目的:本研究基于UPLC-MS/MS的代謝組學(xué)研究策略,通過對脂肪血制備的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞在儲存期不同時間點進(jìn)行代謝組學(xué)分析,探討脂肪血制備的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞在常規(guī)儲存期間的主要代謝特性改變,為脂肪血制備的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞的儲存和臨床使用提供參考。方法:采用獻(xiàn)血者血漿TG、TC濃度作為標(biāo)本分組的依據(jù),選擇輕脂肪血(B-H)、中度脂肪血(H)、重度脂肪血(V-H)和正常對照全血(C)各10U,制備成去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞,在制備當(dāng)天(d0)、d7、d14、d21、d28和d35分別取樣。檢測紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、鉀離子濃度、鈉離子濃度、游離血紅蛋白、pH值等質(zhì)量指標(biāo);采用UPLC-MS/MS檢測紅細(xì)胞內(nèi)代謝物;采用Mann–Whitney U檢驗分析兩組標(biāo)本糖酵解途徑和磷酸戊糖途徑代謝物的差異,通過代謝物分析脂肪血制備的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞儲存期的代謝途徑變化。結(jié)果:1.血常規(guī)檢測結(jié)果:對照組紅細(xì)胞和3組脂肪血制備的紅細(xì)胞在儲存期間的血液學(xué)參數(shù)無顯著性變化,紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白和MCH無趨勢性變化,紅細(xì)胞儲存過程中HCT和MCV下降,MCHC和RDWR呈上升趨勢,與d0比較,各時間點的變化均無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。血液學(xué)參數(shù)變化不明顯(P0.05)。2.生化指標(biāo)檢測結(jié)果:與對照組比較,K~+濃度H組和V-H組第7天起增高均有統(tǒng)計學(xué)意義;FHb濃度,在H組第7天和V-H組第0天起增高均有統(tǒng)計學(xué)意義。各組紅細(xì)胞之間Na~+濃度、pH值變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.代謝組學(xué)分析結(jié)果:D0實驗組紅細(xì)胞內(nèi)代謝物葡萄糖、腺嘌呤、丙酮酸、GSH、GSSG和煙堿酰胺均高于對照組(p0.05)。D14實驗組紅細(xì)胞中葡萄糖、丙酮酸和GSH低于對照組(p0.05),腺嘌呤、煙堿酰胺和GSSG高于對照組。D35實驗組紅細(xì)胞中葡萄糖低于對照組(p0.05),腺嘌呤、煙堿酰胺高于對照組(p0.05),兩組之間的丙酮酸、GSSG和GSH差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:在儲存條件下,葡萄糖分解中間代謝物通過戊糖磷酸途徑(PPP)來增加NADPH的產(chǎn)生,以維持GSH的還原狀態(tài)。儲存條件下,氧化環(huán)境和氧化應(yīng)激導(dǎo)致脂肪血制備的紅細(xì)胞儲存期代謝特性發(fā)生變化,與正常紅細(xì)胞相比,脂肪血紅細(xì)胞儲存期內(nèi)糖酵解途徑減弱,磷酸戊糖途徑增強(qiáng)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R446.11
【部分圖文】：

實驗組和對照組在各儲存時間點的生化指標(biāo)檢測結(jié)果如圖 1 所示。結(jié)果顯示，照組和實驗組懸浮紅細(xì)胞在儲存過程中，鉀離子在上清液中積累，并在儲存第5 天達(dá)到最大值。與對照組相比，H 組紅細(xì)胞和 V-H 組紅細(xì)胞上清液中，鉀離子度在儲存第 7 天至 35 天增高有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），而 B-H 組和對照組的鉀度差異無顯著性（p>0.05）（圖 1A）。各組檢測結(jié)果中，上清液中的鈉離子濃度降從儲存初期（0 天）至第 35 天均呈下降趨勢，但各組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞0.05）（圖 1B）。各組 pH 值從儲存初期（0 天）至第 35 天均呈下降趨勢，但組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（圖 1C）。對照組和 3 組實驗組在儲存過程，上清液中的游離血紅蛋白濃度逐漸升高。與對照組相比，V-H 組紅細(xì)胞上清中游離血紅蛋白濃度，在儲存第 0 天至 35 天增高均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），H從第 7 天至第 35 天增高均有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），而 B-H 組和對照組的游離紅蛋白濃度差異無顯著性（p>0.05）（圖 1D）。

