【摘要】：研究背景創(chuàng)傷性休克后血腦屏障(Blood-brain Barrier,BBB)的動態(tài)損傷不明確;BBB損傷是否由NF-κB調(diào)控亦需進(jìn)一步研究;新型高選擇性膽堿受體阻滯劑鹽酸戊乙奎醚(Penehyclidine Hydrochloride,PHC)是否對創(chuàng)傷性休克后BBB損傷有保護(hù)作用及具體作用機(jī)制仍值得探討。在前期研究基礎(chǔ)上,本課題旨在探討創(chuàng)傷性休克后血腦屏障通透性動態(tài)變化規(guī)律、NF-κB信號通路對其的調(diào)控作用以及PHC的保護(hù)作用及分子機(jī)制。第一章 大鼠創(chuàng)傷性休克早期血腦屏障通透性動態(tài)變化[目的]探討創(chuàng)傷性休克后早期BBB通透性動態(tài)變化規(guī)律。[方法]復(fù)制創(chuàng)傷性休克大鼠模型。大鼠分為5組:Con、Shock、LR1h、LR2h、LR6h組。檢測各組腦組織含水量、熒光素鈉含量,電鏡觀察超微結(jié)構(gòu),qPCR法和Western blot法分別檢測NKCC1、VEGF、Occludin、Claudin-5mRNA和蛋白表達(dá)以及NF-κB p65蛋白表達(dá)。[結(jié)果]1.與con組比較,Shock組腦組織含水量和熒光素鈉含量顯著增加,血腦屏障超微結(jié)構(gòu)受損,NKCC1、VEGF和p65表達(dá)顯著增加,而occludin、claudin-5表達(dá)降低。2.創(chuàng)傷性休克常規(guī)乳酸林格液復(fù)蘇后6h內(nèi),隨時間延長,腦組織含水量和熒光素鈉含量遞增,血腦屏障超微結(jié)構(gòu)病理損害加重,NKCCI、p65表達(dá)遞增,而occludin、claudin-5 表達(dá)遞減。3.常規(guī)乳酸林格液復(fù)蘇后VEGF表達(dá)峰值與BBB通透性損傷變化趨勢不同步。4.NF-κB p65蛋白表達(dá)在復(fù)蘇后6h內(nèi)呈遞增趨勢,與BBB通透性變化吻合。[結(jié)論]創(chuàng)傷性休克及常規(guī)復(fù)蘇后6h內(nèi),BBB通透性隨時間延長而損傷加重,跨細(xì)胞途徑和細(xì)胞旁途徑均有受損,而VEGF和NF-κB可能均參與了BBB通透性動態(tài)損傷的病理過程。第二章 NF-κB信號通路在創(chuàng)傷性休克后血腦屏障通透性改變中的調(diào)控作用[目的]探討NF-κB信號通路在創(chuàng)傷性休克后BBB通透性變化中的調(diào)控作用。方法:大鼠分為4組:Con組、Shock組、LR6h組、PDTC6h組。其余方法同第一章。[結(jié)果]與LR6h組比較,PDTC6h組腦組織含水量和熒光素鈉含量明顯降低,NKCC1、VEGF和p65表達(dá)顯著下降,而occludin、claudin-5表達(dá)顯著增加。[結(jié)論]NF-κB通過調(diào)控細(xì)胞旁途徑和跨細(xì)胞途徑雙重途徑,直接參與了創(chuàng)傷性休克后繼發(fā)BBB通透性損傷的病理過程。第三部分 鹽酸戊乙奎醚(PHC)對創(chuàng)傷性休克后血腦屏障的保護(hù)作用及可能機(jī)制[目的]探討PHC對創(chuàng)傷性休克后BBB的保護(hù)作用及可能機(jī)制。[方法]大鼠分4組:Con組、Shock組、LR6h組、PHC6h組。其余方法同第一章。[結(jié)果]與LR6h組比較,PHC6h組腦組織含水量和熒光索鈉含量明顯降低,NKCC1、VEGF和NF-κB p65表達(dá)顯著下降,而occludin、claudin-5 表達(dá)增加。[結(jié)論]PHC能明顯減輕創(chuàng)傷性休克后BBB損傷,涉及跨細(xì)胞及細(xì)胞旁途徑,其機(jī)制不僅通過抑制VEGF表達(dá),還與抑制NF-κB活化有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R459.7
【圖文】：

