【摘要】：研究背景及目的腹瀉是全球重要公共衛(wèi)生問題,大多由被污染的食物和水源造成。由細菌、病毒和寄生蟲引起的感染性腹瀉,是發(fā)展中國家普遍存在的問題。中國是感染性腹瀉負擔較高的國家之一。2017年,我國共報告感染性腹瀉發(fā)病1471990例,其中丙類傳染病(除霍亂、細菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉)發(fā)病1284644例,遠超過甲乙類腸道傳染病病例,可見對其他病原的檢測是十分必要的。但目前國內臨床實驗室對腹瀉病原菌的檢測主要為霍亂弧菌、沙門菌和志賀菌等甲乙類傳染病病原,卻忽略了對其他病原的檢測。氣單胞菌(Aeromonas)是一類兼性厭氧、無芽孢、氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌,在自然界生態(tài)環(huán)境中廣泛存在,尤其是水環(huán)境中。1961年人類首次從糞便當中分離到氣單胞菌,此后普遍被視為引起腹瀉的腸道致病菌。因臨床上對氣單胞菌缺乏重視,目前國內關于氣單胞菌流行、毒力特征和耐藥情況的資料較為缺乏。浙江省地處沿海,有較長的海岸線和豐沛的水資源,夏季溫暖濕潤的氣候極有利于氣單胞菌的生長,增加了感染的潛在風險。本研究收集了 2010年1月至2017年12月浙江省5家醫(yī)院急性腹瀉患者的糞便標本,進行病原學檢測,以闡明氣單胞菌的流行現狀,為臨床上科學地開展氣單胞菌的常規(guī)檢測提供依據;通過毒力基因的檢測明確氣單胞菌的毒力特征,為致病機制的研究奠定基礎;通過藥敏試驗獲得腹瀉患者氣單胞菌的耐藥譜,為臨床氣單胞菌相關性腹瀉的治療提供依據。方法2010年1月至2017年12月,從我國浙江地區(qū)5家合作醫(yī)院收集急性腹瀉患者的糞便標本。用常規(guī)微生物檢驗程序結合MALDI-TOF質譜鑒定對糞便標本中常見腸道致病菌進行分離培養(yǎng)及鑒定。用PCR方法和紙片擴散法(K-B法)分別對分離的氣單胞菌菌株進行毒力基因檢測和藥物敏感性試驗。收集患者病例資料,分析氣單胞菌相關性腹瀉病例的臨床特征。結果1.2010年1月至2017年12月,共納入符合急性腹瀉定義的病例25853例。檢出率居前三位的細菌性病原為致瀉性大腸埃希菌(23.02%)、副溶血弧菌(7.05%)和氣單胞菌(5.10%)。2.在8747例進行了氣單胞菌的培養(yǎng)及鑒定的病例中,男性與女性的檢出率無統計學差異(P0.05);不同年齡組的檢出率存在統計學差異(P0.001),以60歲以上老年人群最高,為6.70%;不同季節(jié)的檢出率差異也具有統計學意義(P0.001),夏季(6-8月)最高,為6.02%。3.糞便中僅分離到氣單胞菌的腹瀉病例占67.66%,在臨床上可出現腹痛(58.3%),嘔吐(19.3%)和發(fā)熱(12.9%)的癥狀。糞便主要為爛糊便(45.83%),其次為水樣便(29.69%)。分離到氣單胞菌混合其他病原的病例占32.34%,主要合并致瀉性大腸埃希菌(40例,11.98%)、副溶血弧菌(27例,8.08%)和類志賀鄰單胞菌(16例,4.79%)。4.636例氣單胞菌陽性患者糞便標本中共分離到688株氣單胞菌,其中587例僅分離到一種氣單胞菌,46例分離到兩種氣單胞菌,3例分離到三種氣單胞菌。587株單一分離的氣單胞菌包括9個菌種,其中以維氏氣單胞菌(194株,28.20%)和豚鼠氣單胞菌(182株,26.45%)為主。5.688株氣單胞菌中,97.5%的氣單胞菌攜帶至少一種毒力基因。gcaT、fla、alt、acg、ela、act和lip在氣單胞菌中的檢出率較高(37%);aexT、lafA、tapA、ompAII、ahp和aaopH在氣單胞菌中的檢出率較低(8%);多數毒力基因在嗜水、豚鼠和維氏三種氣單胞菌中的檢出率存在顯著性差異(P0.05)。6.氣單胞菌對除外頭孢西丁(63.37%)、四環(huán)素(61.63%)和亞胺培南(60.47%)的其他抗菌藥物的敏感性大于79%;對17種抗菌藥物的耐藥率均在27%以下;而對作為腹瀉治療一線藥物的喹諾酮類藥物的敏感性(85%)、中介敏感性(10%)和耐藥性(5%)均較理想。氣單胞菌對多數抗菌藥物的耐藥性在嗜水、豚鼠和維氏氣單胞菌這三個菌種間存在顯著性差異(P0.05)。結論1.氣單胞菌檢出率位列細菌性病原的第三位,建議將氣單胞菌納入夏秋季節(jié)腹瀉病原常規(guī)檢測。2.氣單胞菌不同菌種的毒力基因攜帶和耐藥性存在差異,臨床需區(qū)別對待。3.氣單胞菌對喹諾酮類藥物敏感性高,可作為臨床首選。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R574.62;R446.5
【圖文】：

