基因治療在臨床應(yīng)用中遇到了相對(duì)嚴(yán)重的瓶頸,即缺乏安全有效的基因傳遞系統(tǒng)。為了解決這一問(wèn)題,我們?cè)O(shè)計(jì)了一種低毒高效的基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng),用于轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞,以期提高目的基因的遞送效率,從而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與遷移。1.八氨基籠型倍半硅氧烷POSS-NH_3~+Cl~-在堿性條件下與2-溴異丁基酰溴反應(yīng),得到大分子引發(fā)劑POSS-(Br)_8,然后通過(guò)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(ATRP)依次引發(fā)甲基丙烯酸二甲基氨基乙酯(DMAEMA)和聚乙二醇單甲基丙烯酸酯(PEGMA)的聚合,以制備具有生物相容性的POSS核心的八臂星型梳狀結(jié)構(gòu)的共聚物POSS-PDMAEMA-PPEGMA。梳狀PPEGMA的側(cè)鏈末端被雙鍵化以便于CAGW或CAG-TAT-NLS功能肽的連接,從而合成具有多功能性的星型共聚物。肽功能化的星型共聚物在水中自組裝成納米粒(NPs),并用綠色熒光蛋白融合質(zhì)粒pEGFP-ZNF580(pDNA)制備NPs/pDNA復(fù)合物。經(jīng)MTT證實(shí),形成的復(fù)合物毒性較低。熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀測(cè)試結(jié)果顯示,這些多靶向功能化的基因復(fù)合物能有效轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞,其轉(zhuǎn)染效率高于陽(yáng)性對(duì)照PEI 25 kDa。此外,western blot印跡實(shí)驗(yàn)、傷口愈合實(shí)驗(yàn)和體外血管形成實(shí)驗(yàn)也證明復(fù)合物可以有效地在內(nèi)皮細(xì)胞中遞送和表達(dá)pDNA,轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞具有較高遷移率并且提升了內(nèi)皮化能力。這些具有梳狀結(jié)構(gòu)和POSS核心的星型共聚物是一種具有潛力的基因治療載體。2.星型梳狀聚合物POSS-PDMAEMA-PPEGMA(POSS-DP)與質(zhì)粒pDNA復(fù)合形成二元基因復(fù)合物POSS-DP/pDNA,然后多重靶向性的功能肽TAT-NLS或CAG-TAT-NLS與二元基因復(fù)合物混合,以形成三元基因遞送系統(tǒng)POSS-DP/pDNA/TAT-NLS與POSS-DP/pDNA/CAG-TAT-NLS。相比較于傳統(tǒng)的二元基因遞送系統(tǒng),設(shè)計(jì)的三元基因遞送系統(tǒng)具有相對(duì)更高的靈活性,便于負(fù)載與釋放基因。通過(guò)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)和體外熒光轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明設(shè)計(jì)的遞送系統(tǒng)有利于細(xì)胞攝取以及提升內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。
【學(xué)位單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R450;O631
【部分圖文】：

圖 1-1 基因治療的臨床實(shí)驗(yàn)所涉及到疾病類型及其分布Figure 1-1 Clinical trials of gene therapy involve disease types and their distribution自那時(shí)以來(lái)，科學(xué)家們嘗試從基因水平上探索疾病的治療方法，并且基因治療的臨床試驗(yàn)逐漸在全球范圍獲得批準(zhǔn)。根據(jù) Wiley 數(shù)據(jù)庫(kù)的最新統(tǒng)計(jì)情況，截

圖 1-2 細(xì)胞內(nèi)基因傳遞過(guò)程。（A）與細(xì)胞膜的多重相互作用導(dǎo)致通過(guò)巨胞飲作用、吞噬作用和受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用（小窩和網(wǎng)格蛋白）使復(fù)合物內(nèi)化。（B）早期內(nèi)涵體的形成（i）；被捕獲在內(nèi)涵體中的復(fù)合物在后期內(nèi)涵體或溶酶體中被消化（ii）并通過(guò)胞吐作用從細(xì)胞中除去（iii）。（C）（i）通過(guò)質(zhì)子海綿效應(yīng)誘導(dǎo)復(fù)合物從內(nèi)涵體逃逸，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，其中聚合物被細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞內(nèi)的酶逐漸降解（ii）。（D）復(fù)合物也可以通過(guò)核定位信號(hào)肽（NLS）直

