研究背景和目的:鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii)是我國臨床上重要的非發(fā)酵條件致病菌,能在自然環(huán)境及醫(yī)院環(huán)境中廣泛存在并長期存活,往往通過動靜脈置管、氣管插管等侵入性操作引起患者感染,尤其是免疫力缺陷、低下或危重癥的患者,并以血流感染患者的死亡率最高。鮑曼不動桿菌亦是院內(nèi)常見的引起生物膜相關(guān)感染的主要病原菌之一,生物膜是鮑曼不動桿菌的一種重要毒力因子,而鮑曼不動桿菌生物膜的形成與耐藥性的關(guān)系仍有爭議,生物膜的形成對患者疾病進展及預(yù)后的影響和生物膜形成的相關(guān)機制也值得我們進一步研究探討。本課題為探討血流感染的鮑曼不動桿菌生物膜形成特點及相關(guān)機制而進行研究。方法:1.收集了2015-2017年間南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院血流感染的鮑曼不動桿菌83株,運用結(jié)晶紫染色法評價其生物膜形成能力,從中分別選取一株生物膜形成陰性和一株生物膜形成強陽性作為代表菌株,使用掃描電鏡驗證其生物膜的形成并觀察生物膜的結(jié)構(gòu),并且比較和分析生物膜形成能力不同的鮑曼不動桿菌的生長曲線及生物膜形成生長曲線。2.收集血流感染的鮑曼不動桿菌83例患者的臨床資料,比較分析生物膜形成能力不同菌株的耐藥能力、科室分布、疾病表現(xiàn)、病情進展及預(yù)后等,來探討鮑曼不動桿菌生物膜形成能力與患者臨床特點的相關(guān)性。3.研究分析83株血流感染的鮑曼不動桿菌生物膜形成相關(guān)基因的攜帶情況,選取已有報道的10個生物膜形成相關(guān)基因,驗證并分析其與鮑曼不動桿菌生物膜形成能力的關(guān)系。再通過PFGE和MLST分子分型的方法對鮑曼不動桿菌進行系統(tǒng)性分型,從中選取PFGE分型和MLST分型相同但生物膜形成能力差異明顯的兩株鮑曼不動桿菌進行全基因組的測序,從基因?qū)用嫔涎芯刻接懷鞲腥镜孽U曼不動桿菌生物膜形成相關(guān)機制。結(jié)果:1.83株血流感染的鮑曼不動桿菌中有62株菌(74.7%)能形成生物膜,其中17株菌(27.4%)表現(xiàn)為強陽性,弱陽性有45株。通過掃描電鏡可觀察到生物膜形成強陽性的菌群周圍充滿大量絮狀粘液樣物質(zhì)并形成云霧狀的生物膜結(jié)構(gòu),而生物膜形成陰性的標(biāo)本幾乎只能看到裸露的菌體成簇聚集。生物膜形成能力不同的菌株其細菌的生長速率無明顯差異,但菌株培養(yǎng)24h所測得的生物膜形成量的差異明顯,且最能反映其生物膜形成的能力強弱。2.83株血流感染的鮑曼不動桿菌中,49株(59.0%)為泛耐藥菌(其中13株為全耐藥菌,占比15.7%),16株(19.3%)為多耐藥菌,泛耐藥菌和多重耐藥菌占全部菌株的絕大多數(shù)(78.3%),剩余18株(21.7%)為敏感菌。敏感菌株的生物膜形成率為94.4%,高于耐藥菌株的生物膜形成率的69.2%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而耐藥菌中的多耐菌株與泛耐菌株對比,生物膜形成能力無明顯差異,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。我們收集的這83株菌主要分布在ICU(49株)和燒傷科(11株),研究其對8類共19種臨床上常用的抗生素的耐藥性,所有菌株的耐藥率幾乎均在70%以上,生物膜形成陰性菌株對頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢吡肟、頭孢噻肟、頭孢呋辛和美羅培南這6種抗生素的耐藥率高于生物膜形成陽性的菌株,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);對于另外13種抗生素,菌株生物膜形成能力對其耐藥性無明顯影響,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。將83株鮑曼不動桿菌分為預(yù)后好和預(yù)后差兩組,發(fā)現(xiàn)中心靜脈置管、入住ICU、血小板、并發(fā)癥(惡性腫瘤、呼吸衰竭、腎功能衰竭)對患者預(yù)后有影響,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。將這6種因素納入二元logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)對患者的預(yù)后均無明顯影響,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。將83株鮑曼不動桿菌分為生物膜陰性和生物膜陽性兩組,納入多種臨床資料進行對比分析,最終結(jié)果發(fā)現(xiàn)生物膜形成能力與住院天數(shù)呈正相關(guān),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.生物膜形成陽性的血流感染的鮑曼不動桿菌的bap、csuC、csuD、csuE、ompA基因攜帶率均高于生物膜形成陰性菌,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),生物膜形成弱陽性與強陽性的鮑曼不動桿菌的生物膜形成相關(guān)基因攜帶率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。通過過PFGE和MLST分子分型的方法對鮑曼不動桿菌進行系統(tǒng)性分型,從中選取PFGE分型和MLST分型相同但生物膜形成能力差異明顯的兩株鮑曼不動桿菌:樣本516(生物膜陰性)和632(生物膜強陽性),經(jīng)三代測序結(jié)果顯示兩者存在堿基差異,分析兩者非同義突變差異基因以及各自功能,可能由于LysR家族轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶、DNA結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的功能差異導(dǎo)致兩者生物膜形成能力的明顯差異,并存在其他基因功能未知或COG分類不明的非同義突變差異基因。結(jié)論:1.本研究收集的血流感染的鮑曼不動桿菌大多數(shù)均具有較強的生物膜形成能力;鮑曼不動桿菌菌株自身的生長不影響生物膜形成能力。2.本研究顯示血流感染的鮑曼不動桿菌耐藥現(xiàn)象非常嚴(yán)重,且細菌耐藥性與生物膜形成能力呈負相關(guān)。分析影響患者預(yù)后的影響因素時,未發(fā)現(xiàn)與預(yù)后相關(guān)的具有統(tǒng)計學(xué)意義的獨立危險因素,且鮑曼不動桿菌的生物膜形成能力只對患者的住院天數(shù)有影響。3.鮑曼不動桿菌不同菌株存在的基因差異可能導(dǎo)致功能差異,造成鮑曼不動桿菌生物膜形成能力差異,生物膜形成是一個動態(tài)過程,任何參與鮑曼不動桿菌生物膜形成過程的因素均可影響其生物膜的形成,其機制有待進一步完善。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R515;R446.5
【部分圖文】：

生物膜形成強陽性菌株及生物膜形態(tài)（×10000）

生物膜形成強陽性菌株及生物膜形態(tài)（×100000）

圖 1-3 生物膜形成陰性菌株形態(tài)（×10000）.3 血流感染的鮑曼不動桿菌生長曲線分析.3.1 菌株的生長曲線分析選取生物膜形成能力強（圖中紅色）和弱（圖中綠色）的菌株各 10 株生長曲線見圖 1-4。全部菌株 4h 后進入對數(shù)期，細菌急劇繁殖擴增，18平臺期，由圖可見，無論生物膜形成能力強和弱的菌株，其菌株生長顯差異，從而說明了菌株自身的生長不是其生物膜形成能力強弱的影因此，本文第三章將繼續(xù)研究影響鮑曼不動桿菌生物膜形成能力的相

【參考文獻】

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本文編號：2810187