發(fā)布時(shí)間：2020-10-23 07:13

　　 背景:膿毒癥是由于宿主對(duì)感染的反應(yīng)失調(diào)而引起的致命性器官功能障礙,其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)而引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞的激活、甚至損傷和功能紊亂,在膿毒癥的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用。白介素-6(Interleukin-6,IL-6)作為多功能炎性細(xì)胞因子,是炎性介質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵成份,探索IL-6對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能和形態(tài)的影響及其機(jī)制對(duì)膿毒癥的診治有著重要意義。細(xì)胞凋亡和自噬在維持細(xì)胞存活、更新、物質(zhì)再利用中起著重要作用,參與膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展。本研究采用IL-6刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞,以研究IL-6對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和自噬的影響及其相互作用。目的:探討IL-6對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞自噬和凋亡的影響以及自噬與凋亡的相互作用。方法:采用5、10、20、50ng/mL IL-6誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)24h。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化,單丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色觀察細(xì)胞嗜酸性自噬泡情況,透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白激活型天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase3)、自噬相關(guān)蛋白微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)和(sequestosome 1,SQSTM1)/p62的表達(dá)水平。采用IL-6分別聯(lián)合自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(RAPA)誘導(dǎo)HUVECs,觀察細(xì)胞增殖、凋亡情況及相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:與對(duì)照組相比,IL-6呈濃度依賴性降低HUVECs的增殖活性和LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的表達(dá)(P0.05),增加細(xì)胞凋亡和cleaved-Caspase3、p62的表達(dá)(P0.05),細(xì)胞內(nèi)自噬泡減少(P0.05),熒光強(qiáng)度明顯減弱,且自噬小體明顯減少。與IL-6刺激組相比,IL-6聯(lián)合應(yīng)用3-MA誘導(dǎo)HUVECs可進(jìn)一步抑制HUVECs的自噬水平,細(xì)胞內(nèi)自噬泡和自噬小體數(shù)目減少(P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá)下降(P0.05),p62 表達(dá)增加(P0.05),細(xì)胞 cleaved-Caspase3表達(dá)和凋亡水平增加(P0.05)。與IL-6刺激組相比,IL-6聯(lián)合應(yīng)用RAPA誘導(dǎo)HUVECs可以抑制IL-6誘導(dǎo)的的細(xì)胞自噬水平下降,細(xì)胞內(nèi)自噬泡和自噬小體數(shù)目增多(P0.05),細(xì)胞內(nèi)LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá)升高(P0.05),p62 表達(dá)下降(P0.05),cleaved-Caspase3 表達(dá)和細(xì)胞凋亡水平下降(P0.05)。結(jié)論:IL-6可通過(guò)抑制自噬增加血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．?＊Ｐ＜?０．０５，?＊＊Ｐ＜?０．０１?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?ＡＰ＜?０．０５?ｖｓ?ＩＬ－６?ｇｒｏｕｐ．?ｎ＝３９?ｘ±ｓ??３．５增強(qiáng)自噬對(duì)ＩＬ－６誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影晌??在ＩＬ－６刺激ＨＵＶＥＣｓ的同時(shí)加入自噬促進(jìn)劑ＲＡＰＡ，檢測(cè)結(jié)果如圖５所示。??與對(duì)照組相比，ＲＡＰＡ刺激組ＨＵＶＥＣｓ中嗜酸性自噬泡增加（尸＜０．０５）、??ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ表達(dá)增力口?ＧＰ＜０＿０５）、ｐ６２表達(dá)減少（尸＜０＿０５）；與ＩＬ－６朿嫩組相??比，ＩＬ－６聯(lián)合ＲＡＰＡ刺激組ＨＵＶＥＣｓ中嗜酸性自噬泡增加（Ｐ＜０．０５?）、ＬＣ３ＩＩ?／?ＬＣ３?Ｉ??表達(dá)增加（尸＜０．０５）、ｐ６２表達(dá)減少（尸＜０．０５）、ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ?３表達(dá)減少（尸??＜０．０５）、細(xì)胞凋亡率降低（戶＜０．０５）。??０＞??ｓ??ｉ?６０－?￣??ｉ?牛??｜?４０－Ｔ－?￣—??導(dǎo)?＊??°?２０－?丨丁??勢(shì)??〇??芎?〇Ｕ???????Ｌ??８５?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＩＬ－６?ＲＡＰＡ?ＩＬ－６＋ＲＡＰＡ??Ａ??２０??
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