我們采用了1H NMR 測(cè)試。首先是使用 DMSO-d6作為溶劑，測(cè)試了原料八氨基 POSS-NH3+Cl-的結(jié)構(gòu)，如下圖2-2 所示。在 0.71 ppm、1.72 ppm 和 2.76 ppm 處可以分別觀察到 POSS-NH3+Cl-的特征峰 Si-CH2-CH2-CH2-N（a，b，c，6H），而且三處峰的峰面積接近于 1：1：1。同時(shí)可以看到 POSS 的末端氨基（-NH3+，3H）的氫質(zhì)子在 8.15 ppm 處出現(xiàn)一個(gè)強(qiáng)峰。圖 2-2 八氨基 POSS 在 DMSO-d6溶劑中的氫核磁圖Figure 2-21H NMR of the POSS-NH3+Cl-in DMSO-d6在堿性條件下用 BIBB 溶液酰胺化八氨基 POSS 以合成八臂引發(fā)劑POSS-(Br)8，并且其1H NMR 譜圖如下圖 2-3 所示。 POSS 鏈的特征峰Si-CH2-CH2-CH2-N（a，b
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;梳狀型一維PSD的研制[J];中國(guó)計(jì)量學(xué)院學(xué)報(bào);2001年02期

2 陳均詩(shī);;螺旋槽梳狀銑刀的設(shè)計(jì)與制造[J];機(jī)械工藝師;1987年07期

3 李鯁穎,王東生,鄔學(xué)文;固態(tài)核磁共振半整數(shù)四極體系中心躍遷對(duì)梳狀脈沖的響應(yīng)[J];物理學(xué)報(bào);1988年06期

4 劉洋;;脈沖雷達(dá)梳狀回波現(xiàn)象機(jī)理分析[J];現(xiàn)代雷達(dá);2017年01期

5 袁沈浩;程小冬;;梳狀譜峰值控制算法[J];通信對(duì)抗;2004年04期

6 姜河;龔鵬偉;諶貝;謝文;馬紅梅;楊春濤;;寬帶梳狀譜發(fā)生器校準(zhǔn)技術(shù)研究[J];宇航計(jì)測(cè)技術(shù);2014年01期

7 饒睿楠;李輝;王棟;;0.1～5GHz梳狀譜發(fā)生器的設(shè)計(jì)與實(shí)現(xiàn)[J];火控雷達(dá)技術(shù);2011年01期

8 段志強(qiáng);;梳狀波在頻譜分析儀中的應(yīng)用研究[J];電子質(zhì)量;2010年12期

9 陸揚(yáng);楊家庚;薛飛;張瑤;;一種消除測(cè)速模糊的梳狀譜信號(hào)設(shè)計(jì)方法[J];應(yīng)用聲學(xué);2015年02期

10 田海健;平靜;喬陽(yáng)陽(yáng);張振宇;沈志豪;范星河;周其鳳;;梳狀聚合物研究進(jìn)展[J];高分子通報(bào);2014年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 任瑩瑩;線形梳狀/星形梳狀高支化脂肪族聚酯的研究[D];大連理工大學(xué);2016年

2 張紅霞;丁二烯/異戊二烯/苯乙烯星形梳狀高支化聚合物的研究[D];大連理工大學(xué);2009年

3 劉林;基于分?jǐn)?shù)階本構(gòu)模型的梳狀反常擴(kuò)散與熱傳導(dǎo)研究[D];北京科技大學(xué);2017年

4 張宇;含光敏基團(tuán)線形梳狀/星形梳狀高支化聚丁二烯研究[D];大連理工大學(xué);2014年

5 冷雪菲;丙交酯/三亞甲基碳酸酯梳狀聚合物的研究[D];大連理工大學(xué);2016年

6 公瑞煜;梳狀共聚物對(duì)CDCA的修飾及對(duì)膽固醇結(jié)石的溶解作用研究[D];華中科技大學(xué);2008年

7 黃梅珍;位置敏感探測(cè)器的研究[D];浙江大學(xué);2001年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王君;多重靶向性POSS基星型梳狀聚合物的制備與表征[D];天津大學(xué);2018年

2 李利娜;半連續(xù)細(xì)乳液RAFT聚合對(duì)梳狀大分子支鏈序列結(jié)構(gòu)的調(diào)控研究[D];鄭州大學(xué);2018年

3 李偉;對(duì)Link16數(shù)據(jù)鏈的干擾技術(shù)研究[D];西安電子科技大學(xué);2018年

4 林蝶;PEG基梳狀聚合物鋰離子電池電解質(zhì)的合成及電化學(xué)性能的研究[D];湖北大學(xué);2015年

5 夏華婧;平面帶通濾波器小型化及重構(gòu)技術(shù)研究[D];東南大學(xué);2018年

6 張清;微波全頻段低功耗梳狀譜發(fā)生器研制[D];電子科技大學(xué);2009年

7 任環(huán);時(shí)滯控制下的微梳狀驅(qū)動(dòng)器動(dòng)力學(xué)研究[D];天津大學(xué);2016年

8 浦鳴;生物功能化梳狀聚乙二醇改性組織工程材料表面的研究[D];浙江大學(xué);2006年

9 宋廣立;單體多分支梳狀陣列CdS微納結(jié)構(gòu)的光電性質(zhì)研究[D];北京理工大學(xué);2015年

10 費(fèi)順超;梳狀譜信號(hào)機(jī)理及其對(duì)FH通信系統(tǒng)的影響研究[D];沈陽(yáng)理工大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2836422