【摘要】：抗生素相關性腹瀉(AAD)是使用抗生素后產生的腹瀉,也是抗生素最主要的副作用,隨著抗生素在臨床上濫用的現(xiàn)象增多,AAD不僅會增加患者住院感染的可能性,而且增加了住院的時間和費用,而目前針對于AAD還沒有已知的藥物治療方案。目前大多數(shù)研究都用益生菌干預來治療AAD,但對腸道屏障或免疫功能受損的患者使用益生菌可能會誘發(fā)危險因素。谷氨酰胺(Gln)在腸道內環(huán)境穩(wěn)定中起著關鍵作用,最近也有研究表明了Gln與腹瀉的關系,但其在AAD中的作用尚不清楚。因此,本研究利用克林霉素誘導構建AAD小鼠模型,以此研究Gln在改善AAD中的潛在作用并探究可能存在的機制。主要研究內容為:首先,將6周齡C57BL/6雄性小鼠隨機分成五組并監(jiān)測每組小鼠體重、攝食飲水量、糞便以及組織形態(tài),結果顯示,Gln可顯著減緩克林霉素導致的小鼠體重下降、脾臟腫大、結腸皺縮,并降低糞便含水量。分析Gln含量指標發(fā)現(xiàn),經克林霉素處理后的小鼠血漿和結腸的Gln含量均明顯下降且免疫凝膠分析結果顯示小鼠結腸谷氨酰胺合成酶蛋白表達量下調,SLC1A5表達量上升,發(fā)現(xiàn)機體對Gln攝取利用需求增強。然后分析小鼠糞便腸道微生物,發(fā)現(xiàn)Gln能大部分恢復失調的腸道菌群,并使短鏈脂肪酸尤其是丁酸含量顯著升高。并且Gln能降低血漿D-乳酸和內毒素水平,降低腸道通透性,同時升高結腸中緊密連接occludin和ZO-1的含量,降低促炎細胞因子IL-6以及TNF-α水平。最后,細胞劃痕試驗和細胞生長試驗進一步發(fā)現(xiàn)Gln對細胞生長和增殖具有促進作用,并構建脂多糖誘導的抗菌巨噬細胞活化模型,結果顯示Gln可使iNOS蛋白表達量顯著上調,且明顯升高細胞培養(yǎng)基上清液中NO含量,而當巨噬細胞活化時,能釋放大量NO來清除入侵的微生物,因此試驗發(fā)現(xiàn)Gln能促進巨噬細胞活化。綜合分析我們發(fā)現(xiàn):克林霉素的使用破壞了腸道黏膜屏障,致使有害物質進入,導致腸道菌群紊亂,尤其是產丁酸鹽菌株的減少,使得作為腸上皮細胞能量來源的丁酸含量減少,因而無法滿足結腸粘膜上皮細胞的能量供給需要,促使腸上皮細胞加速攝取利用Gln,而補充外源性Gln,無論是在干預組還是治療組,均可促進腸上皮細胞生長和增殖,修復受損的腸黏膜屏障,并可能通過促進抗菌巨噬細胞活化進而啟動宿主防御系統(tǒng),消除病原體,從而改善AAD。
【學位授予單位】：江南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R459.3;R574.62
【圖文】：

霉素的處理劑量通過動物與人體間的等效劑量以及文獻參考 周 250 mg/kg 的克林霉素來構建 AAD 模型[87]，干預組和治純凈飲用水中添加 1%的 Gln 來研究其對 AAD 小鼠的影響命名如圖 3-1 所示。

的小鼠結腸長度如圖 3-2（c）所示，表明經克林霉素處理p<0.001），而經 Gln 處理后，無論是干預組還是治療組，）。明，克林霉素的使用使小鼠體重下降明顯，脾臟腫大，結，可能與炎癥和免疫功能有關，而干預組和治療組的 Gln 食以及糞便含水量的變化可部分反應試驗期間小鼠的生長情況以及活動特點。試驗圖 3-3 所示，正常對照組小鼠的飲水量一直處于平穩(wěn)的水林霉素后，模型組小鼠的飲水量有一個較大幅度的上升，在一定程度上說明模型組小鼠開始有一些脫水現(xiàn)象產生是腹瀉癥狀的體現(xiàn)，停止灌胃后飲水量小幅度下降；干預降（p<0.01），治療組在開始接受 Gln 治療后飲水量明顯下組和治療組的飲水量基本與對照組處于同一水平。

圖 3-4 谷氨酰胺對小鼠攝食量的影響Fig. 3-4 Effect of glutamine on food intake in mice水量可以表征小鼠糞便軟硬程度以及腹瀉程度指標[98]。動物霉素處理后的第二天，小鼠開始出現(xiàn)不同程度的拉稀，糞便，而未經克林霉素處理的小鼠糞便呈成形硬狀，并通過采集量。糞便含水量如圖 3-5 所示，分析發(fā)現(xiàn)正常對照組小鼠糞平均含水量為 46.1%，模型組與對照組相比，糞便含水量升均含水量為 71.5%，說明模型組小鼠呈現(xiàn)出明顯的腹瀉癥狀便含水量降低了 25.4%（p<0.001），平均含水量為 53.3%，含水量降低了 27.2%（p<0.001），平均含水量為 52.0%。由治療組，Gln 均可顯著改善小鼠糞便稀軟的狀況，緩解腹瀉

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