【摘要】：目的:神經(jīng)膠質(zhì)瘤是人體內(nèi)最常見(jiàn)一種中樞系統(tǒng)神經(jīng)腫瘤,發(fā)病率約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一半以上。依據(jù)其病理表現(xiàn)的不同,一般將其分為4個(gè)級(jí)別(Ⅰ~Ⅳ)。神經(jīng)膠質(zhì)瘤雖然在人體腫瘤總數(shù)發(fā)病率較低,但是其由于手術(shù)難以完全切除,術(shù)后易復(fù)發(fā),導(dǎo)致其死亡率一直居高不下,目前對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的診斷存在一些困難,目前傳統(tǒng)的診斷方法依舊依賴(lài)手術(shù)取病理活檢,手術(shù)過(guò)程中取病理組織經(jīng)機(jī)器脫水浸蠟,包埋成蠟塊進(jìn)行切片、烤片,后經(jīng)染色油鏡下觀察,進(jìn)行診斷分期,取病理組織為有創(chuàng)操作,對(duì)患者損傷較大,對(duì)病理醫(yī)師水平要求較高導(dǎo)致了神經(jīng)膠質(zhì)瘤診斷具有一定差異。由于取病里組織是一種有創(chuàng)檢查,不僅會(huì)給患者帶來(lái)痛苦,嚴(yán)重者會(huì)造成術(shù)后的出血從而導(dǎo)致顱內(nèi)高壓而危及患者生命,并且有的患者由于病情復(fù)雜也不能取病理組織活檢。例如:患者有出血傾向,重度高血壓,顱內(nèi)感染等。代謝組學(xué)是通過(guò)對(duì)生物小分子代謝物定性和定量的分析,來(lái)揭示生物系統(tǒng)中錯(cuò)綜復(fù)雜的生物調(diào)節(jié)機(jī)理。代謝產(chǎn)物是各種生理病理過(guò)程的最終產(chǎn)物,最能直接的反應(yīng)機(jī)體的狀態(tài)。神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生于發(fā)展與細(xì)胞內(nèi)的代謝有著密不可分的關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)的研究目的就是使用代謝組學(xué)的方法,采用液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用技術(shù)來(lái)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性程度做出初步診斷,揭示這些代謝物與疾病發(fā)展中的聯(lián)系,協(xié)助臨床對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性程度在不進(jìn)行病理活檢的前提下有一個(gè)初步的診斷,從而減輕患者經(jīng)濟(jì)和心理上的負(fù)擔(dān)。此項(xiàng)研究是從代謝組學(xué)的角度來(lái)解釋代謝物與神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性程度的關(guān)系。方法及驗(yàn)證:與神經(jīng)膠質(zhì)瘤惡性程度有關(guān)的代謝物需要分別采用兩種不同的衍生方法對(duì)樣品進(jìn)行樣品衍生,分別使用不同的衍生試劑,本實(shí)驗(yàn)采用Acc QTagderivatization kits、N-ethylmaleimide(NEM)分別對(duì)亞�；撬岽x通路及還原型谷胱甘肽進(jìn)行衍生。亞�；撬岽x通路采用液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用技術(shù)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)分析:樣品衍生采用Acc QTagderivatization kits,將低壓凍干樣品取出恢復(fù)至室溫,向凍干樣品中加入70μL的硼酸鹽緩沖液,置于渦旋儀上渦旋30s,再在向樣品中加入20μL的衍生試劑,渦旋10s,放入離心機(jī)14000prm離心30s,取出后室溫放置1分鐘后,放入電子恒溫水浴箱中55℃水浴衍生10min。還原型谷胱甘肽的檢測(cè)采用液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用技術(shù)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)分析:首先稱(chēng)取還原型谷胱甘肽0.0061g溶解在1ml 50%甲醇水溶液中,再稱(chēng)取N-ethylmaleimide(NEM)0.030g溶解在1ml 50%甲醇水溶液中,將兩者混合,置于渦旋儀上渦旋30s,室溫放置45分鐘,衍生完畢后即可上機(jī)檢測(cè)。方法建立后我們要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,評(píng)估方法的日內(nèi)、日間精密度及細(xì)胞內(nèi)標(biāo)回收率,日內(nèi)精密度一般控制在5%以?xún)?nèi),但是不能超過(guò)10%;日間精密度控制在15%即為合格。加標(biāo)回收率考察的是前處理和上儀器測(cè)試全過(guò)程中待測(cè)物質(zhì)的預(yù)處理情況(包括是否全部從樣品中提取出來(lái),是否在預(yù)處理過(guò)程中有損失或污染),以此來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)方法的可行性,加標(biāo)回收率=加標(biāo)后細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量-加標(biāo)前細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量/加標(biāo)物質(zhì)量,加標(biāo)回收率按照本實(shí)驗(yàn)室規(guī)定90%-110%為合格。驗(yàn)證數(shù)據(jù)顯示該方法對(duì)5個(gè)AQC衍生化氨基酸具有良好的線性相關(guān)系數(shù)(0.9927~0.9997);重復(fù)性RSD為2.5%~8.6%;日內(nèi)和日間精密度的RSD分別為3.41%~9.53%和6.23%~9.23%;細(xì)胞加標(biāo)回收率為93%~106%。GSH和GSSH相關(guān)系數(shù)分別為0.9997和0.9869,日內(nèi)精密RSD分別為5.41%和9.53%,日間精密度RSD分別為7.23%和8.46%,加標(biāo)回收率分別為103%和96%。結(jié)果:通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià),對(duì)實(shí)驗(yàn)方法線性回歸分析、日內(nèi)精密度及日間精密度,細(xì)胞內(nèi)標(biāo)回收率進(jìn)行綜合評(píng)估,本實(shí)驗(yàn)所建立起的實(shí)驗(yàn)方法能夠?qū)ι窠?jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251)代謝物種中還原性谷胱甘肽及氧化型谷胱甘肽,亞�；撬�、�；撬�、胱氨酸、半胱氨酸、半胱胺亞磺酸進(jìn)行絕對(duì)定量檢測(cè)。結(jié)論:代謝組學(xué)可以為評(píng)估神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性程度提供一種新的檢測(cè)方法,通過(guò)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)代謝物含量的變化來(lái)對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的惡性程度有一個(gè)初步的診斷。同時(shí)可以用于評(píng)估神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者術(shù)后療效,對(duì)預(yù)后有一個(gè)初期的判斷,也可以為臨床評(píng)估神經(jīng)膠質(zhì)瘤良惡性提供一個(gè)新的思路。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R446.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 趙春霞;許國(guó)旺;;基于液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)的代謝組學(xué)分析方法新進(jìn)展[J];分析科學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

2 余欣尉;吳謙;呂望;王彥;馬小瓊;陳U

本文編號(hào)：2796812