由內(nèi)皮細(xì)胞、基底膜、星形膠質(zhì)細(xì)胞足突和周細(xì)胞組成。由此可知，ＢＢＢ是神逡逑經(jīng)血管單元的核心結(jié)構(gòu)，而血管內(nèi)皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接是構(gòu)成ＢＢＢ通逡逑透性的基礎(chǔ)［１９，２（）］，見圖１。因此，血液中物質(zhì)通過血腦屏障必須通過兩種途徑：逡逑穿內(nèi)皮細(xì)胞途徑（物質(zhì)從血液通過內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入腦組織）和細(xì)胞旁途徑（主要逡逑經(jīng)緊密連接）。相應(yīng)地，血腦屏障通透性的變化和調(diào)節(jié)也分為穿細(xì)胞途徑和旁細(xì)逡逑胞途徑兩個方面。逡逑緊密連接（Ｔｉｇｈｔ邋Ｊｕｎｃｔｉｏｎ，ＴＪ）位于血管內(nèi)皮細(xì)胞間頂端，是調(diào)節(jié)血腦屏逡逑障通透性的最主要分子結(jié)構(gòu)，亦是細(xì)胞旁途徑的主要組成部分。Ｏｃｃｌｕｄｉｎ邋（閉逡逑鎖蛋白）和Ｃｌａｕｄｉｎ－５邋（封閉蛋白）是兩種緊密連接結(jié)構(gòu)蛋白，對血腦屏障通透逡逑性起重要調(diào)節(jié)作用［２１’２２］：邋Ｏｃｃｌｕｄｉｎ主要發(fā)揮２種功能：①柵欄功能有助于細(xì)胞逡逑極性形成，阻止不同功能區(qū)之間的物質(zhì)互相擴(kuò)散；②屏障調(diào)節(jié)功能可以調(diào)節(jié)小逡逑分子運(yùn)輸，維持組織穩(wěn)態(tài)。Ｃｌａｕｄｉｎ－５對維持緊密連接的完整性及正常生理功能逡逑起著重要作用，是腦血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接中的特異性蛋白。研宄表明，大腦逡逑中動脈線栓法導(dǎo)致局灶性腦缺血后

鹽酸戊乙奎醚（Ｐｅｎｅｈｙｃｌｉｄｉｎｅ邋Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＰＨＣ）又名長托寧，是一種新逡逑型抗膽堿藥，化學(xué)結(jié)構(gòu)為３－（邋２－羥基－２－環(huán)戊基－２－苯基乙氧基）奎寧環(huán)烷，結(jié)構(gòu)式見逡逑圖２［３７］。ＰＨＣ對Ｍ受體亞型有高度選擇性，迄今為止，己在有機(jī)磷農(nóng)藥中毒及腎、逡逑膽絞痛的治療中得到廣泛應(yīng)用Ｍ受體是毒蕈堿型受體（ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ）逡逑的簡稱。Ｍ受體共分為三個亞型，其中型主要分布于腦和胃黏膜，Ｍ２亞型逡逑主要分布在神經(jīng)元突觸前膜和心臟，Ｍ３亞型受體則主要分布在腺體和平滑肌。逡逑ＰＨＣ對Ｍ２受體無作用，主要作用于ＭｊｎＭ３受體，因此，ＰＨＣ可緩解平滑肌痙攣、逡逑改善微循環(huán)而無心率加快等副作用。而且ＰＨＣ的半衰期遠(yuǎn)大于阿托品，達(dá)阿托品逡逑的２．５倍［３９］，解痙效果也比阿托品強(qiáng)［４（）］，從而可提供更長時間更強(qiáng)效的微循環(huán)改逡逑善作用。因其用藥次數(shù)減少，可節(jié)約醫(yī)療資源、增加易操作性及依從性。多項(xiàng)逡逑研宄證明［４１４４］，對于大鼠腦缺血－再灌注損傷和腦水腫，ＰＨＣ有明顯保護(hù)作用，逡逑但其具體作用機(jī)制尚未完全明確。另有研究表明

逑障中上述分子的病理表達(dá)，起到保護(hù)創(chuàng)傷性休克后血腦屏障通透性的作用。逡逑ＮＦ－ｋＢ通路示意圖及本研究立題假設(shè)見圖３，旨在探討創(chuàng)傷性休克早期血腦屏障逡逑通透性動態(tài)變化規(guī)律、ＮＦ－ｋＢ信號通路對其的調(diào)控作用以及ＰＨＣ對其的保護(hù)作用逡逑及分子機(jī)制。為臨床應(yīng)用ＰＨＣ來防治創(chuàng)傷性休克繼發(fā)腦損傷及ＭＯＤＳ提供進(jìn)一步逡逑的理論依據(jù)。逡逑創(chuàng)傷和休克逡逑邐邐逡逑ｆ逡逑胞d阱�，二厂逦辶x希苠危校齲緬逡種棋義轄猓跎馘義縣咤澹桑耍耍㈠危危疲耄洛宥坼義襄危掊翁迦胂赴隋義希掊味盞枷掠五義匣潁桑嘔虻膩義希危疲媯洛巫煎義希鄭眨忮五五五五義襄五義希ュ危桑耄路核鼗暗鞍酌附到�，暑^牛危疲耄洛義襄五五義習(xí)隋危掊義希

本文編號：2792097