發(fā)布時間：2020-08-10 20:29

【摘要】：目的:1.運用培養(yǎng)組學對健康及細菌性陰道病女性陰道樣本進行高通量培養(yǎng),探討高通量培養(yǎng)方法對陰道微生物群研究的意義。2.基于培養(yǎng)組學的培養(yǎng)結(jié)果,探討不同陰道微生物類型來源的陰道乳桿菌與陰道其他細菌的相互作用關(guān)系。方法:收集7例健康女性和8例細菌性陰道病女性的陰道分泌物,采用7種不同的培養(yǎng)基對陰道分泌物進行高通量培養(yǎng)并同時抽提細菌總DNA。對分離培養(yǎng)出的細菌使用Clin-ToF飛行時間質(zhì)譜結(jié)合16S rRNA進行細菌鑒定。同時采用16S rRNA V1V2可變域進行高通量測序�；谂囵B(yǎng)組學的結(jié)果,選取分離自1例健康女性及2例細菌性陰道病女性的菌株進行細菌相互作用研究。將乳桿菌與七種陰道相關(guān)細菌共培養(yǎng)0h、24h、48h及72h后,采用絕對實時定量PCR(qPCR)方法分析陰道細菌的相互作用關(guān)系。結(jié)果:1、通過對7例健康人及8例細菌性陰道病陰道分泌物樣本進行培養(yǎng)組學分析,共分離到1328株陰道細菌,隸屬于33個屬,92個種。其中最常分離到的屬為乳桿菌屬(Lactobacillus)、加德納菌屬(Gardnerella)和鏈球菌屬(Streptococcus),分別分離到535株、221株、146株。同時通過對7例健康人及8例細菌性陰道病陰道分泌物樣本進行16S rRNA V1V2域高通量測序,共檢出20個屬。其中乳桿菌屬(Lactobacillus)在所有樣本中都檢測到,在10個樣本中的相對豐度超過50%。兩者檢出重疊率僅24.24%。2、在同一個體內(nèi),健康樣本HV4中分離到的卷曲乳桿菌(Lactobacillus crispatus)對表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)和咽峽炎鏈球菌(Streptococcus anginosus)的生長有抑制作用。細菌性陰道病樣本BV4、BV7中分離到的詹氏乳桿菌對表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、咽峽炎鏈球菌(Streptococcus anginosus)、無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)、陰道阿托波菌(Atopobium vaginae)的生長同樣存在抑制作用,但惰性乳桿菌(Lactobacillus iners)對咽峽炎鏈球菌(Streptococcus anginosus)和無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)的生長無抑制作用。3、在不同個體內(nèi),每株乳桿菌對非乳桿菌的抑制能力是不同的。樣本HV4中的卷曲乳桿菌對樣本BV4中的非乳桿菌有抑制作用,而對樣本BV7中的非乳桿菌無抑制作用。樣本BV4中的詹氏乳桿菌對樣本HV4中的咽峽炎鏈球菌無抑制作用,對表皮葡萄球菌有抑制作用;對樣本BV7中的非乳桿菌均無抑制作用。樣本BV7中的詹氏乳桿菌和惰性乳桿菌除了對樣本HV4中的咽峽炎鏈球菌無抑制作用外,對其余非乳桿菌均有抑制作用。結(jié)論:1、通過高通量培養(yǎng)組學方法和高通量測序法對同一樣本陰道微生物群進行研究,結(jié)果差異較大,兩者的檢出重疊率僅24.24%。2、本研究發(fā)現(xiàn)陰道來源的4株乳桿菌對非乳桿菌有一定的拮抗作用,但不同株之間的抑制能力差異顯著,說明乳桿菌的抑制作用可能存在株的差異。對細菌相互作用的研究將有助于提高人們對菌群與人體健康的認識。
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R711.31;R446.5
【圖文】：

圖 2-1 三個陰道分泌物樣本宏基因組分析（界水平組成）Fig. 2-1 Metagenomic analysis of three vaginal samples (level of kindom)水平上分析，三個樣本僅檢測到 10 種微生物。樣本 11 中共檢測

圖 2-2 三個陰道分泌物樣本宏基因組分析（種水平組成）Fig. 2-2 Metagenomic analysis of three vaginal samples (level of genus)2.2 陰道菌群液體培養(yǎng)后的微生物組成及培養(yǎng)前后菌群組成變化的分析使用 TSB 羊血液體培養(yǎng)基，對 3 例正常人及 3 例細菌性陰道病患者的陰道

注：22×0 表示陰道棉拭子測序的菌群組成、Y22×1 表示陰道棉拭子有氧培養(yǎng)一代后的菌群組成、N22×1 表示陰道棉拭子厭氧培養(yǎng)一代后的菌群組成、Y22×5 表示陰道棉拭子有氧培養(yǎng)一五代后的菌群組成、N22×5 表示陰道棉拭子厭氧培養(yǎng)五代后的菌群組成圖 2-5 16S rRNA 基因 V1V2 域高通量測序分析樣本 22 的原代、一代、五代的菌群組成。

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