腸道細(xì)胞凋亡未見明顯差別。(4)定量檢測了腸道緊密連接蛋白(occludin)表達(dá)水平用于進(jìn)一步探討分析不同治療方式對各組大鼠細(xì)胞旁通透性的影響。結(jié)果顯示,膿毒癥大鼠腸道組織occludin蛋白表達(dá)減少,亞胺培南及聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠腸道組織occludin表達(dá)量增加,而聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠腸道組織occludin蛋白表達(dá)量明顯低于亞胺培南治療組。(5)進(jìn)一步探討細(xì)胞因子對各組大鼠腸道通透性的影響。結(jié)果顯示膿毒癥大鼠血清IL-6,IL-10,TNF-α表達(dá)水平均是明顯增強(qiáng),亞胺培南組膿毒癥大鼠血清IL-6,IL-10,TNF-α表達(dá)水平均是明顯減弱,而聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠血清IL-6,IL-10表達(dá)水平進(jìn)一步減弱,而TNF-α表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)論:(1)亞胺培南治療可改善膿毒癥大鼠的生存率;亞胺培南聯(lián)合小劑量環(huán)磷酰胺治療,可明顯提高膿毒癥大鼠生存率。(2)亞胺培南治療對膿毒癥大鼠腸道黏膜屏障損傷有保護(hù)作用。亞胺培南聯(lián)合小劑量環(huán)磷酰胺治療,可加重膿毒癥大鼠腸道黏膜屏障功能障礙,其可能機(jī)制是IL-10因子及occludin蛋白表達(dá)減弱。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

圖 1.各組大鼠生存曲線。注：##代表與假手術(shù)組相比 p<0.05 ；**代表與膿毒癥組相比 p<0.05。*代表與亞胺培南組相比 p<0.05。Sham 代表假手術(shù)組，CLP 代表膿毒癥組，CTX 代表環(huán)磷酰胺組，Imipenem 代表亞胺培南組亞胺培南組，Imipenem+CTX 代表亞胺培南+環(huán)磷酰胺組。4.3 各組大鼠腸道通透性檢測通過熒光酶標(biāo)儀檢測各組大鼠血清中 FD-70 濃度，檢測腸道通透性改變。膿毒癥大鼠腸道通透性明顯上升（p<0.05）。亞胺培南組與聯(lián)合治療組，通透性得到明顯改善（p<0.05），而聯(lián)合治療組通透性高于亞胺培南治療組（p<0.05）。單用環(huán)磷酰胺治療，膿毒癥大鼠腸道通透性高于單用亞胺培南治療及聯(lián)合治療（p<0.05）。表格 1. 各組大鼠血清 FD-70 濃度定量分析分組 均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差假手術(shù)組 0.4092±0.00647#

鼠血清 FD-70 濃度。#代表與假手術(shù)組相比 p<0.05 ；**代表與膿毒癥組相南組相比；Sham 代表假手術(shù)組，CLP 代表膿毒癥組，CTX 代表環(huán)磷酰胺組亞胺培南組，Imipenem+CTX 代表亞胺培南+環(huán)磷酰胺組。大鼠腸道病理檢測E 染色檢測各組膿毒癥大鼠腸道黏膜損傷。膿毒癥造模組可見明胞滲出，腸道絨毛斷裂，以及腸道腺體消失。而亞胺培南組與聯(lián)損傷得到改善，炎癥細(xì)胞滲出減少，腸道絨毛斷裂減少，可見完毒癥大鼠腸道組織切片可見完整腸道組織，但炎癥反應(yīng)明顯加重潤，并出現(xiàn)散在出血點。

圖 5 各組大鼠 occludin 蛋白表達(dá)量定性分析。#代表與假手術(shù)組比較 p<0.05 ；*代表與膿毒癥組比較 p<0.05；Sham 和 A 代表假手術(shù)組，CLP 和 B 代表膿毒癥組，CTX 和 C 代表環(huán)磷酰胺組，Imipenem和 D 代表亞胺培南組亞胺培南組，Imipenem+CTX 和 E 代表亞胺培南+環(huán)磷酰胺組；OD ratio 代表occludin/β-actin 相對比值。CLP, cecal ligation and puncture. CTX, cyclophosphamide。4.7 各組大鼠血清細(xì)胞因子表達(dá)4.7.1 各組大鼠血清 IL-6 因子表達(dá)水平膿毒癥大鼠血清 IL-6 因子表達(dá)水平明顯增強(qiáng)（p<0.05）。與膿毒癥大鼠相比較，環(huán)磷酰胺組、亞胺培南組以及聯(lián)合治療組大鼠血清 IL-6 因子表達(dá)水平明顯減弱（p<0.05）。亞胺培南組與聯(lián)合治療組相比，聯(lián)合治療組 IL-6 表達(dá)水平明顯減弱（p<0.05）。環(huán)磷酰胺組膿毒癥大鼠血清 IL-6 表達(dá)水平明顯弱于亞胺培南組與聯(lián)合治療組膿毒癥大鼠血清IL-6 表達(dá)水平（p<0.05）。表格 4. 各組大鼠血清 IL-6 表達(dá)量定量分析
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2857284