背景:膿毒癥是由于宿主對感染的反應失調(diào)而引起的致命性器官功能障礙,其發(fā)病機制尚未完全明確。炎癥介質(zhì)和細胞因子作用于血管內(nèi)皮細胞進而引發(fā)內(nèi)皮細胞的激活、甚至損傷和功能紊亂,在膿毒癥的發(fā)生與發(fā)展過程中起到至關重要的作用。白介素-6(Interleukin-6,IL-6)作為多功能炎性細胞因子,是炎性介質(zhì)網(wǎng)絡的關鍵成份,探索IL-6對內(nèi)皮細胞功能和形態(tài)的影響及其機制對膿毒癥的診治有著重要意義。細胞凋亡和自噬在維持細胞存活、更新、物質(zhì)再利用中起著重要作用,參與膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展。本研究采用IL-6刺激血管內(nèi)皮細胞,以研究IL-6對血管內(nèi)皮細胞凋亡和自噬的影響及其相互作用。目的:探討IL-6對血管內(nèi)皮細胞自噬和凋亡的影響以及自噬與凋亡的相互作用。方法:采用5、10、20、50ng/mL IL-6誘導體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)24h。CCK-8法檢測細胞增殖活性,流式細胞術檢測細胞凋亡變化,單丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色觀察細胞嗜酸性自噬泡情況,透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構的變化,蛋白質(zhì)印跡法檢測凋亡相關蛋白激活型天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-Caspase3)、自噬相關蛋白微管相關蛋白輕鏈3(LC3)和(sequestosome 1,SQSTM1)/p62的表達水平。采用IL-6分別聯(lián)合自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)或自噬誘導劑雷帕霉素(RAPA)誘導HUVECs,觀察細胞增殖、凋亡情況及相關蛋白的表達變化。結(jié)果:與對照組相比,IL-6呈濃度依賴性降低HUVECs的增殖活性和LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的表達(P0.05),增加細胞凋亡和cleaved-Caspase3、p62的表達(P0.05),細胞內(nèi)自噬泡減少(P0.05),熒光強度明顯減弱,且自噬小體明顯減少。與IL-6刺激組相比,IL-6聯(lián)合應用3-MA誘導HUVECs可進一步抑制HUVECs的自噬水平,細胞內(nèi)自噬泡和自噬小體數(shù)目減少(P0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達下降(P0.05),p62 表達增加(P0.05),細胞 cleaved-Caspase3表達和凋亡水平增加(P0.05)。與IL-6刺激組相比,IL-6聯(lián)合應用RAPA誘導HUVECs可以抑制IL-6誘導的的細胞自噬水平下降,細胞內(nèi)自噬泡和自噬小體數(shù)目增多(P0.05),細胞內(nèi)LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達升高(P0.05),p62 表達下降(P0.05),cleaved-Caspase3 表達和細胞凋亡水平下降(P0.05)。結(jié)論:IL-6可通過抑制自噬增加血管內(nèi)皮細胞凋亡。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．?＊Ｐ＜?０．０５，?＊＊Ｐ＜?０．０１?ｖｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?ＡＰ＜?０．０５?ｖｓ?ＩＬ－６?ｇｒｏｕｐ．?ｎ＝３９?ｘ±ｓ??３．５增強自噬對ＩＬ－６誘導血管內(nèi)皮細胞凋亡的影晌??在ＩＬ－６刺激ＨＵＶＥＣｓ的同時加入自噬促進劑ＲＡＰＡ，檢測結(jié)果如圖５所示。??與對照組相比，ＲＡＰＡ刺激組ＨＵＶＥＣｓ中嗜酸性自噬泡增加（尸＜０．０５）、??ＬＣ３ＩＩ／ＬＣ３Ｉ表達增力口?ＧＰ＜０＿０５）、ｐ６２表達減少（尸＜０＿０５）；與ＩＬ－６朿嫩組相??比，ＩＬ－６聯(lián)合ＲＡＰＡ刺激組ＨＵＶＥＣｓ中嗜酸性自噬泡增加（Ｐ＜０．０５?）、ＬＣ３ＩＩ?／?ＬＣ３?Ｉ??表達增加（尸＜０．０５）、ｐ６２表達減少（尸＜０．０５）、ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ?３表達減少（尸??＜０．０５）、細胞凋亡率降低（戶＜０．０５）。??０＞??ｓ??ｉ?６０－?￣??ｉ?牛??｜?４０－Ｔ－?￣—??導?＊??°?２０－?丨丁??勢??〇??芎?〇Ｕ???????Ｌ??８５?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＩＬ－６?ＲＡＰＡ?ＩＬ－６＋ＲＡＰＡ??Ａ??２０??
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本文編號：2852709