目的建立SLC2A9(rs3733591、rs3733589、rs1014290、rs3756231、rs2276961)、SLC22A12(rs7932775、rs559946)、SLC17A1(rs1183201)和GCKR(rs780093、rs780094、rs6744393)基因的11個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)位點(diǎn)的常規(guī)化快速分子診斷技術(shù),并驗(yàn)證其在蘭州地區(qū)漢族人群中的痛風(fēng)易感性。方法通過(guò)在線引物設(shè)計(jì)軟件Primer-BLAST設(shè)計(jì)上述11個(gè)SNP位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增引物,建立其聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)-高分辨熔解(high resolution melting,HRM)檢測(cè)體系,并用Sanger直接測(cè)序法驗(yàn)證該體系。然后對(duì)398例臨床痛風(fēng)標(biāo)本進(jìn)行11個(gè)SNP位點(diǎn)的基因分型,以NCBI庫(kù)中千人基因組計(jì)劃的中國(guó)北京漢族(Han Chinese in Beijing,CHB)和中國(guó)南方漢族(Southern Han Chinese,CHS)人群共211例為對(duì)照組,進(jìn)行病例對(duì)照研究,驗(yàn)證其在蘭州地區(qū)漢族人群中的痛風(fēng)易感性。結(jié)果(1)自建的PCR-HRM檢測(cè)方法經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證,能準(zhǔn)確基因分型11個(gè)SNP位點(diǎn)。(2)病例對(duì)照研究統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示:1)痛風(fēng)易感性分析:11個(gè)SNP中有5個(gè)位點(diǎn),即rs3733591、rs3733589、rs1014290、rs3756231和rs7932775,其基因型頻率和等位基因頻率在痛風(fēng)組和對(duì)照組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2)痛風(fēng)患病風(fēng)險(xiǎn)的二元Logestic回歸分析:(1)rs3733591:與野生TT基因型相比,純合突變CC基因型增加痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);在顯性(CC+CT vs TT)和隱性(CC vs TT+CT)遺傳模型下,痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均增加。(2)rs3733589:與野生GG基因型相比,純合突變AA基因型降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);在顯性(AA+AG vs GG)和隱性(AA vs GG+AG)遺傳模型下,痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均降低。(3)rs1014290:與野生AA基因型相比,純合突變GG基因型降低痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);在隱性遺傳模型(GG vs AA+AG)下,痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低。(4)rs3756231:與野生AA基因型相比,純合突變GG基因型降低痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);在隱性遺傳模型(GG vs AA+AG)下,痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)降低。(5)rs7932775:與野生TT基因型相比,純合突變CC和雜合突變CT基因型均增加痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);在顯性遺傳模型(CC+CT vs TT)下,痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。3)單倍型分析:(1)SLC2A9基因rs3733591、rs3733589、rs1014290、rs3756231和rs2276961位點(diǎn)組成的單倍型CGAAT和TAAGC增加痛風(fēng)的患病風(fēng)險(xiǎn)。(2)SLC22A12基因rs7932775和rs55994位點(diǎn)組成的CC單倍型增加痛風(fēng)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。4)痛風(fēng)組高甘油三酯(triglyceride,TG)分層分析:發(fā)現(xiàn)11個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率在高TG組和TG正常組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論建立的11個(gè)SNP位點(diǎn)的PCR-HRM分子診斷技術(shù)準(zhǔn)確完成了398例痛風(fēng)臨床標(biāo)本的基因分型,可用于快速、準(zhǔn)確的臨床常規(guī)化檢測(cè);SLC2A9(rs3733591、rs3733589、rs1014290和rs3756231)和SLC22A12(rs7932775)基因與蘭州地區(qū)漢族人群的痛風(fēng)易感性相關(guān)。
【學(xué)位單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R589.7;R440
【部分圖文】：

痛風(fēng)是一種多基因遺傳病，其發(fā)生和發(fā)展受環(huán)境因素和遺傳因素的共同作用，其中遺傳因素起重要的作用。早期的研究發(fā)現(xiàn)，磷酸核糖焦磷酸合成酶（phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 1，PRPS1）和次黃嘌呤/鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1，HPRT1）等基因稀有單基因突變會(huì)影響嘌呤合成代謝，進(jìn)而引起高尿酸血癥和痛風(fēng)[18]。PRPS1 及 HPRT1 是嘌呤從頭合成和補(bǔ)救途徑的重要催化酶，其中 PRPS1 超活性和 HPRT1 功能缺失可引起 X 染色體連鎖的嘌呤代謝疾病，臨床上表現(xiàn)為高尿酸血癥和痛風(fēng)[21]。近年來(lái)的多個(gè)全基因組關(guān)聯(lián)分析（genome-wide association studies，GWAS）研究[18, 22-25]，確認(rèn)了近 40 個(gè)影響尿酸水平和痛風(fēng)發(fā)生的易感基因位點(diǎn)，共能解釋不到 10%的尿酸水平變化。其中一些易感基因在人群中具有人種異質(zhì)性，如圖1-2[18]。這些研究主要集中于編碼尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因，其中 SLC2A9 和 ABCG2 是與高尿酸血癥和痛風(fēng)有關(guān)的主要基因，可解釋 3-4%的尿酸水平變化，其次是SLC22A12 和 SLC17A1 等其余尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因，與糖類、脂類代謝相關(guān)的 GCKR基因也是痛風(fēng)易感基因。

共能解釋不到 10%的尿酸水平變化。其中一些易感基因在人群中具有人種異質(zhì)性，如圖1-2[18]。這些研究主要集中于編碼尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的基因，其中 SLC2A9 和 ABCG2 是與高尿酸血癥和痛風(fēng)有關(guān)的主要基因，可解釋 3-4%的尿酸水平變化，其次是SLC22A12 和 SLC17A1 等其余尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因，與糖類、脂類代謝相關(guān)的 GCKR基因也是痛風(fēng)易感基因。圖 1-1 尿酸水平的影響因素[18]

SLC2A9、SLC22A12、SLC17A1、和州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 基因多態(tài)性分子診斷技術(shù)的建立與瓊脂糖凝膠 100V、15min 電泳，得到了單一、清晰、位置合適的電泳條帶泳如圖 3-2 所示，其中 rs780093 擴(kuò)增片段為 83bp，其余 SNP 位點(diǎn)均在 100-間。在電泳圖中：M 代表 50bp DNA Marker（從上到下依次為 500bp、40300bp、200bp、150bp、100bp、50bp），1 泳帶為 rs7932775 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（1292-3 泳帶為 rs559946 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（118bp）、4-5 泳帶為 rs780094 位點(diǎn) P物（133bp）、6-7 泳帶為 rs2276961 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（118bp）、8-9 泳帶為 rs7位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（83bp）、10-11 泳帶為 rs3733591 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（145bp）、泳帶為 rs3733589 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（154bp）、14 泳帶為 rs1183201 位點(diǎn) PCR（142bp）、15 泳帶為 rs1014290 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物(133bp)、16 泳帶為 rs37562點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（106bp)、17 泳帶為 rs6744393 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物（104bp）。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張小珍;SLC2A9、SLC22A12、SLC17A1和GCKR基因多態(tài)性分子診斷技術(shù)的建立與應(yīng)用[D];蘭州大學(xué);2018年

2 馬紅飛;血漿尿酸水平、GCKR基因多態(tài)性與2型糖尿病的關(guān)聯(lián)性研究[D];華中科技大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2853686