目的研究臨床分離黃金海岸沙門菌對常用抗菌藥物的敏感性、對氟喹諾酮和β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的耐藥機制以及攜帶傷寒沙門菌毒力基因的特點,為理解非傷寒沙門菌耐藥與毒力變化趨勢、預防與治療沙門菌感染和抗菌藥物合理應用提供依據(jù)。方法1、收集2014年4-10月我市兩家教學醫(yī)院腸道門診急性腹瀉患者的臨床資料,采集患者糞便標本進行沙門菌分離培養(yǎng)、生化和PCR鑒定、血清型分型。2、藥物敏感試驗:對鑒定得到的黃金海岸沙門菌采用微量肉湯稀釋法和紙片法進行17種抗菌藥物敏感性檢測。3、分子分型:進行多位點序列分型(MLST)。4、氟喹諾酮耐藥基因分析:PCR擴增喹諾酮靶位基因gyrA、gyrB、parC、parE的喹諾酮耐藥決定區(qū)(QRDR)并測序,PCR擴增質(zhì)粒介導的喹諾酮耐藥(PMQR)基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6’)-Ib-cr、qepA、oxqAB并對陽性產(chǎn)物測序,對以上測序結(jié)果進行Blast和BioEdit、MEGA5分析。5、?-內(nèi)酰胺酶基因分析:PCR擴增?-內(nèi)酰胺酶耐藥基因TEM、SHV、CTX-M、OXA,對陽性擴增產(chǎn)物測序并進行Blast和ClustalX分析。6、cdtB-毒力島和傷寒沙門菌相關毒力基因檢測:PCR擴增cdtB-毒力島編碼序列、非編碼序列,以及hlyE、taiA、tcfA,對陽性擴增產(chǎn)物測序并進行Blast和BioEdit、MEGA5分析。結(jié)果1、2014年從我市兩家教學醫(yī)院腸道門診的急性腹瀉患者糞便標本中共分離鑒定得到3株黃金海岸沙門菌,占同期全部非傷寒沙門菌的0.03%(3/108)。3例患者有2例臨床診斷為急性胃腸炎,1例臨床診斷為急性細菌性痢疾。2、藥敏試驗顯示3株黃金海岸沙門菌都是多重耐藥株,對氨芐西林、哌拉西林/他唑巴坦、培氟沙星、氯霉素、復方新諾明都耐藥,對阿莫西林/克拉維酸、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星都中介,有2株(2/3)對氨芐西林/舒巴坦、四環(huán)素、鏈霉素、慶大霉素、依替米星和阿奇霉素為耐藥或中介,對萘啶酸、頭孢曲松和厄他培南都敏感。3、MLST分型發(fā)現(xiàn)2株黃金海岸沙門菌為ST358,1株為ST2529。4、3株黃金海岸沙門菌的QRDR與對氟喹諾酮敏感的鼠傷寒沙門菌相比,gyrA、gyrB和parE的DNA和氨基酸序列相似性都是100%,parC的DNA序列相似性都為99%,都出現(xiàn)導致Thr57-Ser氨基酸替換的堿基突變。5、3株黃金海岸沙門菌均擴增出預期長度的qnrS基因片段,序列分析顯示與鼠傷寒沙門菌qnrS1的DNA相似性都為99%,氨基酸相似性都為100%。qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、aac(6′)-Ib-cr、qepA及oqxAB的PCR擴增結(jié)果均為陰性。6、3株黃金海岸沙門菌均擴增出TEM基因的預期長度片段,與鼠傷寒沙門菌TEM-1b基因DNA序列相似性都為99%,氨基酸序列相似性都為100%。SHV、OXA和CTX-M的PCR擴增結(jié)果均為陰性。7、3株黃金海岸沙門菌都能擴增出預期長度大小的sty1887、sty1889和phage基因片段,與傷寒沙門菌CT18相比,DNA和氨基酸序列相似性分別為100%、100%和98%。序列分析顯示,3株黃金海岸沙門菌與傷寒沙門菌CT18的cdtB-毒力島的基因構(gòu)成完全一致,都包含cdtB、sty1887、sty1889、pltA、pltB和phage等基因,而且順序和轉(zhuǎn)錄方向完全相同。8、3株黃金海岸沙門菌都能擴增出預期長度大小的hlyE、taiA和tcfA基因片段,與傷寒沙門菌CT18相比,DNA序列相似性依次為99%、100%和99%,氨基酸序列相似性依次為100%、100%和99%。結(jié)論1、本研究從臨床分離到2株ST358型和1株ST2529型黃金海岸沙門菌,都是多重耐藥株。2、本研究中黃金海岸沙門菌qnrS1和TEM-1b都陽性,分別介導了菌株對氟喹諾酮中介、對?-內(nèi)酰胺/?-內(nèi)酰胺酶抑制劑耐藥或中介。3、黃金海岸沙門菌臨床株攜帶傷寒沙門菌相關毒力因子cdtB-毒力島、hlyE、taiA和tcfA,對菌株致病力的影響值得進一步研究。4、本地區(qū)臨床出現(xiàn)多重耐藥而且傷寒沙門菌毒力因子陽性的黃金海岸沙門菌,要高度重視和持續(xù)研究非傷寒沙門菌的耐藥和毒力變化。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R446.5;R516.3
【部分圖文】：