2.4 代謝組學(xué)分析結(jié)果2.4.1 UPLC-MS/MS 分析系統(tǒng)的穩(wěn)定性評估采用質(zhì)控標(biāo)本（QC）的檢測數(shù)據(jù)來評估檢測儀器分析過程中系統(tǒng)穩(wěn)定性。對用于系統(tǒng)穩(wěn)定性評價的 QC 組樣本檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行 PCA 分析。QC 組樣本檢測結(jié)果聚集性較好，并且聚集在所有檢測樣本的中間位置，所有樣本結(jié)果靠中心位置，說明在整個檢測過程中儀器的系統(tǒng)穩(wěn)定性好。2.4.2 分析代謝輪廓對紅細(xì)胞代謝狀態(tài)的區(qū)分能力對檢測結(jié)果的缺失值使用 80%去值原則去除缺失值過多的變量，剔除特征離子數(shù)小于 80%標(biāo)本數(shù)的離子后，采用 SIMCA-P 13.0 主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判別分析（OPLS-DA）。在無監(jiān)督性的 OPLS-DA 模型中，對照組和脂血組的檢測結(jié)果能夠得到很明顯的區(qū)分，如圖 2 所示。

2.4.4 代謝物分析結(jié)果將經(jīng)過篩選的特征離子的 m/z 和 t 在 HMDB 和 KEGG 數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行搜索，確定有意義的代謝物。分析不同儲存期脂肪血紅細(xì)胞和正常紅細(xì)胞之間能量代謝物葡萄糖（Glucose）、丙酮酸（Pyruvic acid）、腺嘌呤（Adenine）結(jié)果圖 3 所示。分析氧化還原代謝物煙堿酰胺（Niacinamide）、氧化型谷胱甘肽（Oxidized glutathione，GSSG）和還原型谷胱甘肽（Reduced glutathione，GSH）之間的差異結(jié)果圖 4 所示。D0 實驗組紅細(xì)胞代謝物均高于對照組。D14 實驗組紅細(xì)胞中葡萄糖、丙酮酸和 GSH低于對照組，腺嘌呤、煙堿酰胺和 GSSG 高于對照組。至儲存期末（d35），實驗組紅細(xì)胞中葡萄糖低于對照組，腺嘌呤、煙堿酰胺高于對照組，兩組之間的丙酮酸、GSSG 和 GSH 差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 季建兵;;團(tuán)體獻(xiàn)血脂肪血產(chǎn)生原因分析及應(yīng)對措施[J];中國輸血雜志;2019年05期

2 張艷紅;;2013～2015年江門市全血獻(xiàn)血者脂肪血發(fā)生情況分析[J];臨床輸血與檢驗;2018年05期

3 寧振全;譚渭萍;李進(jìn)才;;(4±2)℃靜置法分離脂肪血漿的技術(shù)應(yīng)用[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2017年14期

4 張曉云;郭善文;張樂峰;;無償獻(xiàn)血者脂肪血原因調(diào)查與對策[J];中國實用醫(yī)藥;2011年05期

5 朱琳;張傳濤;劉爍;王艷嬌;張菲;鄭琳;;健康體檢采血時近5年發(fā)生脂肪血280例分析[J];中國城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生;2018年02期

6 傅鈺斌;湯靜兒;;廣州地區(qū)脂肪血報廢情況調(diào)查報告[J];廣東醫(yī)學(xué);2018年S1期

7 趙林園,趙樹華,朱琳;一種提高脂肪血臨床利用率的脂肪血分離方法[J];中國輸血雜志;2005年05期

8 李喆;脂肪血的捐獻(xiàn)[J];國外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊;2002年01期

9 李雪群;嚴(yán)鳳好;藍(lán)建崇;鄒海藍(lán);李明穗;;腰圍與體重指數(shù)對無償獻(xiàn)血者脂肪血的預(yù)測價值[J];現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2016年04期

10 胡連訓(xùn);;初探降低脂肪血報廢率的方法[J];中外醫(yī)療;2008年22期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 楊俊鴻;脂肪血制備的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞儲存期代謝特性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

2 莊養(yǎng)林;溶血、脂肪血及保存條件對血液病毒核酸篩查影響的研究[D];南昌大學(xué);2017年

本文編號：2837210