發(fā)布時(shí)間：2020-08-25 11:47

【摘要】：金黃色葡萄球菌(S.aureus)耐藥性及致病性問(wèn)題日益突出,給臨床抗感染治療帶來(lái)巨大挑戰(zhàn)。生物膜(BF)在加強(qiáng)細(xì)菌耐藥性的同時(shí)干擾宿主免疫系統(tǒng)的識(shí)別和殺傷機(jī)制,是慢性感染的主要原因之一。本課題主要通過(guò)ε-聚賴氨酸(ε-PL)干預(yù)金黃色葡萄球菌,觀察ε-PL對(duì)其生物膜形成的影響,旨在明確該院金黃色葡萄球菌耐藥特性的同時(shí)為新型抗感染藥物的研發(fā)提供理論依據(jù)。目的:了解某院金黃色葡萄球菌耐藥特征,評(píng)價(jià)MALDI-TOF MS在鑒定臨床分離菌的應(yīng)用價(jià)值;調(diào)查金黃色葡萄球菌生物膜形成并探究ε-PL對(duì)其生物膜形成的影響。方法:收集2016年9月至2017年9月間分離的金黃色葡萄球菌,用MALDI-TOF MS對(duì)菌種進(jìn)行確認(rèn),K-B法進(jìn)行藥敏檢測(cè)并用WHONET5.6軟件分析結(jié)果。選取金黃色葡萄球菌100株,剛果紅平板法篩選生物膜陽(yáng)性株,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法檢測(cè)icaA/icaD基因分布,常量肉湯稀釋法測(cè)定ε-PL對(duì)金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度(MIC),酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度法觀察ATCC25923和USA300的生長(zhǎng)曲線,結(jié)晶紫染色法檢測(cè)ε-PL對(duì)生物膜形成的影響并通過(guò)掃描電鏡(SEM)觀察。結(jié)果:經(jīng)臨床鑒定及MALDI-TOF MS確認(rèn),共分離金黃色葡萄球菌417株。標(biāo)本主要來(lái)源于傷口拭子,科室來(lái)源以燒傷科為主。除萬(wàn)古霉素、利奈唑胺外,金黃色葡萄球菌對(duì)其他常用抗菌藥物均呈現(xiàn)出不同程度耐藥。417株金黃色葡萄球菌包括238株MRSA、179株MSSA,分別占57.1%和42.9%。除復(fù)方新諾明、利奈唑胺、萬(wàn)古霉素及奎奴普丁/達(dá)福普汀外,其余幾種抗菌藥物耐藥率的組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。100株金黃色葡萄球菌中79株生物膜陽(yáng)性,陽(yáng)性率為79.0%(79/100),包括41株MRSA和38株MSSA;icaA、icaD基因檢出率均為78.0%,生物膜陽(yáng)性和陰性金黃色葡萄球菌icaA/icaD基因陽(yáng)性率為94.9%及14.3%;ε-PL對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC為31.25mg/mL;高ε-PL濃度抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。1/2MICε-PL能顯著抑制金黃色葡萄球菌生物膜的形成。結(jié)論:MALDI-TOF MS可快速準(zhǔn)確鑒定出金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌主要分離自燒傷科,易引起傷口感染,并對(duì)臨床常用抗菌藥物耐藥率較高,且MRSA普遍高于MSSA。icaA/icaD基因與金黃色葡萄球菌生物膜形成密切相關(guān)。ε-PL作為一種安全、高效的天然防腐劑,能有效抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)及其生物膜的形成。
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R446.5
【圖文】：