圖 1.1 cdtB-毒力島各編碼基因和非編碼基因 PCR 擴增示意圖表 1.6 cdtB-毒力島的引物序列、退火溫度和位置產(chǎn)物 引物 序列 長度 退火溫度 位置P1Int1-F AGGCTGATATGTGGCTGGTC978bp 57℃1784487Int2-R TCACTGATATTAGCGCAGGCA 1785464P2cdtB-F GAAACAAGTCAGGCATTGCC1059bp 55℃1785283cdtB-R GAATGGCTCATAAACACGCC 1786341P3Sty1887-F TCATTGTCGATCGAGCACCTT771bp 57℃1786094Sty1887-R GTTAGCTGAAAAGCGCCAGG 1786864P4Sty1889-F TGGCTTTCACCAGTTCTCTGT671bp 56℃1786718Sty1889-R ACCAATCATAGCATTCAGGTACG 1787388P5Int2-F AGGGTGATCAACGTAACCGC673bp 57℃1787275

圖 2.1 3 株黃金海岸沙門菌 PMQR 基因 PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果：M 為 DNA 標志物 DL2000；1、2、3、4 為 3250 的 qnrA、qnrB、5、6、7 為 qnrS 的 3250、3253、G1150；8、9、10、11 為 3250 的 aac(6OqxA、OqxB該3株黃金海岸沙門菌qnrS基因的PCR產(chǎn)物進行測序，并將序列進結(jié)果顯示該 3 株黃金海岸沙門菌 qnrS 基因 DNA 序列相互之間完全寒沙門菌 484 的 qnrS1 基因（GenBank NO.JN393220.1）DNA 序列%，發(fā)生第 181 位堿基 T-C 突變，而氨基酸序列的相似性則為 100%黃金海岸沙門菌攜帶的 qnrS 基因為 qnrS1。序列分析結(jié)果見圖 2.2

圖 2.2 3 株黃金海岸沙門菌 qnrS1 的 DNA 序列（灰色背景表示堿基或氨基酸的差異,下同）圖 2.3 3 株黃金海岸沙門菌 qnrS1 的氨基酸序列 -內(nèi)酰胺酶基因擴增與序列分析對 3 株黃金海岸沙門菌進行 TEM、SHV、OXA 和 CTX-M 基因的 PCR 擴增，該3 株菌都擴增出 TEM 基因的預期長度片段（931bp），SHV、OXA 和 CTX-M 的 PCR

【參考文獻】

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1 戈紅雨;吳曉妹;王悅;張成龍;郇娟;王俊;祁偉;王玉寶;;腸炎沙門菌感染暴發(fā)的病原學檢測及基因分型研究[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2013年20期

2 陳科帆;呂曉菊;;尿源產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌質(zhì)粒介導氟喹諾酮類耐藥性研究[J];中國抗生素雜志;2013年07期

3 張小華;李健;任艷娜;汪天露;孫永學;蔣紅霞;;耐環(huán)丙沙星患病動物源沙門菌的多重耐藥分子特征[J];中國獸醫(yī)科學;2012年07期

4 宋瑩;江振洲;張陸勇;;喹諾酮類抗菌藥的耐藥性機制及研究進展[J];藥物評價研究;2012年03期

5 湯電;張小華;付曉平;王麗華;郭玉芳;李健;紀雪薇;蔣紅霞;;廣東地區(qū)魚源大腸埃希菌ESBLs和PMQR流行分布調(diào)查[J];華南農(nóng)業(yè)大學學報;2012年01期

6 丁秋蕾;楊小娜;梅志琴;趙建宏;時東彥;霍衛(wèi)池;;產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌中檢出aac(6′)-Ⅰb-suzhou型基因[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2011年18期

7 符浩;夏興;陳代杰;;腸桿菌科細菌質(zhì)粒介導的喹諾酮耐藥基因研究進展[J];世界臨床藥物;2011年11期

8 畢超;蔣崗;余廣超;葉惠芬;陳柳勤;李珩;曹開源;;質(zhì)粒介導的大腸埃希菌對喹諾酮類抗菌藥物耐藥機制的研究[J];中華醫(yī)院感染學雜志;2011年18期

9 趙慶英;劉德夢;;天津地區(qū)大腸埃希菌臨床株質(zhì)粒介導的喹諾酮類耐藥機制的研究[J];中國抗生素雜志;2011年04期

10 廖經(jīng)忠;劉文恩;李虹玲;簡子娟;鄒明祥;;革蘭陰性桿菌TEM型β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2010年13期

本文編號：2808070