浙江大學碩士學位論文邐正文實驗方法逡逑３．４．２分離培養(yǎng)逡逑在裝有標本的Ｃａｒｒｙ－Ｂｌａｉｒ培養(yǎng)基中，沾取棉簽標本，直接劃線接種血平板、逡逑麥康凱平板，３６±１°Ｃ培養(yǎng)１６？１８小時。再將棉簽置ＡＰＷ培養(yǎng)基管中，放３６士逡逑１°Ｃ增菌１２小時。取增菌后ＡＰＷ液接種慶大瓊脂平板和麥康凱平板，３６土１°Ｃ培逡逑養(yǎng)１６？１８小時。逡逑３．４．３菌落形態(tài)鑒定逡逑氣單胞菌在麥康凱平板上菌落均呈中等大小、濕潤且無色半透明，在慶大瓊逡逑脂平板上呈黑褐色、不透明菌落，而在血平板上為中等大小、灰白色、光滑濕潤逡逑突起、不透明的菌落，大多數具有溶血現象。逡逑

．分邐ＷＲ邐體積（（ｉｌ）逡逑邋ｘ邋Ｔａｑ邋Ｍａｓｔｅｒ邋Ｍｉｘ邋（Ｄｙｅ邋Ｐｌｕｓ）邐１２．５逡逑游引物邐１０）ｉＭ邐１．０逡逑游引物邐１0ｈＭ邐１．０逡逑ＮＡ邋模板邐５０－１００ｎｇ／Ｖｌ邐１．０逡逑ｄＨ２０邐９．５逡逑體積邐２５逡逑）邐ＰＣＲ擴增條件：預變性９４°Ｃ５ｍｉｎ；變性９４°Ｃ邋３０ｓ，退火溫度３０ｓ，延伸０００ｂｐ／ｍｉｎ，３５邋個循環(huán)；最后邋７２邋°Ｃ邋延伸邋５ｍｉｎ。逡逑）核酸凝膠電泳：取�。保校茫耶a物，在１．５％的瓊脂糖凝膠中進行電泳，電壓泳時間為２邋５邋ｍｉ邋ｎ，凝膠成像系統拍照后分析結果。逡逑

序驗證與結果分析：各毒力基因隨機選取１株ＰＣＲ陽性產物送至上海程股份有限公司進行序列測定，引物自帶。測序結果經美國國家生物心／局部序列比對基本檢索工具（Ｎａｔｉｏｎａｌ邋Ｃｅｎｔｅｒ邋ｆｏｒ邋Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌａｔｉｏｎ邋／Ｂａｓｉｃ邋Ｌｏｃａｌ邋Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ邋Ｓｅａｒｃｈ邋Ｔｏｏｌ，邋ＮＣＢＩ邋／ＢＬＡＳＴ邋）比對確認。逡逑氣單胞菌藥敏試驗逡逑分離到的氣單胞菌菌株統一采用紙片擴散法（Ｋｉｒｂｙ－Ｂａｕｅｒ）做體外藥物，藥敏紙片規(guī)格和對敏感、中介、耐藥的解釋標準參照美國臨床與實員會ＣＬＳＩ推薦的標準（ＣＬＳＩ邋Ｍ４５－Ａ３）［２６］，見表３。逡逑

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本文編號：2789358