【摘要】：據(jù)統(tǒng)計,世界上約有一半以上的人口感染有幽門螺桿菌,目前已證實它與慢性萎縮性胃炎、消化性潰瘍和胃腫瘤(如胃癌和黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤)等疾病有關(guān)。中國甘肅河西走廊地區(qū)是我國胃癌高發(fā)區(qū),幽門螺桿菌的感染率也高于全國平均水平,但是該地區(qū)幽門螺桿菌的起源及種群結(jié)構(gòu)尚不清楚。目的:了解甘肅河西走廊地區(qū)幽門螺桿菌(H.pylori)基因組特征及種群結(jié)構(gòu),闡釋該地區(qū)H.pylori菌群的進(jìn)化起源,進(jìn)而探討該地區(qū)胃癌高發(fā)的成因是否與該地區(qū)的H.pylori菌群特征有關(guān)。方法:1.收集甘肅河西走廊地區(qū)H.pylori感染的胃黏膜標(biāo)本254例,在微需氧環(huán)境中成功分離培養(yǎng)出臨床菌99株,并鑒定保存于-80℃冰箱。2.復(fù)蘇保存的H.pylori菌株,傳代培養(yǎng)后采用Qiagen54104試劑盒進(jìn)行細(xì)菌基因組DNA的提取。根據(jù)文獻(xiàn)篩選出H.pylori的7個管家基因AtpA、Efp、MutY、Ppa、TrpC、Urel、YphC進(jìn)行基因測序。3.將所得到的7個管家基因核酸擴增片段DNA序列進(jìn)行電泳檢測后,利用ABI PRISM 310 DNA sequencer對擴增產(chǎn)物測序并拼接,然后進(jìn)行MLST分析,獲得菌株所對應(yīng)的等位基因譜(allelic profile)和序列型(sequence type,ST),并與國際菌株的資料進(jìn)行比較,從而獲得這些菌株的致病相關(guān)性。4.使用MEGA7軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,并進(jìn)行分析甘肅河西走廊地區(qū)臨床菌株的結(jié)構(gòu)特點。結(jié)果:1.對99株甘肅河西走廊地區(qū)臨床菌進(jìn)行MLST分析,得到了99個序列型,并且這99個序列型都是H.pylori MLST數(shù)據(jù)庫中未曾報道過的,證明均是新發(fā)現(xiàn)的菌株。這99株臨床分離菌株大致分為3個簇,其中大部分武威、酒泉菌株聚類相對集中,分別聚為2簇,而金昌和古浪地區(qū)菌株聚類相對分散。通過比較不同疾病之間的聚類分析關(guān)系,沒有發(fā)現(xiàn)明確的聚集現(xiàn)象。2.中國已分離的菌株和本研究的甘肅河西走廊地區(qū)菌株進(jìn)行對比分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)華北地區(qū)和河西地區(qū)菌株出現(xiàn)聚類情況,可能該地區(qū)存在克隆群之外,其他均為散在分布的單個的點。另將整體中國菌株(包括本研究的河西菌株)與全球不同分布菌株對比,發(fā)現(xiàn)中國菌株大部分和hpEastAsia種群聚在一起,而其他菌株僅僅表現(xiàn)為散在的小聚集現(xiàn)象。結(jié)論:1.河西走廊地區(qū)幽門螺桿菌不同于目前已發(fā)現(xiàn)的菌株,其不同地區(qū)具有其獨特的等位基因,有一定的地域相關(guān)性,但疾病相關(guān)性不明顯。2.中國菌株大多聚類于hpEastAsia種群或者亞類,華北地區(qū)和河西地區(qū)菌株出現(xiàn)聚類情況,不同地區(qū)來源的H.pylori菌株的基因型大多為獨特型,且在一定地域的小范圍內(nèi),菌株顯示出一定的聚類性,說明可能就是克隆群的存在(Clonal Groups)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R446.5;R573
【圖文】：

圖3-1 H.pylori菌落形態(tài)特征（A）及革蘭染色結(jié)果(B)（ 1000）-1 Colony morphological characteristics of H.pylori (A) and Gram staining results (B) 2 H.pylori尿素酶實驗結(jié)果將培養(yǎng)成功的菌株用無菌接種環(huán)挑取菌落于反應(yīng)物中1-2 min后，反變紅色，反應(yīng)為陽性�？偣�245例胃黏膜組織，培養(yǎng)出120株臨床菌，3株，對143株進(jìn)行尿素酶試驗，有115株表現(xiàn)為陽性。3 H.pylori氧化酶實驗結(jié)果無菌接種環(huán)挑取菌落于氧化酶試紙片后，菌苔變?yōu)榉奂t色并迅速轉(zhuǎn)為性反應(yīng)。同樣145株中，102株出現(xiàn)陽性反應(yīng)。4 H.pylori過氧化氫酶試驗結(jié)果在菌落菌液中加入3%的過氧化氫，試管內(nèi)菌液中產(chǎn)生大量氣泡，從出，反應(yīng)為陽性。同樣145株菌中，93株出現(xiàn)陽性反應(yīng)。

圖 3-2 H.pylori 基因組 DNA 電泳結(jié)果g 3-2 Genomic DNA electrophoresis results of H.p基因擴增的DNA目的片段管家基因擴增電泳驗證結(jié)果將H.pylori擴增的7個管家基因（yphC、mutY證，1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析，見圖3-3，符。

15ylori7 個管家基因 PCR 擴增片段。M 為 DNA 標(biāo)準(zhǔn)分子C、mutY、efp、Urel、trpC、atpA、ppa 管家基因擴增roducts of seven housekeeping genes fragments from H.pyane1-7 housekeeping genes fragments ：yphC、mutY、eatpA、ppa.同菌株的管家基因的瓊脂糖凝膠電泳檢測結(jié)果H.pylori菌株擴增的7個管家基因（yphC、mutY、驗證，1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析，見圖3-4，從在300 bp-700 bp之間。

【相似文獻(xiàn)】

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1 賈芳;魏奮子;;河西走廊地區(qū)水土資源危機及可持續(xù)發(fā)展研究[J];中國水利;2011年15期

2 藺菊芬;孫麗娜;嚴(yán)煥蘭;;河西走廊地區(qū)甘草的塑料網(wǎng)格育苗技術(shù)[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2019年02期

3 王金榮;景U

本文編號：2801698