【摘要】：目的:部分血小板輸注無效(platelet transfusion refractoriness,PTR)的原因?yàn)榛颊哐逯泻嗅槍?duì)血小板表面人白細(xì)胞抗原((human leukocyte antigen,HLA)的抗體。本研究擬探討檸檬酸是否能有效洗脫血小板表面的HLA,并驗(yàn)證檸檬酸洗脫過程對(duì)血小板形態(tài)學(xué)、常規(guī)指標(biāo)、聚集功能的影響,以明確檸檬酸處理血小板這一技術(shù)的有效性和可行性,為進(jìn)一步制定HLA抗體陽性PTR患者的緊急血小板輸注策略提供參考。方法:首先進(jìn)行實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化:將血小板與pH分別為3,4,5的檸檬酸反應(yīng),測(cè)定處理后血小板表面HLA-I類抗原的表達(dá)率,根據(jù)最小的HLA-I類抗原表達(dá)率來選定能夠有效處理血小板表面HLA-I類抗原的最佳pH值;再根據(jù)析因設(shè)計(jì)的原理,對(duì)其他實(shí)驗(yàn)條件(反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)體積比)進(jìn)行優(yōu)化。然后將血小板進(jìn)行分組處理:酸處理組用檸檬酸處理血小板,PBS處理組用PBS處理血小板,未處理組用乏血小板血漿(platelet poor plasma,PPP)來調(diào)節(jié)血小板濃度,使之與酸處理組和PBS處理組的濃度一致。最后將處理過的三組血小板進(jìn)行以下各項(xiàng)分析:流式細(xì)胞儀分析血小板表面HLA-I類抗原和CD62P抗原的表達(dá)率,顯微鏡油鏡下觀察血小板的形態(tài),血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板的常規(guī)指標(biāo),生化分析儀評(píng)估血小板的生化指標(biāo),分光光度計(jì)評(píng)估血小板的低滲休克反應(yīng)(hypotonic shock response,HSR),血栓彈力圖分析儀(thromboelastogram,TEG)檢測(cè)血小板聚集功能。結(jié)果:1.pH為3,4,5的檸檬酸處理血小板后,血小板表面HLA-I類抗原的表達(dá)率分別為51.21±2.02%、79.04±2.66%、80.91±2.31%。2.pH=3、反應(yīng)時(shí)間為5 min、檸檬酸與血小板的體積比為5:1是檸檬酸洗脫血小板HLA-I類抗原最適宜的條件。3.檸檬酸能洗脫血小板表面約80%的HLA-I類抗原,血小板活化標(biāo)志物CD62P的表達(dá)率從4.17±3.54%增至8.89±5.70%(P0.05)。4.酸處理后血小板平均體積(mean PLT volume,MPV)、血小板分布寬度(PLT distribution width,PDW)分別從9.05±0.14 fL、8.53±0.28fL增至11.54±0.81 fL、11.08±0.68 fL(P0.05)。5.顯微鏡下酸處理后的血小板未見明顯的聚集。6.未處理組、PBS處理組、酸處理組的HSR值分別為51.65±6.56%、54.95±6.32%、62.05±8.14%。7.酸處理后的血小板代謝功能稍增強(qiáng)。8.TEG提示酸處理組和PBS處理組的血小板聚集功能均有所下降。結(jié)論:pH=3的檸檬酸能有效洗脫血小板表面大部分的HLA-I類抗原,但其洗脫過程對(duì)血小板的結(jié)構(gòu)、功能可造成一定程度的損害,臨床使用前應(yīng)充分衡量其利弊。酸處理血小板有望作為體內(nèi)含有HLA抗體的PTR患者的緊急輸血策略之一。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R446.6

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本文編號(hào)：2794847