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1 革蘭染色及顯微鏡觀察結(jié)果金黃色葡萄球菌是革蘭染色呈陽(yáng)性的球菌（圖2）。圖2 金黃色葡萄球菌革蘭染色結(jié)果Figure 2 Gram staining microscopy results of Staphylococcus aureus3.2 API 細(xì)菌鑒定結(jié)果2016年9月至2017年9月期間共收集非重復(fù)細(xì)菌3120株，其中被鑒定為金黃色葡萄球菌的有417株。3.3 頭孢西丁紙片法鑒定 MSSA 和 MRSA將經(jīng)傳統(tǒng)細(xì)菌鑒定方法鑒定為金黃色葡萄球菌的417株菌株用頭孢西丁紙片法篩選MRSA和MSSA。結(jié)果顯示MRSA為238株，MSSA為179株。3.4 PBP2a 蛋白乳膠凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果以USA300和ATCC25923分別作為陽(yáng)性和陰性對(duì)照，將頭孢西丁紙片法鑒定

圖3 MRSAPBP2a蛋白凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果注：A, B：臨床MRSA分離株；C: 陽(yáng)性對(duì)照（USA300）；D: 陰性對(duì)照（ATCC25923）Figure 3 The results of MRSA screen latex agglutinationRemarks: A, B: Clinical MRSA strains; C: Positive control (USA300);D: Negative control(ATCC25923)質(zhì)譜鑒定結(jié)果417 株經(jīng)臨床常規(guī)細(xì)菌鑒定方法鑒定 為金黃色葡萄球菌的菌DI-TOF MS 菌種確認(rèn)后均判定為金黃色葡萄球菌，結(jié)果與API生化鑒本一致。MALDI Biotyper鑒定得分≥2.000的有352株，占85.64%；得0-1.999之間的有59株，占14.36:%；未發(fā)現(xiàn)MALDI Biotyper鑒定得分低于床分離株。臨床分離的金黃色葡萄球菌經(jīng)MALDI-TOF MS鑒定分析后均得到相應(yīng)

BC圖4 金黃色葡萄球菌MALDI-TOF-MS 檢測(cè)結(jié)果質(zhì)譜圖A：10個(gè)主要細(xì)菌質(zhì)譜峰；B：11個(gè)主要細(xì)菌質(zhì)譜峰；C：14個(gè)主要細(xì)菌質(zhì)譜峰Figure 4 Fingerprints of Staphylococcus aureus by MALDI-TOF-MS testA: 10 main mass spectrum peaks; B: 11 main mas

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐巧玲;孫鳳軍;馮偉;劉曉;劉亞巍;;DNase I對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜形成的影響[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年09期

2 黃惟彬;黃靜;朱家馨;楊海玲;吳文斌;;臨床分離耐甲氧西林金黃色葡萄球菌生物膜表型檢測(cè)及其相關(guān)基因分析[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2015年05期

3 肖莎麗;李碩;何文秀;彭志宏;于學(xué)軍;周忠華;;評(píng)價(jià)基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)葡萄球菌屬的鑒定能力[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2014年20期

4 胡曉豐;史云;戚麗華;王勇;宋宏彬;張傳福;劉雪林;;金黃色葡萄球菌生物膜形成機(jī)制研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2014年05期

5 周玉美;魏蓮花;鄒鳳梅;徐輝;劉剛;楊衛(wèi)國(guó);李永紅;;耐甲氧西林金黃色葡萄球菌SCCmec分型及同源性研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2014年05期

6 郭玲;沈定霞;;基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)在臨床微生物檢測(cè)中的應(yīng)用[J];臨床檢驗(yàn)雜志(電子版);2012年02期

7 杜仲業(yè);陳一強(qiáng);孔晉亮;閆萍;蔡雙啟;張東偉;;黃芩苷對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜抑制作用的體外研究[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2012年08期

8 周淑群;韋柳華;周定球;;2008-2010年耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的耐藥性變遷[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2012年03期

9 周磊;云寶儀;汪業(yè)菊;謝明杰;;大黃素對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用機(jī)制[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年12期

10 申鳳鴿;邢明勛;劉麗慧;袁鵬;史祺云;于錄;;駱駝蓬靈單獨(dú)和與洗必泰聯(lián)合對(duì)抗金黃色葡萄球菌懸浮菌和生物膜的抗菌活性研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年16期

本文編號(hào)：2803656